【正文】 查。 第四章 艾滋病檢測實驗室安全防護 一、 建立 安全 制度 （一） 實驗室的設(shè)備、建筑和設(shè)施 的安全性應(yīng)通過 專家 的評審 。 建立內(nèi)部質(zhì)量控制制度，每次檢測都應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照和空白對照；定量檢測需加入不同濃度的標準對照。 由專人按特定程序和方法進行清潔和消毒。 盡量減少人員由擴增后區(qū)返回擴增前區(qū)的頻度。不得逆向流動。 （三）儀器和材料的專用制度 儀器、設(shè)備、材料、設(shè)施均應(yīng)按工作區(qū)域進行標識，不得交叉混用。 “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國最大的學(xué)習(xí)資源平臺！ 免費培訓(xùn) : 免費下載 : 12 （二）嚴格執(zhí)行分區(qū)制度 按照要求嚴格進行實驗室分區(qū)。 五、實驗室管理 HIV 核酸檢測實驗室應(yīng)制定嚴格的管理制度，工作人員必須充分了解各項規(guī)定并嚴格遵照執(zhí)行。注意低于最低檢測限的結(jié)果不能排除 HIV 感染。 （二）定量檢測 按照儀器讀數(shù)報告結(jié)果，應(yīng)注明使用的試驗方法、樣品種類和樣品量。 HIV 核酸檢測陽性 , 可作為診斷 HIV 感染的輔助指標，不單獨用于 HIV 感染的診斷。 四、結(jié)果判定和報告 （一）定性檢測 通常根據(jù)擴增產(chǎn)物的電泳圖像判定結(jié)果，陽性結(jié)果還要進行核酸序列測定來確定。 （五）擴增產(chǎn)物測定和分析 常用的擴增產(chǎn)物測定方法有電泳、酶切、雜交等，應(yīng)在產(chǎn)物分析區(qū)內(nèi)操作。 將反應(yīng)管置于擴增儀上，開始擴增。 操作超過 10 分鐘時應(yīng)將反應(yīng)管置于冰盒內(nèi)。 （四）加樣和擴增 應(yīng)在樣品處理區(qū)內(nèi)加樣。 （三）試劑配制 應(yīng)在規(guī)定的區(qū)域內(nèi)由專人按相應(yīng)程序進行。 應(yīng)保證無細菌及核酸污染，實驗材料和容器應(yīng)經(jīng)過消毒處理并一次性使用。 處理后的樣品應(yīng)分裝、標記，凍存于 20℃以下， RNA 類樣品應(yīng)凍存于 80℃。 處理樣品應(yīng)在樣品處理區(qū)由專人進行。 三、檢測程序 （一）樣品的采集和處理 用于 HIV 核酸檢測的樣品有全血、血漿、組織和其他分泌物，有時還 包括生物制品。 目前常用的 HIV RNA 定量測定方法有逆轉(zhuǎn)錄 PCR 實驗（ RTPCR）、核酸序列擴增實驗（ NASBA）、分支 DNA 雜交實驗（ bDNA）等。 “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國最大的學(xué)習(xí)資源平臺！ 免費培訓(xùn) : 免費下載 : 10 二、方法和試劑 HIV 核酸檢測有定性 和定量兩類，前者用于 HIV 感染的輔助診斷，后者常用于監(jiān)測 HIV 感染者的病程進展和抗病毒治療效果。 （ 5）測定 HIV RNA 應(yīng)配備 80℃冰箱。 （ 3）擴增區(qū)：核酸擴增設(shè)備、冰箱、離心機、加樣器、廢棄物容器。以下是各區(qū)域應(yīng)配備的設(shè)備： （ 1）試劑準備區(qū)：冰箱、潔凈工作臺、離心 機、加樣器、振蕩器、廢棄物容器。 （三）設(shè)施和設(shè)備 根據(jù)檢測項目配備相應(yīng)的設(shè)施和設(shè)備。 各區(qū)域的儀器、設(shè)備、器具和試劑應(yīng)為該區(qū)專用，不得交叉使用。 ；封好污染材料盛放器皿并移出至污物袋；移出共用器具至專門區(qū)域保管；將次氯酸鈉溶液或 70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打 開紫外燈照射至少 15 分鐘。 、所需的試劑、耗材和樣品，進行試驗。 （ 4）用有效的方法對操作區(qū)域和共用器具在實驗前后進行清潔及消毒。 （ 2）每個實驗人員 /實驗組分別使用各自的 試劑 及耗材。 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進行少量試劑配制。 （ 4）擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的電泳、雜交、成像、測定、結(jié)果分析、登記及報告。 （ 2）試劑準備區(qū)：擴增試劑的配制、分裝和保存。各區(qū)的 功能是： （ 1）樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝。 第三章 HIV 核酸檢測 一、實驗室條件 （一）功能分區(qū) 實驗室原則上應(yīng)分為設(shè)在不同房間的四個獨立工作區(qū)，分別是試劑準備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。 HIV1 P24 抗原陽性 僅作為 HIV 感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診 。 （ 二 ） 試劑 一般用 ELISA 雙抗體夾心法試劑，必須經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管 理局批準注冊 。 第四代 HIV1 抗原 /抗體 ELISA 試劑檢測呈陽性反應(yīng)，但 HIV1 抗體確認陰性者的輔助 診斷。 送檢樣品 用兩種不同原理或不同廠家的試劑復(fù)測（其中包括第三代 ELISA 試劑） 第三代 ELISA 試劑復(fù)測結(jié)果的 S/CO 比值≥ 第三代 ELISA 試劑復(fù)測結(jié)果的 S/CO 比值 ~ 之間 確認試驗 判定陽性，上報疫情 判定陰性 兩種均陽性 兩種均陰性 一陰一陽 陽性反應(yīng) 陰性反應(yīng) 選用篩查試劑 陽性 陰性 “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國最大的學(xué)習(xí)資源平臺！ 免費培訓(xùn) : 免費下載 : 8 二、 HIV1 P24 抗原檢測 （一）適用范圍 HIV1 抗體不確定或窗口期的輔助診斷。 檢測及疫情報告流程圖 . （ 1） 即省級疾控中心艾滋病確認實驗室。 HIV 抗體陽性的判定條件 （ 1）兩種試劑復(fù)測均為陽性，且第三代 ELISA 試劑復(fù)測樣品 OD 值與臨界值（ Cutoff）的比值（ S/CO）≥ 。 HIV 抗體篩查試劑條件 （ 1）經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管理局批準或注冊、批批檢合格、臨床評估質(zhì)量 優(yōu)良。 HIV 抗體檢測情況報告流程圖 艾滋病篩查實驗室 艾滋病篩查中心實驗室 艾滋病確認實驗室 每季首月 5 日前 報告上季檢測情況 每季首月 10 日前 報告上季檢測情況 艾滋病確認中心實驗室 同級衛(wèi)生行政部門 國家艾滋病參比實驗室 省級衛(wèi)生行政部門 每季首月 15 日前 報告上季檢測情況 每季首月 20 日前 報告上季檢測情況 中國 CDC 性艾中心 每季首月 5 日前 報告上季檢測情況 沒有艾滋病篩查中心實驗室的地區(qū) “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國最大的學(xué)習(xí)資源平臺！ 免費培訓(xùn) : 免費下載 : 7 （七） HIV 感染監(jiān)測工作中實驗室檢測策略 符合下列實驗室條件、 HIV 抗體篩查試劑條件和 HIV 抗體陽性判定標準者，可按 HIV感染報告疫情。 在非送檢標本中（如專項調(diào)查與研究等）發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性者，亦應(yīng)填寫附表 4，報中國疾控中心性艾中心。 艾滋病確認中心實驗室應(yīng)及時收集、整理和分析轄區(qū)內(nèi) HIV 抗體檢測情況，于每季首月 15 日前向省級衛(wèi)生行政部門和國家艾滋病參比實驗室報告。 艾滋病篩查中心實驗室應(yīng)于每季度首月 10 日前將本實驗室和本轄區(qū)內(nèi)各篩查實驗室上季度報告的檢測情況（附表 4）匯總，報 告艾滋病確認中心實驗室。 HIV 抗體檢測情況的報告 艾滋病篩查實驗室應(yīng)于每季度首月 5 日前向上級艾滋病篩查中心實驗室報告上季度檢測情況（附表 4）。 省級艾滋病確認中心實驗室難以確認的標本，送國家艾滋病參比實驗室確認。如確認對象戶口不屬于本轄區(qū)，確認報告應(yīng)同時抄送感染者戶口所在地的省級艾滋病確認中心實驗室。 （ 3）做好檢測后咨詢。將前后二份樣品同時檢測，仍呈不確定或陰性 則報告 HIV 抗體陰性，如果在隨訪期間發(fā)生帶型進展，符合 HIV 抗體陽性判定標準則報告 HIV1 或 HIV2 抗體陽性。同時進行以下處理： （ 1）隨訪復(fù)查：每 3 個月隨訪復(fù)查一次，連續(xù) 2 次，共 6 個月。 HIV 抗體陰性應(yīng)出具 HIV 抗體陰性確認報告，如果近期有高危行為，如性亂、注射毒品等，或有急性流感樣癥狀等情況，為排除“窗口期”的可能，可以進行 HIV1 P24抗原或 HIV 核酸檢測，或 2— 3 個月以后再做抗體檢測。 （ 5）做好檢測后咨詢。 （ 4）篩查中心實驗室應(yīng)盡快用兩種試劑進行復(fù)測，如結(jié)果均陽性或一陰一陽，則應(yīng)將送檢標本和 HIV 抗體復(fù)查送檢單一并送艾滋病確認實驗室確認。 （ 2）盡 可能重新采集受檢者的血樣。 篩查 試驗 呈陽性反應(yīng)，可出具“ HIV 抗體待復(fù)查”報告（附表 1），不能出陽性報告。 上述標準為判定免疫印跡試驗結(jié)果的基本原則，在實際工作中還應(yīng)參照所用試劑的說明書綜合判定，遇疑難情況應(yīng)報上級實驗室解決。 ② HIV2 抗體特異條帶包括： env 帶： gp140/gp10 gp36； gag 帶： p5p2 p16； pol 帶： p6 p5 p34。）： 出現(xiàn) HIV 抗體特異帶，但不足以判定陽性。 HIV 抗體陰性（ ） 無 HIV 抗體特異帶出現(xiàn) 。 樣 品 篩查檢測 篩查試劑 陽性反應(yīng) 陰性反應(yīng) 重復(fù)檢測 原有試劑 加 另外一種篩查試劑 一陰一陽 均陰性反應(yīng) 均陽性反應(yīng) 送確認實驗室進行 確認 陰性報告 “好好學(xué)習(xí)天天向上” 打造中國最大的學(xué)習(xí)資源平臺！ 免費培訓(xùn) : 免費下載 : 4 HIV 抗體確認 試驗流程圖 （五）確認試驗結(jié)果的判定：使用免疫印跡法（ WB）確認時我國的判定標準為： HIV1 抗體陽性（ +） 至少有二條 env 帶（ gp41 和 gp160/gp120）出現(xiàn)，或至少一條 env 帶和 p24 帶同時出現(xiàn)。如果出現(xiàn) HIV2 型的特異性指示條帶，還需要用 HIV2 型免疫印跡試劑再做單一的 HIV2 型抗體確認試驗，呈陰性反應(yīng)，報告 HIV2 抗體陰性；呈陽性反應(yīng)的則報告 HIV2 抗體血清學(xué)陽性。 免疫印跡試劑有 HIV1/2 混合型和單一型。應(yīng)盡可能將重新采集的受檢者血液標本和原有標本一并送檢。 重復(fù)檢測 對篩查呈陽性反應(yīng)的標本用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑重復(fù)檢測。 嚴格遵守實驗室操作規(guī)程。 （二）檢測要點 嚴格按照試劑說明書操作，不得擅自更改。確認試劑包括免疫印跡 試劑 、條帶免疫 試劑 及免疫熒光試驗試劑。自采自供血的單位必須進行 HIV 抗體檢測，在尚未建立艾滋病篩查實驗室的偏遠地區(qū)可由經(jīng)過培訓(xùn)的技術(shù)人員在規(guī)定的場所用快速試劑進行血液篩查。目前