20xx人教版高中生物選修一5-2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段ppt同步課件-文庫吧資料
2024-11-24 22:30本頁面
【正文】 A片段的一種方法 ， 由高溫變性 、 低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期 ， 循環(huán)進(jìn)行 ， 使目的 DNA得以迅速擴(kuò)增 ， 其簡要過程如圖所示 。目的是使反應(yīng)液集中在離心管底部 ? 反應(yīng) ? 將離心管放入 P CR 儀中，設(shè)置程序進(jìn)行反應(yīng)：變性 → 復(fù)性 → 延伸 ? 3． 實(shí)驗(yàn)中 DNA含量的測定 DNA在 260 nm的紫外線波段有一強(qiáng)烈的吸收峰 ， 峰值的大小與 DNA的含量有關(guān) 。 1． PCR儀： PCR自動(dòng)化程度較高，參照下表設(shè)計(jì)程序即可。 (3)在 中添加反應(yīng)成分時(shí) ， 每吸取一種試劑后 ，移液器上的槍頭必須 。 3． 操作提示 (1)為 避免 等因素的污染 ， 實(shí)驗(yàn)中使用的一些用具在使用前必須進(jìn)行 。 (3)微量移液器：用于 。 如果沒有 PCR儀 ， 可用 3個(gè) 代替 ， 操作時(shí)按程序在 3個(gè) 中 PCR反應(yīng)的微量離心管 。 A． 94 ℃ 、 55 ℃ 、 72 ℃ B． 72 ℃ 、 55 ℃ 、 94 ℃ C． 55 ℃ 、 94 ℃ 、 72 ℃ D． 80 ℃ 、 55 ℃ 、 72 ℃ 解析 當(dāng)溫度上升到 90 ℃ (90～ 96 ℃ )以上時(shí) ， 雙鏈 DNA解聚為單鏈 ， 稱之為變性；當(dāng)溫度下降到 50 ℃ (40～ 60 ℃ )左右時(shí) ，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈 DNA結(jié)合；當(dāng)溫度上升到 72 ℃ (70～ 75 ℃ )時(shí) ， 溶液中的四種脫氧核苷酸在 Taq DNA聚合酶的作用下 ， 根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的 DNA鏈 ， 稱為延伸 。 (2)DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的 DNA序列 ，使該段固定長度的序列呈 “ 指數(shù)式 ” 擴(kuò)增 。 (3)延伸 溫度上升到 72 ℃ 左右 ， 溶液中的四種脫氧核苷酸 (A、 T、 C、 G)在 DNA聚合酶的作用下 ， 根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的 DNA鏈 。 1． 細(xì)胞內(nèi) DNA復(fù)制和細(xì)胞外 PCR擴(kuò)增的比較 (見下表 ) 項(xiàng)目 DNA復(fù)制 PCR擴(kuò)增 不 同 點(diǎn) 場所 細(xì)胞內(nèi) 細(xì)胞外 能量 ATP提供能量 不需 ATP提供能量 酶 解旋酶、 DNA聚合酶 耐熱的 TaqDNA聚合酶 是否有轉(zhuǎn)錄 伴有轉(zhuǎn)錄、產(chǎn)生引物 無轉(zhuǎn)錄、需加入兩種引物 特點(diǎn) 邊解旋邊復(fù)制， 半保留復(fù)制 體外迅速擴(kuò)增 循環(huán)次數(shù) 受生物體自身控制 30多次 緩沖液 不需要 需要人為控制 設(shè)備
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