【正文】 細胞制品檢驗 ， 將 3瓶樣品混合 ， 經(jīng) 3次凍融后 ， 接種細胞單層培養(yǎng) 4天 ， 傳第二代 ， 取培養(yǎng)物 ， 分別進行丙酮固定后 ， 以適宜的熒光抗體進行染色 。 如有死亡 ， 應(yīng)做病理學(xué)檢驗 ， 查明是否由于疫苗所致 。 （ 1） 用于雞的活疫苗檢驗 —— 檢查禽白血病病毒 用適于接種本疫苗日齡的 SPF雞 20只 ， 點眼 、 滴鼻接種 10個使用劑量 ， 肌肉注射 100個使用劑量 ， 接種后 21天 ， 按上述方法重復(fù)接種 1次 ， 第一次接種后 42天采血 ， 進行有關(guān)疫病的血清抗體檢驗 。 采用用補體結(jié)合 (COFAL)試驗 ， 即用 9～ 11日齡的 SPF雞胚 ，制成雞胚成纖維細胞單層 ， 將用特異性血清中和過的疫苗 (至少含 50個使用劑量 )接種于成纖維細胞單層上 ， 維持培養(yǎng)不少于 14天 ， 在此期間每隔 3~4天細胞繼代 1次 。 對雛雞觀察 15天 ， 不應(yīng)出現(xiàn)運動失調(diào) ， 或呈現(xiàn) AE組織病理變化的死亡 ，并至少有 9只胚孵出小雞 。 取雞胚液應(yīng)無血凝價 。 方法 1： 用 9~11日齡 SPF雞胚 20個 ， 分為 2組 ， 每胚各以 10個使用劑量接種 ， 第一組 10個胚接種于尿囊腔內(nèi)；第二組 10個胚接種于絨毛尿囊膜上 ， 在 37?C 培養(yǎng) ， 棄去在接種后 24小時內(nèi)死亡的胚 ， 但每組胚須存活 6個以上 。 用雞作檢驗用動物 ， 被檢樣品不做處理 。但用使用對象動物檢驗不合格者 ， 不能再以小動物重檢 。 ? 凡規(guī)定用多種動物進行安檢的制品 ， 如牛瘟兔化綿羊化活疫苗用小鼠和豚鼠兩種動物檢驗 ， 兩種均應(yīng)安全合格 。 在安檢期間 ， 如安檢動物有死亡時 ， 必須及時解剖明確原因 ， 在整個安檢期內(nèi)應(yīng)及時觀察動物健康情況 ， 并予以記錄 。 又如不同日齡的小鼠對豬丹毒的敏感性也下一致 ， 日齡過大敏感性差 。 除了動物的敏感性外 ， 動物的健康狀況也與安檢結(jié)果的正確判斷密切相關(guān) 。 安全檢驗用動物一般有品種要求 ， 譬如：豬丹毒以鴿和小鼠比較敏感；而豬肺疫則以家兔比較敏感 。 禽用疫苗苗則可直接以使用對象動物作安檢 。 1．安全檢驗的內(nèi)容 疫苗和免疫血清的成品安全檢驗方法主要是動物檢驗 ， 劑量應(yīng)大于使用劑量 。 因此歐洲藥典中明確規(guī)定豬瘟病毒應(yīng)經(jīng)過對胚胎毒性的檢查 。 1．安全檢驗的內(nèi)容 （ 4） 檢查對胚胎的毒性 有的病毒致弱毒株雖對免疫動物已經(jīng)致弱 ， 但還能通過孕畜影響胚胎 。 毒性檢查主要是對死菌苗或類毒素這類制品 ， 這類制品雖經(jīng)殺菌或脫毒 ， 但其本身的某些成分 ， 當(dāng)接種時可引起有害反應(yīng) ，即毒性反應(yīng) 。 如無毒炭疽芽孢苗菌種的毒力標(biāo)準(zhǔn)是在注射部位引起劇烈水腫 ， 家兔不死亡 ，豚鼠可死亡 1/2， 小鼠可全部死亡 。 1．安全檢驗的內(nèi)容 （ 3） 殘余毒力或毒性物質(zhì)檢查 殘余毒力是指生產(chǎn)疫苗類制品的菌 (毒 )種 ， 本身是活的減毒株或弱毒株 ， 允許有輕微毒力的存在 ， 能在接種的機體內(nèi)表現(xiàn)出來 。 1．安全檢驗的內(nèi)容 （ 2） 滅活或脫毒效果檢查 滅活疫苗都是以致病微生物加入甲醛或其它滅活劑滅活 ，而類毒素則是加入甲醛將毒素脫毒 。 活疫苗在采用細胞培養(yǎng)時 ， 可通過培養(yǎng)病毒的組織細胞帶來外來的病毒 ， 如：豬瘟兔化弱毒疫苗采用豬腎細胞培養(yǎng)時 ，有可能帶入野外豬瘟強毒；細胞培養(yǎng)多用犢牛血清 ， 血清就可能帶入牛病毒性腹瀉病毒 。 1．安全檢驗的內(nèi)容 檢驗外源性污染 滅活或脫毒效果檢查 殘余毒力或毒性物質(zhì)檢查 檢查對胚胎的毒性 （ 1） 檢驗外源性污染 不僅是因為有致病性細菌的污染 ， 而且即使是非病原菌 ，如數(shù)量過多 ， 其代謝產(chǎn)物也會影響安全 。 除此之外 ， 有些生物制品在需要的情況下 ， 還要進行支原體檢驗和衣原體檢驗 。 4. 雜菌計數(shù)及其病原性鑒定 凡用普通雞胚生產(chǎn)的各種弱毒疫苗 ， 將被檢物用劃線法接種麥康凱平板或 ， 經(jīng) 37?C培養(yǎng) 18～ 24小時后 ，挑選無色半透明 、 邊緣整齊 、 表面光滑并稍突起的菌落 2～ 3個 ， 分別接種于三糖鐵培養(yǎng)基 。 4. 雜菌計數(shù)及其病原性鑒定 （ 2） 病原性鑒定 —— 判定 小鼠 、 豚鼠均應(yīng)健活 。 如有細菌生長 ， 將培養(yǎng)物接種體重 350～ 450g的豚鼠之只 ，每只肌肉注射 1m1， 觀察 10天 。 取培養(yǎng)物用蛋白胨水稀釋 100倍 ， 接種體重 1820g的健康小鼠 3只 ， 每只皮下注射 ， 觀察 10天 。 如污染霉菌時 ， 亦作為雜菌計算 。 （ 1） 雜菌計數(shù) 每批污染制品至少抽樣 3瓶 ， 用肉湯或蛋白胨水分別作 50倍稀釋 ， 接種于含 4％ 血清及 ％ 血紅素的馬丁瓊脂 (或 )平板上 ， 每個樣品接種平板 2個 ， 臵 36?1?C培養(yǎng) 48小時后 ，再移臵室溫 24小時 ， 數(shù)雜菌菌落數(shù) (CFU)， 然后分別計算雜菌數(shù) 。 如發(fā)現(xiàn)個別瓶有雜菌或結(jié)果可疑時 ， 可重檢原瓶 (如為安瓶或凍干制品 ， 可重抽樣品 )， 如無菌或無雜菌生長 ， 可作無菌或純粹通過 。 如培養(yǎng)后混濁不易判定時 ， 可移植培養(yǎng)后再判定 。 (3) 血液制品和混濁制品 如未加防腐劑或抗生素 ， 可直接用不加瓊脂的 ， 接種量 、 培養(yǎng)條件 、 時間和判定標(biāo)準(zhǔn)同 2項 。 另用 1支 ， 接種 ， 臵 2536?1?C， 均培養(yǎng) 6天 。 自小瓶中吸取培養(yǎng)物 ， 分別接種 2支 ，每支 ， 1支臵 36?1?C， 1支臵 25?1?C 另取 1支 ， 臵 25?1?C， 均培養(yǎng) 5天 ， 應(yīng)無菌生長 。 厭氧及需氧性細菌檢驗 —— 硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 (T. G) —— 酪蛋白胨瓊脂 (G. A) 菌及腐生菌檢驗用 —— 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基 (G. P) 上述培養(yǎng)基均須用指定的需氧菌菌株 、 厭氧菌菌株及霉菌菌株做靈敏度測定 ， 達到標(biāo)準(zhǔn)后方能使用 。 診斷液每批抽樣 5瓶 。 應(yīng)隨機取樣 ， 樣品應(yīng)有確切的代表性 。 滅活疫苗不得含有活的本菌或本毒 。 上述各項檢驗項目 ， 主要是指成品檢驗 ， 但有的只用于某些制品 ， 如剩余水分檢驗和真空度測定 ， 只用于凍干制品；活菌計數(shù)和病毒含量只用于弱毒活疫苗等 。 規(guī)定所用種毒 種毒標(biāo)準(zhǔn) 毒力 含毒量 安全性 免疫原性 純凈 特異性 效檢用強度標(biāo)準(zhǔn) 保存期 生產(chǎn)用種毒標(biāo)準(zhǔn) 半成品檢驗 無菌檢驗 病毒含量測定 成品檢驗 物理性狀 無菌檢驗 支原體檢驗 鑒別檢驗 安全檢驗 用雞胚檢驗 用雞檢驗 效力檢驗 用雞胚檢驗 用雞檢驗 剩余水分測定 真空度檢驗 規(guī)定所用種毒 同低毒力活疫苗 種毒鑒定 同低毒力活疫苗 半成品檢驗 無菌檢驗 毒價檢驗 滅活檢驗 成品檢驗 物理性狀 外形 劑型 成品檢驗 物理性狀 外形 劑型 穩(wěn)定性 粘度 無菌檢驗 安全檢驗 效力檢驗 甲醛含量測定 三、獸用生物制品的質(zhì)量檢驗 生物制品的質(zhì)量檢驗 ， 應(yīng)從用于生產(chǎn)的菌種 、 毒種 、 蟲種和原材料到半成品的檢查 ， 直至最終的成品檢驗 ， 都屬于質(zhì)量檢查范圍 ， 應(yīng)貫穿于生產(chǎn)的始終 ， 即全面質(zhì)量管理 (TQC)。 產(chǎn)品生產(chǎn)出現(xiàn)重大質(zhì)量問題和嚴重安全隱患時 ， 應(yīng)立即停止生產(chǎn) ， 并及時向當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧行政管理機關(guān)報告 。 對用戶的產(chǎn)品質(zhì)量投訴和產(chǎn)品不良反應(yīng)作詳細的記錄和調(diào)查處理 ， 并連同原投訴材料存檔備查 。 按 GMP要求定期組織全面質(zhì)量檢查 ， 并接受上級部門的檢查和監(jiān)督 。 (3) 質(zhì)量管理 ③ 質(zhì)量自查與用戶意見的處理 按 《 獸用新生物制品管理辦法 》 的有關(guān)規(guī) ， 每批成品有銷售記錄 ， 其內(nèi)容包括品名 、 規(guī)格 、 批號 、 數(shù)量 、 收貨單位和地址及發(fā)貨日期 。 生產(chǎn)潔凈區(qū)及生產(chǎn)用水質(zhì)量監(jiān)測 。 質(zhì)量控制部門的主要職責(zé)和權(quán)限包括質(zhì)量監(jiān)督管理和質(zhì)量檢定兩個方面 。 GMP要求對生產(chǎn)全過程 ， 包括生產(chǎn)流程及記錄 、 檢定方法及結(jié)果 、半成品及成品轉(zhuǎn)移和成品標(biāo)簽等進行核對 ， 對制品轉(zhuǎn)移記錄及憑據(jù)和發(fā)出制品的檢驗報告等關(guān)鍵步驟及內(nèi)容應(yīng)進行雙核對 。 驗證的內(nèi)容包括制造工藝 、檢驗方法 、 原材料 、 設(shè)備 、 設(shè)施及操作人員等 。 所有檢驗用試劑 、 生產(chǎn)專用溶液 、 原液及半成品 ， 都應(yīng)貼有標(biāo)簽 ，注明品名 、 批號 、 日期及效價等 。 ? 記錄： 在實施 GMP管理中 ， 必須認真做好生產(chǎn)記錄 、 檢定記錄 、 銷售記錄及用戶意見與不良反應(yīng)記錄 。 ? 生產(chǎn)管理制度： 在實施 GMP管理中 ， 應(yīng)制訂生產(chǎn)管理制度 、 質(zhì)量管理制度 、