【正文】 片進行染色與鏡檢 。 (2) 非禽源細胞的活疫苗檢驗 —— 綠猴腎 (Vero)傳代細胞檢查法 檢測外源病毒時 ， 亦可采用致細胞病變和 (或 )紅細胞吸附試驗 。 紅細胞懸液應是豚鼠紅細胞 、 人 O型紅細胞 、 雞紅細胞的等量混合懸液 ， 混合或 分別滴加于不同的細胞單層上 。 若疑有外源病毒污染 ， 但又不能通過其它試驗排除這種可能性 ， 則作不合格處理 。 診斷制品 ， 則影響檢疫及診斷的正確性 。 否則即使是制品的免疫原性良好 ， 也收不到免疫效果 。 1．效力檢驗的內容 (4) 抗原量的測定 疫苗效力取決于接種動物的抗原量 ， 即一定量病毒 (細菌 )才能在體內增殖到一定程度 ， 促使機體產生免疫應答 。 當小動物檢驗如遇有某種原因難以判斷者 ， 可以改用制品使用對象動物檢驗 。 2．成品的效力檢驗 （ 1）動物保護力試驗 —— 使用動物的原則 這種方法是以待檢品接種動物 ， 經(jīng) 2~3周后 ， 用相應的強毒攻擊 。 如以豬檢驗則用易感豬 10頭 ， 其中 5頭接種疫苗 ， 每頭注射 1m1活疫苗 ， 14天后連同對照組 5頭 ， 每頭攻擊致死量的強毒 ， 免疫豬保護 4頭以上 ， 對照豬全部發(fā)病 ， 并有 2頭以上死亡 ， 疫苗為效力合格 。 （ 1）動物保護力試驗 —— 定量免疫變量攻擊法 將疫苗稀釋為各種不同的免疫劑量接種動物 ， 間隔一定時間 ， 各免疫組均用同一劑量強毒攻擊 ， 觀察一定時間 ，用統(tǒng)計學方法計算能使 50%的動物得到保護的免疫劑量 。 每一使用劑量 ()的效價應不低于50個 PD50。 某些活疫苗的菌數(shù)與保護力之間有著密切而穩(wěn)定的關系 ，因此 ， 可以不用動物來測保護力 ， 只需要進行細菌計數(shù) 。 （ 2）活菌計數(shù)與病毒量的滴定 —— 活菌計數(shù) 雞馬立克氏病活疫苗采用蝕斑計數(shù) ， 無論是 HVT還是 “ 814”疫苗都采用此法 ， 因為火雞皰疹病毒與馬立克病毒都能形成蝕斑 ， 蝕斑的數(shù)量又與雞保護率之間有直接而穩(wěn)定的關系 ，因此通過蝕斑形成單位 (PFU)測定進行檢驗 。 （ 2）活菌計數(shù)與病毒量的滴定 —— 蝕斑計數(shù)或其它滴定病毒量的方法 在我國的獸醫(yī)生物制品的成品檢驗中使用血請學檢驗方法 ，主要用于診斷用制品 。 在獸醫(yī)生物制品效檢中血清學方法有如下幾種： （ 3）血清學試驗檢驗方法 A. 凝集試驗 凝集試驗有試管法與平板法兩種 ， 前者為布魯氏茵試管凝集試驗抗原與陰陽性血清的檢驗等 ， 后者為布魯氏菌平板試驗抗原檢驗等 。 （ 3）血清學試驗檢驗方法 D. 補體結合試驗 這在很多診斷用制品中常用 ， 如牛肺疫補體結合試驗抗原 、 馬傳染性貧血補體結合試驗抗原 、 布魯氏菌補體結合試驗抗原等 。 （ 3）血清學試驗檢驗方法 F. 類毒素單位的測定 在獸醫(yī)生物制品中 ， 破傷風類毒素的效檢用免疫動物攻標準毒素法 。 B. 熱型反應與發(fā)病觀察 如牛瘟活疫苗 ， 用綿羊效檢 ， 規(guī)定應有 2/3羊為定型熱反應 。 因此實驗動物的規(guī)格化 ， 應是生物制品中一個重要問題 。這種試驗主要用于： ① 生物制品的試驗 ， 即根據(jù)生物制品的性狀 (生物學 、 理化方面等 )進行核實檢查 。 不同的制品采用不同的方法 ， 如中和試驗 、 凝集試驗 、 沉淀試驗 、 間接血凝試驗 、 血凝試驗 、 抑制血凝試驗以及菌種形態(tài)和培養(yǎng)特性檢查等 。 如炭疽芽孢苗靜臵后為透明液體 ， 瓶底應有少量白色沉淀 。 裝量 、 封口 、 瓶簽同時檢查 。 凍干制品都要求測定水分含量 ， 水分含量高低 ， 直接影響制品的質量和保存 。 水分計算公式為： 含水分 ％ ?（ 樣品干前重 千后重 ） /干前重 X l00 3．干燥制品剩余水分檢驗 (2) 卡氏測定法 卡氏測定法是利用化學方法來測定制品的含水量 。 在上述兩種方法中卡氏法要求更高 ， 雨天不宜進行 ， 且化學藥劑的配制標化保存都比較麻煩 ， 所以一般部使用真空法 。 我國新動物生物制品的管理 1. 目前動物生物制品生產及檢驗規(guī)程的審批程序是： 按新制品要求準備詳細資料，向中國獸藥監(jiān)察所申報，然后交中央農業(yè)部獸藥規(guī)程委員會審定，審定認可后列入《 規(guī)程 》 ，正式生產、銷售和使用。 新制品申報的資料應包括： 新制品只能在經(jīng)獸藥規(guī)程委員會審定認可后方可正式生產、銷售。新制品可按國家新制品管理要求申報列入 《 規(guī)程 》 。 真空測定的方法是通過高頻火花真空測定器來測定 ， 凡容器內出現(xiàn)白色 、粉色或紫色輝光者為合格 。 其原理為：因水分能與碘 、 二氧化硫發(fā)生作用 ， 因一分子水與一分子碘作用后 ， 大量碘能與微量水起反應 ， 碘即變?yōu)榈饣?， 溶液由原來的棕紅色 ， 吸水后變?yōu)闊o色 ， 可用肉眼來觀察終點 ， 計算制品的含水量 。 測剩余水分的方法有兩種 。 如為安瓶應無裂口及燒焦物 。 2． 物理性狀檢驗 (2)血清制品 所有血清都應為微帶乳光橙黃色或茶色清朗液體 ， 不應有搖不散的絮狀沉淀與異物 。 B. 培養(yǎng)特性的檢驗 常用于細菌滅活疫苗 ， 如仔豬副傷寒活疫苗 ， 由于該菌種是通過一定濃度的醋酸鈍減弱的 ， 在醋酸鉈普通肉湯中均勻混濁生長 ， 而仔豬副傷寒強毒菌株不能在此種培養(yǎng)基中生長 ， 可用此鑒別 。 目前我國規(guī)程中有不少制品有此檢驗規(guī)定 。有些獸用生物制品菌數(shù)不僅是質量標準而且是量的標準 ， 而培養(yǎng)基質量不一致時 ， 菌數(shù)就會出現(xiàn)較大的差異 ， 因此培養(yǎng)基質量規(guī)格是影響效驗的另一因素 3. 影響效力檢驗的因素與應注意的問題 (3)增設標準品對照 在我國獸醫(yī)生物制品中 ， 除破傷風抗毒素 、 雞馬立克氏病活疫苗和一些診斷用制品使用標準品或參照品作為對照外 ， 其它制品還沒有標準品或參照品作為對照 ， 這對正確評價制品效力會有影響 。 （ 4）其它效檢方法 (1) 檢驗動物的影響 效力檢驗目前主要還是以動物保護試驗為主 。 結合力單位的測定是利用抗原抗體反應原理 ， 并通過動物觀察類毒素與抗毒素結合的程度來判斷類毒素的質量 。 例如： 如破傷風抗毒素單位的測定 ， 是將被檢血清不同倍數(shù)稀釋與定量標準毒素中和 ， 同時以標準血清與定量標準毒素作對照 ， 用小鼠來測定 ， 以與對照動物死亡時間相近的最高稀釋度數(shù)的一半 ， 即為待檢血清的抗毒單位 。 （ 3）血清學試驗檢驗方法 C. 中和試驗 中和試驗用于獸醫(yī)生物制品的效力檢驗比其它血清學方法應用較多 ， 在疫苗中除牛瘟與馬傳貧疫苗以外 ， 尚有小鵝瘟活疫苗 ， 一些梭菌屬滅活疫苗等 。在其它生物制品中也有少數(shù)使用血清學方法檢驗的 ， 如牛瘟活疫苗 ， 在效檢時當體溫反應可疑時可用體溫可疑牛的血清以免作中和試驗以判定其效力 。 雞新城疫低毒力活疫苗測其 EID50， 每頭份 EID50≥ 106為合格 。 如無毒炭疽芽孢苗計活芽孢數(shù) ， 每毫升含活芽孢數(shù)應在500萬～ 2023萬之間 。 例如： 炭疽血清檢驗 ， 用 8只豚鼠 ， 每組 4只 ， 分別注射被檢血清 1ml，24小時后 ， 連同不注血清對照豚鼠 4只攻擊致死量的炭疽芽孢液 ， 如對照組 7天內全死 ， 兩組免疫豚鼠共健活 6只以上；或對照組死亡 3/4，免疫組全部健活時 ， 血清為合格有效 。 3~4周后 ， 每只雞肌肉注射 105ELD50的強毒 ， 觀察 14天 。 免疫動物均用同一劑量的制品接種免疫 ， 經(jīng)一定時間后 ，與對照組同時用不同稀釋倍數(shù)強毒攻擊 ， 比較免疫組與對照組的存活率 。 （ 1）動物保護力試驗 —— 定量強毒攻擊法 例如： 豬丹毒活疫苗效檢 ， 用小鼠 10只 ， 每只注射 疫苗 ， 14天以后連同未接種的小鼠 3只攻擊 1000個小鼠 MLD強毒 ， 另 3只攻 1個 MLD。 有的制品沒有相應小動物 ， 只能用使用對象動物檢驗 ， 如抗豬瘟血清與羊痘活疫苗只能用豬和羊效檢 。 所以 ， 常以測定抗原量來檢查制品的效力 ， 當然實驗室的檢定指標應和使用效果一致 。 免疫持續(xù)期通常是在選育菌 (毒 )種時測定 。 如制豬丹毒滅活疫苗的菌種應選擇 2型菌 ， 因為 2型菌株免疫原性良好 ， 試驗證明對其它菌型也有免疫力 。 效力不好的制品 ， 如為疫苗和類毒素 ， 則無法有效地控制疫情 。 若無明顯的紅細胞吸附現(xiàn)象可重復一次 ， 在細胞單層加入紅細胞懸液后臵 20～ 25?C培養(yǎng) 30 min， 用 PBS洗滌 ， 再次檢查紅細胞吸附情況 。 A. 致細胞病變的檢測 取經(jīng)傳代后培養(yǎng)至少 7天的細胞單層 (每個 cm2)1個或多個 ，用適宜染色液 ， 對細胞單層進行染色 ， 觀察細胞單層 ， 檢查包涵體 、 巨細胞的數(shù)目異常或其它由外源病毒引起的細胞病變的出現(xiàn)情況 。 若被檢組出現(xiàn)不明顯熒光 ， 必須重檢 ， 重檢仍出現(xiàn)不明顯熒光 ， 為不合格 。 （ 1） 用于雞的活疫苗檢驗 —— 用雞檢查方法 細胞制品檢驗 ， 將 3瓶樣品混合 ， 經(jīng) 3次凍融后 ， 接種細胞單層培養(yǎng) 4天 ， 傳第二代 ， 取培養(yǎng)物 ， 分別進行丙酮固定后 ， 以適宜的熒光抗體進行染色 。