【正文】 感，在 2%醋酸中或 50%的食醋中 1分鐘即可死亡。主要引起食物中毒，尤以日本、東南亞、美國及我國臺北地區(qū)多見，也是我國大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見的一種病原菌。該菌存在于近海的海水、海底沉積物和魚類、貝殼等海產(chǎn)品中。n CHROMagar O157：較多的非 O157菌落生長，菌落較大，影響 O157菌的檢出n 改良 CHROMagar O157：非 O157細(xì)菌生長較少且菌落相對局限， O157菌落特征性明顯。n 菌落識別、初步生化試驗 、鑒定 同常規(guī)法。1℃ 培養(yǎng)18～ 24h。 n n 用漩渦混合器將免疫磁珠混勻，用加樣器各取 50μL免疫磁珠懸液分別轉(zhuǎn)移至 CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板一側(cè)，然后用涂布棒將免疫磁珠涂布平板的一半，再用接種環(huán)劃線接種平板的另一半。 使用多塊磁珠分離裝置時，磁鐵與磁鐵應(yīng)遠(yuǎn)離放置。 吸取上清液至磁珠聚集物處時，應(yīng)放慢速度。重復(fù)上述步驟 ～ 。如果在后續(xù)的洗滌過程中也這樣做的話，脂肪的影響將減小，也可達到充分捕獲的目的。n 免疫磁珠的滑落：某些樣品特別是那些富含脂肪的樣品，其磁珠積聚物易于滑落到管底。如吸取的上清液內(nèi)含有磁珠，則應(yīng)將其放回到 Eppendorff管中，并重復(fù) 2. 4步驟。n 吸取上清液：取 1支滅菌的加長吸管，從免疫磁珠聚集物對側(cè)深入液面，輕輕吸走上清液。n 捕獲：將磁板插入到磁板架中濃縮磁珠。 用手轉(zhuǎn)動時應(yīng)輕輕顛倒 Eppendorff管架，不可劇烈搖動。 注意室內(nèi)溫度 ，保證結(jié)合時間。對照同時做。對照同時做。取樣前混勻，避開脂肪層與雜質(zhì)，必要時使用濾網(wǎng)。每個。避免產(chǎn)生泡沫。在漩渦混合器上輕輕振蕩，用開蓋器打開每個 Eppendorff管的蓋子，每管加入 20μL　 O157免疫磁珠懸液。二、免疫磁珠捕獲法二、免疫磁珠捕獲法操作步驟操作步驟n 1. 增菌：同常規(guī)法。n 進行生化試驗時應(yīng)是用新鮮培養(yǎng)物（ 24h）。n CCP:先做 O157血清凝集，后做 H7因子凝集，注意自凝菌，用生理鹽水做對照。血清凝集試驗應(yīng)做生理鹽水對照。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，并進行下列鑒定。 在 TSI瓊脂中，典型菌株為斜面與底層均呈陽性反應(yīng)呈黃色，產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生 H2S。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h。大部分非O157 ，仍有 6%不發(fā)酵山梨醇，它們與摩根氏菌和哈夫尼亞菌一樣在 TCSMAC上表現(xiàn)為與 O157相同的菌落特征。n 涂布時應(yīng)適當(dāng)稀釋。 n 增菌后的肉湯在取樣前，應(yīng)輕微搖晃混勻。在 CTSMAC平板上，發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色； 典型菌落為不發(fā)酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無色菌落，中心呈現(xiàn)較暗的灰褐色， 用接種針挑起時無拉絲現(xiàn)象 。1℃ 培養(yǎng) 18～ 24h，觀察菌落。同時做陽性及陰性對照。于36177。1℃ ↓ 18～ 24hn 挑取可疑菌落 5～ 10個 ,氧化酶陰性 ,革蘭氏陰性桿菌 接種 TSIn ↓n MUGLSTn 36177。大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌 O157:H7/NM檢驗檢驗一、一、 常規(guī)方法常規(guī)方法n 檢樣n ↓n 25g(mL)+改良 EC肉湯 (mEC+n） 225mln 快速篩選 陰性 n 36177。如果只鑒定到 O群，沒有得出抗原的分型結(jié)果，往往不是沙門氏菌。n 沙門氏菌抗原的研究已有近一百年的歷史，實驗者應(yīng)當(dāng)熟悉抗原的相關(guān)理論。n 二是因為菌株的抗原性發(fā)育不良，特別是 H抗原。n 一是因為因子血清的效價不高，難以覆蓋所試驗的菌株。如果這個血清型具有K抗原，一般在 O抗原分群以后再檢查。n 一般先按照 O抗原分群，然后。血清學(xué)分型血清學(xué)分型n 沙門氏菌具有 O抗原、 K抗原和 H抗原。其中對腸桿菌科細(xì)菌鑒定重要的試驗有：氰化鉀、 。使用者應(yīng)該對該表進行審查，認(rèn)為編碼表的數(shù)據(jù)可信。該儀器對細(xì)菌作出的分類鑒定應(yīng)該是按照權(quán)威的細(xì)菌生化特性表作出的?！恫苁舷到y(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊第二版》于 2023年出版，法默應(yīng)邀作為該書中《腸桿菌科》的作者。附表使用說明n A1尿素 氰化鉀 賴氨酸 判斷結(jié)果 甲副 + + 沙門氏菌 Ⅳ 和 Ⅴ + + 沙門氏菌個別變體n A2 甘露醇 山梨醇 判斷結(jié)果 + + 沙門氏菌 靛 + 緩慢愛德華氏菌 B1 ONPG 沙門氏菌屬 ONPG + 大腸埃希氏菌屬腸桿菌科細(xì)菌生化特性腸桿菌科細(xì)菌生化特性n 近一百年以來，有許多學(xué)者，為積累腸桿菌科細(xì)菌的生化特性資料，付出了辛勤的勞動。主要用于沙門氏菌的鑒定，根據(jù)情況再補充幾項試驗，可以準(zhǔn)確地鑒定腸桿菌科中最常見的 12個屬。沙門氏菌屬和有關(guān)細(xì)菌的鑒別沙門氏菌屬和有關(guān)細(xì)菌的鑒別 2n 不過，沙門氏菌和大腸埃希氏菌的鑒別有一點例外，因為在沙門氏菌屬內(nèi)有硫化氫陰性的菌株，偶爾也有靛基質(zhì)陽性的菌株；在大腸埃希氏菌種內(nèi)，也有少數(shù)靛基質(zhì)陰性的菌株，偶爾也有硫化氫陽性的菌株。n 不過，甲型副傷寒血清型是賴氨酸陰性的，沙門氏菌 IV和 V是氰化鉀陽性的。n 現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)采用了 (1)亞硒酸鹽胱氨酸增菌液，和 (2)四硫磺酸鹽孔雀綠增菌液。才使我們理解到 25克無是應(yīng)該在 25克食品中不能帶有 1個沙門氏菌。n 自從 PCR試驗技術(shù)推廣應(yīng)用以后，認(rèn)為此項技術(shù)能夠在 n 關(guān)于食品中是否帶有沙門氏菌，各個國家的標(biāo)準(zhǔn)基本上是一樣的，即： 25克無。n 培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，最適溫度 37℃ ， n 營養(yǎng)要求：不高，普通培養(yǎng)基生長良好。SC+TTBn 選擇性平板分離培養(yǎng)：BS+XLD/HE/顯色培基n 生化試驗：鑒定分離出來的細(xì)菌是否符合沙門氏菌的生化譜，可采用API 20E等成套生化試劑n 血清學(xué)鑒定：特異性診斷血清鑒定到種。沙門氏菌檢驗沙門氏菌腸道傳染病沙門氏菌腸道傳染病 人類沙門氏菌病分為兩大類 : 1 、 傷寒與副傷寒 :在世界范圍內(nèi)顯著下降 ,我 國仍有散在發(fā)生 , 時有局部暴發(fā)流行 . 2 、 沙門氏菌急性胃腸炎 :在世界 ,在我國呈 上升趨勢 ,通過動物廣泛分布 ,家禽和豬是 主要的儲存宿主 ,在食品和許多動物制品 中發(fā)現(xiàn) ,是傳播的主要原因 . 沙門氏菌食物中毒 引起食物中毒最常見的沙門氏菌：鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌 易引起沙門氏菌中毒的食品：肉、蛋、乳類食品 中毒原因： 食用病畜禽的肉制品食品 病畜禽、帶菌人和動物使食品受污染 用不潔凈水外理食品沙門氏菌檢驗流程沙門氏菌檢驗流程n 前增菌：用無選擇性的培養(yǎng)基使處于瀕死狀態(tài)的細(xì)菌恢復(fù)活力 。n 2) 選擇菌落數(shù)在 15~150之間的稀釋度，平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之；n 3) 如果所有稀釋度測試片上的菌落數(shù)都小于 15, 則計數(shù)稀釋度最低的測試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之；n 4) 如果所有稀釋度的測試片上均無菌落生長，則以 ()1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之；n 5) 如果最高稀釋度的菌落數(shù)大于 150個時，計數(shù)最高稀釋度的測試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之；n 6) 計數(shù)菌落數(shù)大于 150個的測試片時，可計數(shù)一個或兩個具有代表性的方格內(nèi)的菌落數(shù)，換算成單個方格內(nèi)的菌落數(shù)后乘以 20即為測試片上估算的菌落數(shù) (圓形生長面積為 20 cm2)。當(dāng)培養(yǎng)區(qū)域出現(xiàn)大量氣泡，大量不明顯小菌落或培養(yǎng)區(qū)呈暗紅色三種情況，表明大腸菌群的濃度較高，需要進一步稀釋樣品來獲得準(zhǔn)確的讀數(shù)。 紅色有氣泡的菌落 確認(rèn)為大腸菌群數(shù)。 1?C培養(yǎng) 24h?2h。拿起壓板， 靜置至少 1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。 樣品的接種與培養(yǎng)n 將待檢樣品選取適宜的 2~3個連續(xù)稀釋度 , 每個稀釋度接種 2張 測試片。樣品 pH的調(diào)節(jié)同大腸菌群 MPN法中樣品 pH的調(diào)節(jié)。培養(yǎng)結(jié)束后計數(shù)紅點周圍有氣泡的菌落為大腸菌群數(shù)。結(jié)果報告單位不同n 原方法： M