免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)-文庫吧資料
2025-08-11 03:17本頁面
【正文】 的熒光，進(jìn)而對組織中的某種抗原進(jìn)行定性、定位和定量分析 。組織切片中各類抗原性物質(zhì)，如各類蛋白質(zhì)、酶、激素、細(xì)胞、病毒、腫瘤抗原、漿細(xì)胞中的免疫球蛋白、各種多肽、細(xì)胞表面標(biāo)志等均可檢測。尤其是雙橋PAP法，是當(dāng)今免疫組化技術(shù)中敏感性較高的方法。 人民衛(wèi)生出版社 （三）方法評價 該技術(shù)既可檢測抗原，又可檢測抗體。 APAAP法就是以堿性磷酸酶代替 HRP建立的堿性磷酸酶（ AP） 抗堿性磷酸酶（ AAP）法，簡稱 APAAP法。 人民衛(wèi)生出版社 （二）技術(shù)類型 用辣根過氧化物酶（ HRP）免疫動物（如兔）制備抗 HRP的抗體（ Ab3），經(jīng) Ab2（如羊抗兔）作橋，將結(jié)合在組織抗原上的 Ab1(兔抗相應(yīng)組織抗原的抗體 )與 Ab3連接起來，最后將 HRP與 Ab3結(jié)合形成 AgAb1Ab2Ab3HRP復(fù)合物，加底物顯色 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 ? 即過氧化物酶（ P） 抗過氧化物酶（ AP）法，為酶橋法的改良，技術(shù)要點(diǎn)基本上與酶橋法相同，但該法將抗酶抗體（抗過氧化物酶（ AP））與酶（過氧化物酶（ P））制成了可溶性復(fù)合物（ PAP） ,該復(fù)合物由 2個抗酶抗體和 3個過氧化物酶分子組成，呈五角形，非常穩(wěn)定。 人民衛(wèi)生出版社 一、標(biāo)本制作 ? 常用的標(biāo)本有組織切片、組織印片和細(xì)胞涂片 ? 酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)可分為 酶標(biāo)記抗體免疫組織化學(xué)染色法 非標(biāo)記抗體酶免疫組織化學(xué)染色法 人民衛(wèi)生出版社 二、酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色法 （一）原理 酶標(biāo)記抗體的免疫組織化學(xué)染色法是借助交聯(lián)劑的共價鍵作用將酶直接連接在抗體（或抗抗體）上，酶標(biāo)抗體（或抗抗體）與組織內(nèi)特異抗原或抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)后，通過酶對底物的催化作用，生成不溶性有色產(chǎn)物并沉淀在特定位置，達(dá)到對抗原定性、定位、定量檢測的目的。陽性細(xì)胞的染色常定位于細(xì)胞，并與陰性細(xì)胞間有明顯間隔 而非特異性染色常不限于單個細(xì)胞，常為成片的細(xì)胞 在過大的組織塊，中心固定不良也會導(dǎo)致非特異性顯色 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 六、質(zhì)量控制 ? 質(zhì)量控制是免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)取得滿意結(jié)果的必要條件。 人民衛(wèi)生出版社 （二）陽性結(jié)果 ? 陽性細(xì)胞的顯色可位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 ? 免疫顯色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞密度是定性、定量指標(biāo) ? 陽性細(xì)胞的著色形態(tài)（如胞膜型、胞核型、胞質(zhì) (漿 )型等）及組織分布特點(diǎn)（如局灶型、彌漫型、片塊型等）主要是定位指標(biāo) ? 哪怕只有少數(shù)細(xì)胞陽性（只要是抗原所在部位）也應(yīng)視為陽性表達(dá) 人民衛(wèi)生出版社 （三）陰性結(jié)果 陰性結(jié)果不能簡單視為抗原不表達(dá)，由于染色方法靈敏度有高低之分，有時可因靈敏度不夠，而導(dǎo)致陰性反應(yīng)。 人民衛(wèi)生出版社 是指用于證實(shí)在免疫組化染色中所用試劑（尤其是特異性抗體試劑的有效性和可靠性）而設(shè)立的同步免疫染色對照，包括有：空白對照、替代對照、吸收試驗(yàn)和抑制試驗(yàn)等。 用確證不含已知抗原的標(biāo)本作對照，應(yīng)呈陰性結(jié)果，稱陰性對照。 用已知抗原陽性的切片與待檢標(biāo)本同時進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。 ②灌注法 — 適用于動物實(shí)驗(yàn)研究。 （一）標(biāo)本的主要來源 主要有： ①活體組織 ②各種體液及穿刺液 ③培養(yǎng)細(xì)胞等
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