免疫組織化學(xué)檢驗技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 度精確、靈敏的方法。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子 (如 SPA)等作為探針，能對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性、定位或定量研究。 ? 標(biāo)記了相應(yīng)示蹤物的凝集素可用來： ①作為細胞分化和成熟的標(biāo)記 ②作為細胞特殊類型的標(biāo)記 ③腫瘤細胞伴有細胞膜的改變，細胞膜上的糖基也會產(chǎn)生相應(yīng)的變化，也可用凝集素檢測出腫瘤細胞。 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 四、凝集素法 ? 一種凝集素具有專一性結(jié)合某種特異性糖基的能力，同時所有生物膜都含有一定量的糖類，后者主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。每個 SPA分子可同時結(jié)合兩個 IgG分子，也可一方面同 IgG相結(jié)合，一方面與標(biāo)記物如熒光素、過氧化物酶、膠體金和鐵蛋白等相結(jié)合。細胞的抗原（或通過一抗）先與生物素化的抗體結(jié)合，繼而將標(biāo)記親和素結(jié)合在抗體的生物素上，如此多層放大，提高了檢測抗原的敏感性。 ? 用于親和組織化學(xué)的物質(zhì)有生物素與親和素、植物凝集素與糖類、 SPA與 IgG、鏈霉親和素與生物素等。溫育后充分洗滌、干燥、鏡檢。 人民衛(wèi)生出版社 二、熒光抗體標(biāo)記及染色 ? 熒光抗體是熒光免疫技術(shù)的關(guān)鍵試劑，是將熒光素與特異性抗體通過共價鍵的方式結(jié)合而成。 3．涂片 細胞或細菌要制成涂片，涂片應(yīng)薄且均勻。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后，即會發(fā)出一定波長的熒光，進而對組織中的某種抗原進行定性、定位和定量分析 。尤其是雙橋PAP法，是當(dāng)今免疫組化技術(shù)中敏感性較高的方法。 APAAP法就是以堿性磷酸酶代替 HRP建立的堿性磷酸酶（ AP） 抗堿性磷酸酶（ AAP）法，簡稱 APAAP法。 人民衛(wèi)生出版社 一、標(biāo)本制作 ? 常用的標(biāo)本有組織切片、組織印片和細胞涂片 ? 酶免組織化學(xué)檢驗技術(shù)可分為 酶標(biāo)記抗體免疫組織化學(xué)染色法 非標(biāo)記抗體酶免疫組織化學(xué)染色法 人民衛(wèi)生出版社 二、酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色法 （一）原理 酶標(biāo)記抗體的免疫組織化學(xué)染色法是借助交聯(lián)劑的共價鍵作用將酶直接連接在抗體（或抗抗體）上，酶標(biāo)抗體（或抗抗體）與組織內(nèi)特異抗原或抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)后，通過酶對底物的催化作用，生成不溶性有色產(chǎn)物并沉淀在特定位置，達到對抗原定性、定位、定量檢測的目的。 人民衛(wèi)生出版社 （二）陽性結(jié)果 ? 陽性細胞的顯色可位于細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核 ? 免疫顯色強度和陽性細胞密度是定性、定量指標(biāo) ? 陽性細胞的著色形態(tài)（如胞膜型、胞核型、胞質(zhì) (漿 )型等）及組織分布特點（如局灶型、彌漫型、片塊型等）主要是定位指標(biāo) ? 哪怕只有少數(shù)細胞陽性（只要是抗原所在部位）也應(yīng)視為陽性表達 人民衛(wèi)生出版社 （三）陰性結(jié)果 陰性結(jié)果不能簡單視為抗原不表達，由于染色方法靈敏度有高低之分，有時可因靈敏度不夠，而導(dǎo)致陰性反應(yīng)。 用確證不含已知抗原的標(biāo)本作對照，應(yīng)呈陰性結(jié)果，稱陰性對照。 ②灌注法 — 適用于動物實驗研究。人民衛(wèi)生出版社 免疫學(xué)檢驗 人民衛(wèi)生出版社 第二十二章 免疫組織化學(xué)檢驗技術(shù) 人民衛(wèi)生出版社 ? 免疫組織化學(xué)檢驗技術(shù)又稱免疫細胞化學(xué)檢驗技術(shù) 是利用標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）與組織細胞內(nèi)抗原（或抗體）進行的抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對組織和細胞抗原進行定性、定位、定量測定的免疫檢測方法。 人民衛(wèi)生出版社 2．固定劑的選擇
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