免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)(更新版)
【正文】 白就組成酶標(biāo)鏈霉親和素 生物素方法（ LSAB）。 人民衛(wèi)生出版社 第五節(jié) 其他免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 一、金免疫組織化學(xué)技術(shù) ? 免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為標(biāo)記物。 。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子 (如 SPA)等作為探針，能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位或定量研究。 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 四、凝集素法 ? 一種凝集素具有專一性結(jié)合某種特異性糖基的能力，同時(shí)所有生物膜都含有一定量的糖類，后者主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。細(xì)胞的抗原（或通過一抗）先與生物素化的抗體結(jié)合，繼而將標(biāo)記親和素結(jié)合在抗體的生物素上，如此多層放大，提高了檢測(cè)抗原的敏感性。溫育后充分洗滌、干燥、鏡檢。 3．涂片 細(xì)胞或細(xì)菌要制成涂片，涂片應(yīng)薄且均勻。尤其是雙橋PAP法，是當(dāng)今免疫組化技術(shù)中敏感性較高的方法。 人民衛(wèi)生出版社 一、標(biāo)本制作 ? 常用的標(biāo)本有組織切片、組織印片和細(xì)胞涂片 ? 酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)可分為 酶標(biāo)記抗體免疫組織化學(xué)染色法 非標(biāo)記抗體酶免疫組織化學(xué)染色法 人民衛(wèi)生出版社 二、酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色法 （一）原理 酶標(biāo)記抗體的免疫組織化學(xué)染色法是借助交聯(lián)劑的共價(jià)鍵作用將酶直接連接在抗體（或抗抗體）上，酶標(biāo)抗體（或抗抗體）與組織內(nèi)特異抗原或抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)后，通過酶對(duì)底物的催化作用，生成不溶性有色產(chǎn)物并沉淀在特定位置，達(dá)到對(duì)抗原定性、定位、定量檢測(cè)的目的。 用確證不含已知抗原的標(biāo)本作對(duì)照，應(yīng)呈陰性結(jié)果，稱陰性對(duì)照。人民衛(wèi)生出版社 免疫學(xué)檢驗(yàn) 人民衛(wèi)生出版社 第二十二章 免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 人民衛(wèi)生出版社 ? 免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 是利用標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）與組織細(xì)胞內(nèi)抗原（或抗體）進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)組織和細(xì)胞抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的免疫檢測(cè)方法。 目的是證實(shí)所用免疫組化染色流程的有效性，排除假陰性的可能。 （一）試劑質(zhì)量控制 抗體的質(zhì)量是免疫組織化學(xué)染色成功的關(guān)鍵 （二）操作過程質(zhì)量控制 實(shí)驗(yàn)操作 標(biāo)本的質(zhì)量控制 （三）儀器設(shè)備和器具的質(zhì)量控制 人民衛(wèi)生出版社 第二節(jié) 酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) ? 酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是在一定條件下，應(yīng)用酶標(biāo)抗體（抗原）與組織或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原（抗體）發(fā)生反應(yīng)，然后加入酶的底物，催化底物顯色，借助光鏡或電鏡，就可識(shí)別出標(biāo)本中抗原（抗體）的分布和性質(zhì)；也可通過圖像分析技術(shù)達(dá)到定量的目的。由于酶不是標(biāo)記在抗體上，而是經(jīng)抗原（酶）抗體反應(yīng)與抗酶抗體結(jié)合，避免了酶標(biāo)抗體的缺點(diǎn)，提高了方法的敏感性。 2．印片 組織材料也可制成印片。檢測(cè)不耐熱抗原以 4℃ 過夜為宜。 人民衛(wèi)生出版社 ? 常用的技術(shù)類型有： 生物素法（ LAB法） 將親和素與標(biāo)記物（ HRP）結(jié)合，一個(gè)親合素可結(jié)合多個(gè) HRP；將生物素與抗體（一抗與二抗）結(jié)合，一個(gè)抗體分子可連接多個(gè)生物素分子，抗體的活性不受影響。 ? LSAB法的特點(diǎn) :① 特異性強(qiáng)；②分子量小，穿透力強(qiáng)，放大效應(yīng)遠(yuǎn)超 ABC法，故其敏感性更強(qiáng)；③等電點(diǎn)中性更適合組織，可明顯減少非特異性染色，低背景著色使特異性著色更清晰；④操作時(shí)間縮短，更簡(jiǎn)便。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性沒有明顯的
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