酶組織化學概論ppt課件-文庫吧資料
2025-01-22 15:02本頁面
【正文】 利于反復觀察。 反應產(chǎn)物是一種有色的沉著物， 顆粒要細，并能 保留在原位 。 盡可能保持組織細胞生活時的 化學成分和酶的活性 。因此， 在進行酶組織化學研究時，應極其重視化學反應的良好程度，嚴格控制實驗條件， 這樣才能對獲得的結果作出科學的判斷和分析。影響酶活性的因素有多種， 如底物的濃度、反應產(chǎn)物的強弱、溫度、 pH值和試劑質(zhì)量等 。所以化學反應的各種條件和影響化學反應的各種因素都要考慮到。 第三：保存定位（ preservation of localization)。 靛蘭形成法（靛藍法） indigo formation method: 29 腎間質(zhì)細胞中的酯酶 30 四、酶組織化學的基本條件 用組織化學方法在組織細胞內(nèi)證明酶，重要的是要具備三個條件： 第一：保存細胞結構（ preservation of structure)。此法又稱吲哚酚法（ indoxyl method） 。 本法也適用于證明 細胞色素氧化酶和過氧化物酶 。 把二甲基 對 苯二胺和 а 萘酚加入底物混合液中 ， 由酶作用而釋放的氧與此二者結合 ， 形成靛酚藍 ， 而顯示出酶的定位 。 24 （ 2）四唑鹽的種類 三苯四唑氯化物（ TTC） 藍四唑鹽（ BT） 新四唑鹽（ NT） 硝基藍四唑鹽（ NitroBT) 四氯四唑藍氯化物（ TNBT） 是脂溶性的，能共染組織細胞中的脂肪。這種色素沉著于酶作用的所在部位因而得知酶的定位。這種方法統(tǒng)稱 色素形成法 。此法已被廣泛使用。 以上兩種偶氮色素形成的原理完全相同。 肝細胞中的 ACP 21 方法： （ 1） 同時偶聯(lián)法： 這種偶聯(lián)法 ， 是在底物混合液中 ， 通過酶的分解作用所得到的沉著物 ， 立即形成重氮化合物和偶氮色素 。 ③重氮鹽有不同程度的抑制酶活性作用。 （ 2）缺點： ①底物價格昂貴。 ② 作用時間短，不易發(fā)生酶的丟失。 S E P + N 偶聯(lián)偶氮反應 偶氮色素 19 偶氮色素的顏色由重氮鹽的種類所決定。 ②組織細胞中有些成分可吸附金屬離子，產(chǎn)生假陽性反應。 ②金屬離子容易反應， 沉著顆粒微細，反應色調(diào) 鮮明，反差比較明顯。本法稱為 硫化鉛法 （ PbS method) 16 （ 3）第三種方法： 與使用天然底物的前兩種方法不同，本法使用的是 人工合成底物 ，在酶的作用下，底物的 分解產(chǎn)物與特定的金屬結合 ， 立即顯色 ，或通過顯色操作使其顯色，然后進行觀察。反應式如下： RPO4Na2+H2O ROH+PbHPO4 PbS Pb2+ (NH4)2S 酶反應 沉著 顯色 使用此種方法的條件是底物溶液中 H+濃度為 中性或弱酸性 ，常常利用易獲得的硝酸鉛或醋酸鉛。 大部分 水解酶 用此方法證明。因此， 捕捉酶反應的分解產(chǎn)物，使其與金屬結合，利用其呈色反應，再現(xiàn)出酶反應的部位，以證明酶的存在。 12 三、光鏡酶組織化學證明法 （一）金屬 金屬鹽法 （ metal precipitation method) 定義： 指金、銀、銅、鐵、鋁、鈷等金屬，其鹽和化合物或其本身都具有顏色，容易發(fā)生呈色反應。這種酶促反應稱為 組織化學酶反應 （ enzyme reaction of histochemistry) E S IRP E 捕捉反應 FRP 11 E S IRP E 捕捉反應 FRP S： 底物，酶具有只作用于該底物的性質(zhì)稱 底物特異性 IRP（ initial reaction product)： 初級反應產(chǎn)物，指底物被酶直接分解的物質(zhì)，不溶于水、脂類最為理想，以免發(fā)生擴散。因此所采用的定位檢查法必須準確。 —— 細胞化學方法（酶組化） 8 二、酶組織化學的基本理論 （一）酶的定位 localization of enzyme 在一定組織細胞及細胞器的超微結構中存在著特定的酶，其存在的特定部位稱為酶的定位。 —— 組織化學方法。 —— 生物化學方法。 根據(jù)酶的來源 胃蛋白酶，胰蛋白酶等 根據(jù)酶的特性 堿性磷酸酶，酸性磷酸酶4 概 述 酶的分類：按酶促反應的性質(zhì)，國際生物化學 酶學會（ EC）將酶分為六類，如下表： EC編號
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