酶組織化學總論ppt課件-文庫吧資料
2025-01-22 15:08本頁面
【正文】 線粒體 (三）酶組化的基本條件 同時保存結(jié)構(gòu)和酶的活性 保存酶的定位，防止酶的擴散或移位 保證反應產(chǎn)物的特異性 *影響酶活性的因素： 溫度 PH值 抑制劑 激活劑 （四）原理及一般原則 1. 基本原理 細胞內(nèi)的酶催化分解合適的底物，生成中間產(chǎn)物（即初級反應產(chǎn)物） 然后其中之一再與輔助物（或捕捉劑）反應，生成有色不溶性的終反應產(chǎn)物 該反應產(chǎn)物沉積在原位，以顯示酶的存在 第一反應：酶促反應 底物 初級反應產(chǎn)物（ PRP） 第二反應：捕捉反應 PRP + 捕捉劑 終反應產(chǎn)物（ FRP） 酶 * PRP彌散： 1. 底物在酶催化下水解的速度 2. PRP在緩沖液中的彌散系數(shù) 3. PRP與輔助物反應的速度 ? 應選擇合適的底物和輔助物 , 減少彌散 ? 捕捉劑的濃度 （ 1mg/ml） 2. 一般原則 1. 對組織處理 , 制片過程不能影響酶的活性及分布 2. 所選底物和輔助物必須迅速 , 同步穿透入組織和細胞中 3. 所選底物最好只能被一種酶催化分解 4. 所選輔助物不影響細胞內(nèi)酶的活性 , 不影響其他反應試劑的穿透性 5. PRP必須迅速與輔助物反應 , FRP為水不溶性的有色穩(wěn)定產(chǎn)物 6. 所有參與反應的試劑均不能與其他成分吸附或結(jié)合 (五 ) 酶組織化學的主要步驟 1. 酶的固定 （ fixation） 2. 酶的特異性反應 （ specific reaction） 3. 在最適條件下 , 酶反應產(chǎn)物的沉著（ precipitation） 4. 使沉著物具有可見性 （ visualization） 組織 /細胞 制作切片 酶反應（孵育） 顯色
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