【正文】 功倍”的效果！ 如何準(zhǔn)確、快捷、高效地測(cè)定大批量溶出度樣品 (8) 波長(zhǎng)可根據(jù)峰面積，酌情選取末端吸收或非最大吸收波長(zhǎng)（詳細(xì)講述）。對(duì)于小規(guī)格難溶性藥物，可考慮取出后無需過濾，直接置于液相小瓶、放置。 采用10%溶出量驗(yàn)證精密度。100μl~500μl皆可。 (5) 流速亦可根據(jù)柱壓提高至 ~。 如何準(zhǔn)確、快捷、高效地測(cè)定大批量溶出度樣品 (4) 柱溫升高至 40~50℃ 。 如何準(zhǔn)確、快捷、高效地測(cè)定大批量溶出度樣品 (31) 采用短色譜柱 市售有 2~5cm長(zhǎng)、粒徑 5~10μm的短分析柱、 (32) 提高流動(dòng)相中有機(jī)相比例。 如何準(zhǔn)確、快捷、高效地測(cè)定大批量溶出度樣品 (2) 盡可能采用 HPLC法。 (12) 濾頭 /針筒的取用 建議采用“ 1個(gè)濾頭 /1個(gè)取樣針筒方式”進(jìn)行多樣品抽取。 美國(guó) 在最具區(qū)分力的溶出介質(zhì)中，增加 5%、 20%和 40%有機(jī)溶劑溶出介質(zhì)測(cè)定比對(duì)。否則將會(huì)出現(xiàn) BE試驗(yàn)中的 tmax不一致結(jié)果。 體外溶出曲線比對(duì)的附加要求 ? 當(dāng)某些藥物要求必須飯后服用、且生物等效性試驗(yàn)需分別進(jìn)行“空腹”與“禁食”兩種狀態(tài)下時(shí)，體外溶出度試驗(yàn)則需進(jìn)行溶出介質(zhì)中添加酶液研究。 體外溶出曲線比較的具體操作 f1因子和 f2因子的判定標(biāo)準(zhǔn) f1因子應(yīng)介于 0~15； f2因子應(yīng)至少大于 50。 對(duì)于本身變異性較大的品種， n應(yīng)增至 12~18。 體外溶出曲線比較的具體操作 ? 對(duì)于所選時(shí)間點(diǎn)（非測(cè)定時(shí)間點(diǎn)）溶出結(jié)果變異系數(shù)的規(guī)定（即精密度的優(yōu)劣評(píng)價(jià)均值是否具有代表性） ： 對(duì)于 原研制劑 以上所選用的第一時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果變異系數(shù) (RSD)應(yīng)不得過20%，自第二時(shí)間點(diǎn)至最后時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果變異系數(shù) (RSD)均應(yīng)不得過 10%。 因 f2因子計(jì)算結(jié)果有依賴于比較時(shí)間點(diǎn)個(gè)數(shù)的特性（列舉 Excel軟件計(jì)算具體實(shí)例，本人可提供）。 n對(duì)于計(jì)算結(jié)果的貢獻(xiàn)尤甚！ ???????????????????????n)(11 0 05 0 l o gn1i2ttTRf2? 比較時(shí)間點(diǎn)的確定 (1) 溶出量在 85%（緩控釋制劑 80%）以上的時(shí)間點(diǎn)僅能選取一個(gè)。 體外溶出曲線比較的具體操作 F1 因 子 計(jì) 算 公 式 Rt和 Tt分別表示兩制劑在第 n個(gè)取樣點(diǎn)的平均累積溶出率。 ? 對(duì)應(yīng)于參比制劑平均溶出率分別為 60％和 85％兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，兩者平均溶出量差均在 177。 ? 強(qiáng)調(diào)：無需關(guān)注 10分鐘溶出量，但需測(cè)定。 表面活性劑種類 闡述最常用的十二烷基硫酸鈉和吐溫 80的優(yōu)缺點(diǎn) 如何運(yùn)用溶出曲線剖析原研品的實(shí)施步驟 裝置：槳板法 轉(zhuǎn)速： 100轉(zhuǎn) 加入表面活性劑： %濃度 引申至 創(chuàng)新藥 ：在以上條件下，如仍難以有任何一個(gè)介質(zhì)達(dá) 85%以上溶出量，則建議慎重 考慮，放棄研發(fā)?。ㄕf明這是比石頭還堅(jiān)硬的藥物?。? 放寬溶出試驗(yàn)參數(shù)的“最極端條件” ? 原研制劑曲線類型 參比制劑 15分鐘溶出量達(dá) 85%以上時(shí) ? 無需采用 f1和 f2因子比較。 ? 但當(dāng)精密度差、必須提高精密度才能使溶出均值更具代表性時(shí)，采用提高轉(zhuǎn)速至 75~100轉(zhuǎn)方式。 如樣品濃度過低，可采用加大進(jìn)樣量至 50~500μl。 膠囊劑：轉(zhuǎn)籃法 /50轉(zhuǎn)或槳板法 /50轉(zhuǎn)（加沉降藍(lán)）起始。 對(duì)于結(jié)束時(shí)間點(diǎn) 在酸性介質(zhì)中最長(zhǎng)測(cè)定時(shí)間為 2小時(shí)，在其他各 pH值介質(zhì)中普通制劑為 6小時(shí)，緩控釋制劑為 24小時(shí)。 如何運(yùn)用溶出曲線剖析原研品的實(shí)施步驟 ? 對(duì)原研制劑的剖析 （知己知彼、百戰(zhàn)不殆！）： 對(duì)于測(cè)定時(shí)間點(diǎn) 普通制劑與腸溶制劑可為 1 4 60、90、 120分鐘，此后每隔 1小時(shí)直至 6小時(shí)止；緩控釋制劑可為 1 4 60、 90、 120分鐘， 1 24小時(shí)。 (3) 離子濃度越低、樣品越不易溶出，則要求越高！ (4) 試驗(yàn)前應(yīng)首先進(jìn)行原料藥在各 pH值溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察，以確保試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確測(cè)定。詳細(xì)配制方法請(qǐng)參閱本人撰寫的文章。以此為出發(fā)點(diǎn)，如根據(jù)某藥物在某溶出介質(zhì)中的溶解度值來推算采用“何種溶出介質(zhì)”或“添加多少濃度的表面活性劑”， 將完全無視“藥物制劑”的作用 ！ 將 “藥劑可以改善藥物的水難溶性” 這一至關(guān)重要的理念完全擯棄了！ 所以，該理念在現(xiàn)今溶出度試驗(yàn)應(yīng)用中已基本無用武之地。 該理念的推出，是美國(guó)學(xué)者在最初建立溶出度試驗(yàn)方法時(shí)，斟酌確定溶出杯體積時(shí)所推出的一個(gè)概念，從當(dāng)時(shí)所研究的藥物出發(fā)，針對(duì)該理念，1000ml溶出杯可基本滿足大部分藥物。 ? 由測(cè)定數(shù)據(jù)推算出該制劑是否為“ pH值依賴型制劑”，從而來指導(dǎo)仿制制劑研發(fā)與溶出度質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬定。 FDA公布的溶出度數(shù)據(jù)庫中，“阿維 A膠囊”采用 。 日本 《 橙皮書 》 中一些特例。 pH值中，建議增加 pKa177。其上陡峭變化的 pH值應(yīng)作為第 5~6條曲線予以繪制。 如何運(yùn)用溶出曲線剖析原研品的實(shí)施步驟 ? 以上 pH值的選擇依據(jù)： (1) 以 pKa值 。 對(duì)測(cè)定樣品數(shù)的要求 理論上個(gè)測(cè)定 12個(gè)單位，現(xiàn)實(shí)情況測(cè)定 6個(gè)單位即可，甚至可以更少 （預(yù)試驗(yàn)時(shí)） ！ 如何運(yùn)用溶出曲線剖析原研品的實(shí)施步驟 ? 至少 四種溶出介質(zhì)： 【 普通制劑 】 (1)酸性藥物 pH值分別為 、 ~、 ~； (2)中 /堿性藥物和包衣制劑 pH值分別為 、 ~、 ； (3)難溶性藥物制劑 pH值分別為 、 ~、 ； (4)腸溶制劑 pH值分別為 、 、 ； 【 緩 /控釋制劑 】 pH值分別為 、 ～ 、 ～ 。 ? 含量與參比制劑的差值應(yīng)在 5%以內(nèi)。酌情審定 （著重講述） 。 體內(nèi)外相關(guān)性的最新理解 (Ⅳ ) 兩個(gè)不同藥廠生產(chǎn)的 吲哚美辛 膠囊 pH 介質(zhì)中，槳板法、 100轉(zhuǎn) 血 藥 濃 度 0 20 40 60 80 100 0 30 60 Time (min) % dissolved A B 0 2 4 6 8 Time (h) Concentration (ug/ml) Capsule A Capsule B 不相關(guān) 造成以上不相關(guān)的原因 —— 也許是溶出度試驗(yàn)條件選擇不當(dāng)所致。 體內(nèi)外相關(guān)性的最新理解 (Ⅲ ) 只有通過對(duì)體外溶出度（釋放度）的嚴(yán)格要求，才能盡可能地增加在年老患者、在體質(zhì)虛弱患者體內(nèi)生物利用度高的概率！ 以上這一觀點(diǎn)彌補(bǔ)了“生物等效性試驗(yàn)的局限與不足”！ 對(duì)溶出度試驗(yàn)嚴(yán)格要求的意義 ?體內(nèi)不一致、即 BE試驗(yàn)失敗 → 則肯定會(huì)在體外某個(gè)溶出度條件下呈現(xiàn)顯著性差異，關(guān)鍵就看體外溶出度研究的深度了。 體外溶出曲線比對(duì)研究的人性化規(guī)定 使用該藥品的患 者是特定人群?jiǎn)?? 溶 出 度 試 驗(yàn) 是 普通受試者 是 胃酸缺乏受試者 否 體 內(nèi) 研 究 針對(duì)性受試者 否 是 在低轉(zhuǎn)度和所有介質(zhì)中，溶出曲線均一致嗎 ? 否 在中性介質(zhì)條件下 溶出曲線一致嗎？ ? 體內(nèi)一致、即 BE試驗(yàn)成功 → 并不意味著仿制制劑臨床療效就一定與原研制劑相當(dāng)。 ? 再評(píng)價(jià)時(shí)，由于無法再進(jìn)行大量“ BE試驗(yàn)”，故只好采用體外溶出曲線比對(duì)方法。 (2) 有關(guān)物質(zhì)： 樣品批號(hào)、對(duì)照藥品批號(hào)和生產(chǎn)廠；測(cè)定及計(jì)算方法；比較結(jié)果。 ? 世界衛(wèi)生組織、美國(guó)與歐盟要求皆雷同日本。如設(shè)定得寬松 （如槳板法 /100轉(zhuǎn)、加高濃度表面活性劑、甚至有機(jī)溶劑）， 則于體內(nèi)的評(píng)價(jià)可能就會(huì)失去意義，建立不起體內(nèi)外相關(guān)性，也無法評(píng)價(jià)生物等效性了！ ? 對(duì)于仿制藥、 為提高生物等效性試驗(yàn)成功率、 如何確定體外溶出度試驗(yàn)條件與參數(shù)？ 至關(guān)重要 溶出度技術(shù)應(yīng)用（一） —— 對(duì)于仿制藥的研發(fā) ? 闡述為何要做生物等效性 (BE)試驗(yàn)？如何做？ ● 如何提高 BE試驗(yàn)成功率？ 不可能試驗(yàn)一個(gè)處方、進(jìn)行一次生物等效性試驗(yàn)！ 這也正是溶出度試驗(yàn)作為體內(nèi)外相關(guān)性的一個(gè)重要體現(xiàn)！作為剖析固體制劑內(nèi)在品質(zhì)的一種手段！ ? 體外一致 → 體內(nèi)多數(shù)一致、 BE試驗(yàn)成功率高！ 體內(nèi)外相關(guān)性的最新理解 (Ⅰ ) 均能夠具有相似 的溶出曲線 生物等效 大多數(shù)藥物 生物不等效 體外溶出度試驗(yàn)，在各種溶出介質(zhì)中，在嚴(yán)格的溶出度條件下 （低轉(zhuǎn)速） 生物等效性試驗(yàn) 這樣就大大提高了生物等效性 (BE)試驗(yàn)的成功率！ 但并不能替代 BE試驗(yàn)！ 生物利用度 體外多條溶出曲線 處方 /輔料 /制劑工藝 原研藥 生物利用度 體外多條溶出曲線 處方 /輔料 /制劑工藝 仿制藥 相同 相同 不同 90% 企業(yè)界的使命 仿制藥研發(fā)思路 → “殊途同歸” pH = pH = pH = 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 Time (min) 0 2 4 6 Time (h) A B 溶出曲線 體內(nèi)血藥濃度 A B A B ?日本仿制藥申報(bào)要求，體外至少四條溶出曲線與原研制劑一致，方可申報(bào)。 溶出度試驗(yàn)裝置 /轉(zhuǎn)速與消化道蠕動(dòng)的關(guān)系 一個(gè)優(yōu)質(zhì)藥品，在采用一定的裝置與轉(zhuǎn)速條件下 （通常認(rèn)為槳板法 /50轉(zhuǎn)最接近中老人人群），應(yīng)在 pH值的寬范圍內(nèi) （即多種溶出介質(zhì)中） 盡可能均有一定溶出與釋放，這樣就可保證該藥品用于人體時(shí)，可在各種體內(nèi)環(huán)境下，對(duì)任何體質(zhì)患者均有一定療效！ 溶出度試驗(yàn)中的“ 轉(zhuǎn)速 ”與生物利用度的相關(guān)性 槳板法 100轉(zhuǎn) 槳板法 50轉(zhuǎn) 0 500 1000 1500 0 2 4 6 8 10 Time (h) Conc (ng/ml) 0 20 40 60 80 100 0 2 4 6 8 10 12 Time (h) % dissolved A藥廠產(chǎn)品 B藥廠產(chǎn)品 0 20 40 60 80 100 0 2 4 6 8 10 12 Time (h) % dissolved 身體機(jī)能良好者體內(nèi) 0 200 400 600 800 0 2 4 6 8 10 Time (h) Conc. (ng/ml) 身體機(jī)能虛弱者體內(nèi) 相 關(guān) 相 關(guān) 100 轉(zhuǎn) 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 Time (min) % dissolved A B 50 轉(zhuǎn) 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 Time (min) % d