植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告-文庫吧資料
2024-08-14 19:43本頁面
【正文】 5g二%1%三%%四1%1%2. 無菌苗和外植體的處理1) 無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取出無菌苗，用無菌水洗凈培養(yǎng)基，葉片較大的進(jìn)行裁剪，置于無菌培養(yǎng)皿備用；2) 外植體處理a 將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b 將洗凈植物切去葉柄，將葉片從葉脈處剪開，再切成3～4 mm2的小塊；嫩莖需切取兩個(gè)節(jié)之間的節(jié)間部分，長約1 cm，流水沖洗30min；c 將外植體置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s，然后用無菌水沖洗d 用1%升汞處理12~15min，然后用無菌水沖洗3~4次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌解剖刀切去兩端后進(jìn)行接種。3) 培養(yǎng)瓶貼上標(biāo)簽，做好標(biāo)記，然后放到光照培養(yǎng)箱中或培養(yǎng)室培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)，條件為20003000LX，26177。(四) 無菌苗的培養(yǎng)(2016/3/11)1. 培養(yǎng)基配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）種子的萌發(fā)采用1/2MS培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基貯備液Ⅰ貯備液Ⅱ貯備液Ⅲ貯備液Ⅳ蔗糖瓊脂15g5g2. 馬齒莧（番茄）種子處理1) 洗去浮塵和上漂的種子，挑選飽滿種子，置于培養(yǎng)瓶中流水沖洗30min后倒掉水備用；2) 將種子置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精消毒滅菌30~60s，用無菌水沖洗干凈；3) 用1%升汞處理8~10min，然后用無菌水沖洗3~4次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌接種器械進(jìn)行分離接種。金屬器械不能過度灼燒，以防退火。點(diǎn)燃酒精燈，將金屬器械在其火焰上灼燒，冷卻待用。用70－75％的酒精拭擦臺面并消毒雙手。對有材料的培養(yǎng)室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸2. 準(zhǔn)備組培室將組培室打掃干凈，調(diào)至適宜溫度3. 超凈工作臺處理1) 材料準(zhǔn)備用75%酒精擦拭，準(zhǔn)備好超凈工作臺內(nèi)物品，包括酒精棉球、75%和90%酒精、廢液缸、打火機(jī)、酒精燈、支架、鑷子、解剖刀、解剖剪等2) 滅菌處理實(shí)驗(yàn)開始前先用75%酒精擦拭工作臺面，然后開啟紫外燈，紫外照射20min30min。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個(gè)燒杯里，迅速放入熏蒸室內(nèi)，使甲醛和氨水發(fā)生中和反應(yīng)，以消除甲醛味，減少對人體的刺激作用。甲醛對人的眼、鼻有強(qiáng)烈刺激作用。高錳酸鉀是一種氧化劑，當(dāng)它與一部分甲醛作用時(shí)，由氧化反應(yīng)產(chǎn)生的熱可使其余的甲醛揮發(fā)為氣體。室內(nèi)準(zhǔn)備妥當(dāng)后，把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(nèi)(最好在碗或杯下面鋪一張報(bào)紙，以利清洗)，然后將甲醛也倒入碗或杯內(nèi)，立即出屋關(guān)門。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。2) 玻璃器皿及耐熱用具等可采用干熱滅菌 即利用烘箱加熱到160180℃ 的溫度來殺滅微生物。3. 其他滅菌1) 不耐熱的物質(zhì)將采用過濾滅菌 如赤霉素、玉米素、脫落酸、尿素和某些維生素等。滅菌后取出培養(yǎng)瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。3) 待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。2) 放置其他需要滅菌的物品。將裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶直立于金屬小筐中，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。最后在組培瓶外壁貼上標(biāo)簽。每500 mL培養(yǎng)基，可分裝10～15瓶。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。 溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。3) 調(diào)pH：用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密的pH試紙（～）測培養(yǎng)基的pH，（）。2. 其他試劑的配置1) 1 mol/L 的NaOH：1瓶2) 1 mol/LHCL ：1瓶3) %的升汞或2%次氯酸鈉：每個(gè)超凈工作臺一瓶（用時(shí)處理530min)4) 70~75%酒精：每個(gè)超凈工作臺一瓶5) 95%酒精：每個(gè)超凈工作臺一瓶6) 75%酒精棉球：每個(gè)超凈工作臺一瓶(二) 培養(yǎng)基的配制與滅菌1. 培養(yǎng)基配制1) 配制培養(yǎng)液（MS培養(yǎng)液）：按每次配制500 mL培養(yǎng)基計(jì)，用量筒或者移液管從各種母液中分別取出貯備液I 25 mL、貯備液II、Ⅲ、Ⅳ各5 mL；2) 溶化瓊脂：用粗天平分別稱取5g瓊脂、15g蔗糖放入500 mL搪瓷缸中，加入蒸餾水400 mL，用用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。4) 各種母液配制完成后，分別用玻璃瓶貯存，貼上標(biāo)簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期等，放入冰箱冷藏室保存。3) 6BA：1 mg/mL(溶于少量1N鹽酸后以蒸餾水定容）。2) 貯備液III需加熱溶解。5H2
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