植物組織培養(yǎng)實驗報告-wenkub
2022-08-29 19:43:33 本頁面
【正文】 鑷子、濾紙、鉛筆等。2. 培養(yǎng)基滅菌（高壓滅菌）1) 放培養(yǎng)瓶。組培瓶中培養(yǎng)基的量約50 mL 。4) 培養(yǎng)基的分裝一般無機物質(zhì)的母液在冰箱中可保存半年以上，有機物質(zhì)的母液保存時間在半年以內(nèi)，但若發(fā)現(xiàn)有沉淀或霉變,應(yīng)立即需重新配制。定容，保存在棕色玻璃瓶內(nèi)。2H2O 甘氨酸 20CuSO42H2O 373 CaCl2三、 實驗材料、試劑和儀器設(shè)備1. 植物材料：馬齒莧、番茄種子誘導(dǎo)的無菌苗、外植體（盤龍參、波斯菊、金葉女貞、黃花苜蓿、菊花、香樟、杜鵑、月季）2. 實驗藥品（試劑）：甲醛、MS培養(yǎng)基母液（見表1）、蔗糖、瓊脂、1%升汞、酒精（75%和90%）、NaOH、HCl、6BA、NNA、無菌水；3. 儀器設(shè)備和實驗用具：高壓滅菌鍋、天平、pH計、超凈工作臺、電爐、酒精燈、鑷子、解剖刀、剪刀、燒杯、培養(yǎng)瓶、量筒、燒杯、玻璃棒、廣口試劑瓶、牛皮紙、濾紙、培養(yǎng)皿、藥勺、支架、打火機等。常用的細胞分裂素包括6卞基嘌呤（6BA）、激動素（KT）、異戊烯氨基嘌呤（2ip）、玉米素（ZT）等。在使用2，4D時，必須嚴格控制使用濃度和培養(yǎng)時期，因為高濃度的2，4D常常抑制器官的發(fā)生，在分化培養(yǎng)時不能使用2，4D代替其他生長素。同時生長素和細胞分裂素的協(xié)調(diào)作用，對于培養(yǎng)物的形態(tài)建立十分必要。生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對于離題培養(yǎng)中的細胞分裂分化、器官形成和個體再生等均起著重要而明顯的調(diào)節(jié)作用。MS培養(yǎng)基屬于富鹽平衡培養(yǎng)基，特點是：無機鹽濃度較高，元素間的比例適當(dāng)，離子平衡性好，具有較強的緩沖性，因而在培養(yǎng)的過程中可維持較好的穩(wěn)定性；營養(yǎng)豐富，在一般培養(yǎng)中無須額外加入復(fù)雜的有機成分；微量元素種類全，濃度高。5. 培養(yǎng)基植物組織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。組織培養(yǎng)的主要過程都是在無菌條件下進行的，所以所有的器材、植物體、接種室都應(yīng)是無菌的。植物細胞含有全套遺傳信息，具有形成完整植物的潛能。2. 植物細胞表現(xiàn)出全能性的條件1. 離體狀態(tài)；2. 有一定的營養(yǎng)物質(zhì)，激素和其他外界條件（無菌、溫度、pH）；3. 選擇性能優(yōu)良、細胞全能性表達充分的基因型3. 無菌條件把植物的組織、器官等，使其在人工控制的無菌條件下，使植物在人工培養(yǎng)基上繁殖。4. 脫分化與愈傷組織已有特定結(jié)構(gòu)與功能的植物組織，在一定條件下，其細胞被誘導(dǎo)改變原來的發(fā)育途徑，逐步逆轉(zhuǎn)其原有的分化形態(tài)，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂蟹稚芰Φ呐呒毎倪^程稱為脫分化。常用的凝固劑是瓊脂,它的主要作用是使液體培養(yǎng)基凝固，瓊脂本身并不提供任何營養(yǎng)，它只是一種高分予的碳水物從海藻中提取出來，僅溶解于熱水，成為溶膠，冷卻后(40℃以下)即凝固為固體狀凝膠。這類培養(yǎng)基是目前使用最廣泛的培養(yǎng)基。一般來說，基本培養(yǎng)基只能保證培養(yǎng)物的生存，維持其最低的生理活動，而只有植物激素的配合使用，才能完成離體培養(yǎng)物中按照需要設(shè)計的各個調(diào)節(jié)環(huán)節(jié)。在離體培養(yǎng)的分化調(diào)節(jié)中，生長素促進不定根的形成而抑制不定芽的發(fā)生。2) 細胞分裂素的主要作用是促進細胞的分裂，調(diào)節(jié)器官分化，延遲組織衰老，增強蛋白質(zhì)合成等。3) 赤霉素（GA）是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的激素，目前已發(fā)現(xiàn)的天然赤霉素有20多種。四、 實驗步驟(一) 培養(yǎng)基母液的配制(2016/3/4)1. MS培養(yǎng)基貯備液配制貯備液I(g)(20)貯備液III(mg) (100)MgSO42H2O生長調(diào)節(jié)劑KNO36BA50mg50mLKH2PO4NAA50mg貯備液II(mg) )(100)貯備液IV(mg) )(100)KI 100mL肌醇 1000 100mLH3BO3 62 煙酸 5 MnSO45H2O 0. 25 稱量 溶解 混合 定容CoCl23) 6BA：1 mg/mL(溶于少量1N鹽酸后以蒸餾水定容）。2. 其他試劑的配置1) 1 mol/L 的NaOH：1瓶2) 1 mol/LHCL ：1瓶3) %的升汞或2%次氯酸鈉：每個超凈工作臺一瓶（用時處理530min)4) 70~75%酒精：每個超凈工作臺一瓶5) 95%酒精：每個超凈工作臺一瓶6) 75%酒精棉球：每個超凈工作臺一瓶(二) 培養(yǎng)基的配制與滅菌1. 培養(yǎng)基配制1) 配制培養(yǎng)液（MS培養(yǎng)液）：按每次配制500 mL培養(yǎng)基計，用量筒或者移液管從各種母液中分別取出貯備液I 25
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