植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(編輯修改稿)
2024-08-28 19:43 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 取出培養(yǎng)瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。最好放置1 d后再使用。3. 其他滅菌1) 不耐熱的物質(zhì)將采用過(guò)濾滅菌 如赤霉素、玉米素、脫落酸、尿素和某些維生素等。 過(guò)濾滅菌的原理：溶液通過(guò)濾膜后，細(xì)菌的細(xì)胞和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻。2) 玻璃器皿及耐熱用具等可采用干熱滅菌 即利用烘箱加熱到160180℃ 的溫度來(lái)殺滅微生物。3) 用于無(wú)菌操作的器械采用灼燒滅菌(三) 接種室和超凈工作臺(tái)的滅菌處理1. 接種室熏蒸滅菌長(zhǎng)期不用的培養(yǎng)室或接種室要進(jìn)行熏蒸。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。甲醛的用量通常按每立方米空間26毫升計(jì)算，高錳酸鉀的用量是甲醛的一半。室內(nèi)準(zhǔn)備妥當(dāng)后，把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(nèi)(最好在碗或杯下面鋪一張報(bào)紙，以利清洗)，然后將甲醛也倒入碗或杯內(nèi)，立即出屋關(guān)門(mén)。幾秒鐘后，甲醛溶液即沸騰揮發(fā)。高錳酸鉀是一種氧化劑，當(dāng)它與一部分甲醛作用時(shí)，由氧化反應(yīng)產(chǎn)生的熱可使其余的甲醛揮發(fā)為氣體。甲醛熏蒸接種室應(yīng)至少在使用前24小時(shí)進(jìn)行，熏蒸后密閉保持4小時(shí)以上再進(jìn)入室內(nèi)工作。甲醛對(duì)人的眼、鼻有強(qiáng)烈刺激作用。因此，可在使用前用氨進(jìn)行中和。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個(gè)燒杯里，迅速放入熏蒸室內(nèi)，使甲醛和氨水發(fā)生中和反應(yīng)，以消除甲醛味，減少對(duì)人體的刺激作用。使用氨水應(yīng)在工作前2小時(shí)進(jìn)行。對(duì)有材料的培養(yǎng)室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸2. 準(zhǔn)備組培室將組培室打掃干凈，調(diào)至適宜溫度3. 超凈工作臺(tái)處理1) 材料準(zhǔn)備用75%酒精擦拭，準(zhǔn)備好超凈工作臺(tái)內(nèi)物品，包括酒精棉球、75%和90%酒精、廢液缸、打火機(jī)、酒精燈、支架、鑷子、解剖刀、解剖剪等2) 滅菌處理實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前先用75%酒精擦拭工作臺(tái)面，然后開(kāi)啟紫外燈，紫外照射20min30min。關(guān)閉紫外燈，開(kāi)啟風(fēng)機(jī)10min后打開(kāi)日光燈。用70－75％的酒精拭擦臺(tái)面并消毒雙手。試驗(yàn)用具也應(yīng)該用酒精消毒。點(diǎn)燃酒精燈，將金屬器械在其火焰上灼燒，冷卻待用。注意：所有操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過(guò)灼燒進(jìn)行。金屬器械不能過(guò)度灼燒，以防退火。移液管不能灼燒，培養(yǎng)瓶口、塑料材料、橡膠材料過(guò)火焰不能時(shí)間太長(zhǎng)。(四) 無(wú)菌苗的培養(yǎng)(2016/3/11)1. 培養(yǎng)基配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）種子的萌發(fā)采用1/2MS培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基貯備液Ⅰ貯備液Ⅱ貯備液Ⅲ貯備液Ⅳ蔗糖瓊脂15g5g2. 馬齒莧（番茄）種子處理1) 洗去浮塵和上漂的種子，挑選飽滿種子，置于培養(yǎng)瓶中流水沖洗30min后倒掉水備用；2) 將種子置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精消毒滅菌30~60s，用無(wú)菌水沖洗干凈；3) 用1%升汞處理8~10min，然后用無(wú)菌水沖洗3~4次，放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無(wú)菌接種器械進(jìn)行分離接種。3. 接種及培養(yǎng)1) 用酒精擦洗工作臺(tái)和手，對(duì)接種器具進(jìn)行灼燒滅菌；2) 打開(kāi)培養(yǎng)瓶，瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒，用鑷子（90%酒精浸泡并灼燒）將培養(yǎng)材料置于培養(yǎng)基上，灼燒瓶口，蓋上瓶塞。3) 培養(yǎng)瓶貼上標(biāo)簽，做好標(biāo)記，然后放到光照培養(yǎng)箱中或培養(yǎng)室培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)，條件為20003000LX，26177。1℃，培養(yǎng)一周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：所有馬齒莧無(wú)菌苗均染菌（未拍照）實(shí)驗(yàn)分析：①馬齒莧種子消毒、滅菌時(shí)間不足②接種室和培養(yǎng)實(shí)滅菌不徹底，環(huán)境較臟③實(shí)驗(yàn)操作不正確④超凈工作臺(tái)不干凈(五) 愈傷組織誘導(dǎo)(2016/3/25)1. 培養(yǎng)基的配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基組別6BANNA貯備液Ⅰ貯備液Ⅱ貯備液Ⅲ貯備液Ⅳ蔗糖瓊脂一%%25mL5mL5mL5mL15g5g二%1%三%%四1%1%2. 無(wú)菌苗和外植體的處理1) 無(wú)菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取出無(wú)菌苗，用無(wú)菌水洗凈培養(yǎng)基，葉片較大的進(jìn)行裁剪，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿備用；2) 外植體處理a 將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b 將洗凈植物切去葉柄，將葉片從葉脈處剪開(kāi)，再切成3～4 mm2的小塊；嫩莖需切取兩個(gè)節(jié)之間的節(jié)間部分，長(zhǎng)約1 cm，流水沖洗30min；c 將外植體置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s，然后用無(wú)菌水沖洗d 用1%升汞處理12~15min，然后用無(wú)菌水沖洗3~4次，放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無(wú)菌解剖刀切去兩端后進(jìn)
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1