植物組織培養(yǎng)實驗報告-文庫吧
2025-07-17 19:43 本頁面
【正文】 素的主要作用時促進細胞伸長生長，與生長素協(xié)同作用對形成層的分化具有一定影響，同時還能刺激體細胞胚進一步發(fā)育成植株。三、 實驗材料、試劑和儀器設(shè)備1. 植物材料：馬齒莧、番茄種子誘導(dǎo)的無菌苗、外植體（盤龍參、波斯菊、金葉女貞、黃花苜蓿、菊花、香樟、杜鵑、月季）2. 實驗藥品（試劑）：甲醛、MS培養(yǎng)基母液（見表1）、蔗糖、瓊脂、1%升汞、酒精（75%和90%）、NaOH、HCl、6BA、NNA、無菌水；3. 儀器設(shè)備和實驗用具：高壓滅菌鍋、天平、pH計、超凈工作臺、電爐、酒精燈、鑷子、解剖刀、剪刀、燒杯、培養(yǎng)瓶、量筒、燒杯、玻璃棒、廣口試劑瓶、牛皮紙、濾紙、培養(yǎng)皿、藥勺、支架、打火機等。四、 實驗步驟(一) 培養(yǎng)基母液的配制(2016/3/4)1. MS培養(yǎng)基貯備液配制貯備液I(g)(20)貯備液III(mg) (100)MgSO47H2O500mLFeSO47H2O 278 100mLNH4NO3 Na2EDTA2H2O 373 CaCl22H2O生長調(diào)節(jié)劑KNO36BA50mg50mLKH2PO4NAA50mg貯備液II(mg) )(100)貯備液IV(mg) )(100)KI 100mL肌醇 1000 100mLH3BO3 62 煙酸 5 MnSO44H2O 223 鹽酸硫胺素 1 ZnSO47H2O 86 鹽酸吡哆醇 5 Na2MoO42H2O 甘氨酸 20CuSO45H2O 0. 25 稱量 溶解 混合 定容CoCl26H2O 0. 25 表11) 每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，定容。2) 貯備液III需加熱溶解。，定容，保存在棕色玻璃瓶內(nèi)。3) 6BA：1 mg/mL(溶于少量1N鹽酸后以蒸餾水定容）。NAA：1 mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后以蒸餾水定容）。4) 各種母液配制完成后，分別用玻璃瓶貯存，貼上標簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期等，放入冰箱冷藏室保存。一般無機物質(zhì)的母液在冰箱中可保存半年以上，有機物質(zhì)的母液保存時間在半年以內(nèi)，但若發(fā)現(xiàn)有沉淀或霉變,應(yīng)立即需重新配制。2. 其他試劑的配置1) 1 mol/L 的NaOH：1瓶2) 1 mol/LHCL ：1瓶3) %的升汞或2%次氯酸鈉：每個超凈工作臺一瓶（用時處理530min)4) 70~75%酒精：每個超凈工作臺一瓶5) 95%酒精：每個超凈工作臺一瓶6) 75%酒精棉球：每個超凈工作臺一瓶(二) 培養(yǎng)基的配制與滅菌1. 培養(yǎng)基配制1) 配制培養(yǎng)液（MS培養(yǎng)液）：按每次配制500 mL培養(yǎng)基計，用量筒或者移液管從各種母液中分別取出貯備液I 25 mL、貯備液II、Ⅲ、Ⅳ各5 mL；2) 溶化瓊脂：用粗天平分別稱取5g瓊脂、15g蔗糖放入500 mL搪瓷缸中，加入蒸餾水400 mL，用用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至500 mL，攪拌均勻。3) 調(diào)pH：用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時用精密的pH試紙（～）測培養(yǎng)基的pH，（）。4) 培養(yǎng)基的分裝 溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分裝時，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入組培瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。組培瓶中培養(yǎng)基的量約50 mL 。每500 mL培養(yǎng)基，可分裝10～15瓶。5) 培養(yǎng)基分裝完畢后，應(yīng)及時封蓋瓶口。最后在組培瓶外壁貼上標簽。2. 培養(yǎng)基滅菌（高壓滅菌）1) 放培養(yǎng)瓶。將裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶直立于金屬小筐中，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。如果沒有金屬小筐，可以在兩層錐形瓶之間放一塊玻璃板隔開。2) 放置其他需要滅菌的物品。將其他需要滅菌的物品也放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)，如裝有蒸餾水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒杯、廣口瓶（以上物品都要用牛皮紙封口），用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿、剪刀、解剖刀、鑷子、濾紙、鉛筆等。3) 待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在98 kPa、 ℃下，滅菌20 min。滅菌后
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