重組dna技術(shù)-文庫(kù)吧資料
2025-08-07 14:17本頁(yè)面
【正文】 ion body) 很難表達(dá)大量可溶性蛋白 優(yōu)點(diǎn)： 可表達(dá)克隆的 cDNA及真核基因組 DNA 可適當(dāng)修飾表達(dá)的蛋白質(zhì) 表達(dá)產(chǎn)物分區(qū)域積累 缺點(diǎn)： 操作技術(shù)難、費(fèi)時(shí)、經(jīng)濟(jì) 轉(zhuǎn)染 —— 將表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程 方法： 磷酸鈣轉(zhuǎn)染 DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染 電穿孔 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 顯微注射 2. 真核表達(dá)體系 酵母、昆蟲(chóng)、乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞 三、 重組技術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 （一）疾病基因的發(fā)現(xiàn) 1990年 美國(guó)科學(xué)家率先啟動(dòng) 人類(lèi)基因組計(jì)劃（ HGP）， 計(jì)劃歷時(shí) 15年，至 2022年完成； 2022年 2月 12日 由 Since和 Nature雜志同時(shí)向世界宣布，人類(lèi)基因組 3X109bp的最新圖譜，約含 3?4萬(wàn)個(gè)基因； 整個(gè)人類(lèi)基因組的全部核苷酸序列不久即將完成。 ⑵ 基因轉(zhuǎn)錄要有啟動(dòng)子，而啟動(dòng)子必須能被宿主 細(xì)胞的 RNA聚合酶有效地識(shí)別 。 （ IPTG 存在下 ） 組氨酸缺陷 型大腸桿菌 無(wú)組氨酸 的培養(yǎng)基 酵母咪唑甘油磷 酸脫水酶基因 促進(jìn)組氨酸合成 λDNA 重組體 標(biāo)志補(bǔ)救 原位雜交 Southern印跡 目 錄 小結(jié)：重組 DNA技術(shù)操作的主要步驟 載體 質(zhì)粒 噬菌體 病毒 目的基因（外源基因） 基因組 DNA cDNA 人工合成 PCR產(chǎn)物 限制酶消化 開(kāi)環(huán)載體 DNA 目的基因 連接酶 重組體 轉(zhuǎn)化 體外包裝，轉(zhuǎn)染 帶重組體的宿主 篩選 表型篩選 酶切電泳鑒定 菌落原位雜交 五、重組體在宿主細(xì)胞中的表達(dá)和調(diào)控 基因工程的最終目的是通過(guò)載體將外源基因?qū)牒线m的宿主細(xì)胞中高效表達(dá)，產(chǎn)生有重要價(jià)值的蛋白質(zhì)產(chǎn)品。 (插入失活法 ) 抗藥性標(biāo)記選擇 目 2. 藍(lán) 白 篩選 利用藍(lán)色化合物的形成作為指示劑 ， 篩選帶重組質(zhì)粒的細(xì)菌 。 具有抗藥性標(biāo)記的載體，轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞后，能 在含抗生素（ Amp或 Tet）的培養(yǎng)平板上生長(zhǎng)；未轉(zhuǎn) 化的則不能生長(zhǎng)。 DNA文庫(kù) (genomic DNA library) 3. cDNA文庫(kù) (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR) 組織或細(xì)胞染色體 DNA 基因片斷 克隆載體 重組 DNA分子 含重組分子的轉(zhuǎn)化菌 限制性?xún)?nèi)切酶 受體菌 基因組 DNA文庫(kù) 存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因組 DNA的集合 * 從基因組 DNA文庫(kù)獲取目的基因 目 錄 mRNA cDNA 雙鏈 cDNA 重組 DNA分子 cDNA文庫(kù) 反轉(zhuǎn)錄酶 載體
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