[理學(xué)]重組dna技術(shù)-文庫(kù)吧資料
2025-02-27 22:40本頁(yè)面
【正文】 ?1. 重組 DNA引入宿主細(xì)胞 原核生物細(xì)胞是很好的受體細(xì)胞 → 容易攝取外界的 DNA，增殖快，基因組簡(jiǎn)單，便于培養(yǎng)和基因操作。 23 重組 DNA技術(shù) ?質(zhì)粒載體 pBR322 ? ， 能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制； ? 2種篩選標(biāo)記基因； ? DNA插入的位點(diǎn)； ? 。 分為松弛型和嚴(yán)緊型復(fù)制兩種類型質(zhì)粒 。 ? DNA分子 ， 小的不足1500bp， 大的 100kb以上 。 需具備三個(gè)條件： ● 有插入位點(diǎn)； ● 能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制； ● 有篩選標(biāo)記基因。 ?該酶能以具有 3′OH 的 DNA或 RNA為引物，以 mRNA為模板從 5′→3′ 聚合生成 cDNA 。 ?（ 2） T4 DNA連接酶 T4噬菌體 DNA編碼； 既連接具互補(bǔ)粘性末端的 DNA片段 ， 也能連接平頭末端 。 23 重組 DNA技術(shù) 粘性末端 23 重組 DNA技術(shù) ? DNA連接酶 催化 PO4和 OH形成磷酸二酯鍵。粘性末端 ● 3 39。 23 重組 DNA技術(shù) ?（ 6）切割片段的末端 ? 兩條鏈末端交錯(cuò)對(duì)稱。 只寫單鏈的核苷酸序列。 23 重組 DNA技術(shù) ?（ 4）限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列 能識(shí)別的特定核苷酸序列。 ?（ 3）限制性內(nèi)切酶的命名 根據(jù)來(lái)源命名。 ?（ 2）限制性內(nèi)切酶的類型 I型、 II型和 III型。 23 重組 DNA技術(shù) ? PCR ?1. PCR技術(shù)的基本原理 ? PCR反應(yīng)過(guò)程： ● 雙鏈 DNA變性 （ 90℃ ～ 95℃ ） 成為單鏈 DNA； ● 引物復(fù)性 （ 37℃ 60℃ ） 同單鏈 DNA互補(bǔ)序列結(jié)合； ● DNA聚合酶催化 （ 70℃ ～ 75℃ ） 使引物延伸 。 23 重組 DNA技術(shù) Southern印跡 23 重組 D
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