【正文】 3碳原子的比例僅為22%，而上市藥物一般為47%.所以，一步改造的改造策略選擇了去環(huán)化，如下圖所示：這個(gè)策略相當(dāng)成功，并且有許多良好的性質(zhì)，如耐突變、高選擇性等。但是比較30與化合物1，發(fā)現(xiàn)其亞型選擇性不同。然后發(fā)現(xiàn)將苯甲酸的苯環(huán)置換為吡啶環(huán)后，在GT1a和GT1b上的活性都得到提高。同時(shí)，在咪唑上的某些鹵素取代也改善了化合物的藥藥相互作用問(wèn)題。而大體積的1,4三氮唑取代使活性降低。然而，鹵素取代也使在淋巴細(xì)胞上的毒性提高。引入雜環(huán)，改變聯(lián)苯的角度，也對(duì)活性不理利。有文獻(xiàn)報(bào)道了BMS790052聯(lián)苯結(jié)構(gòu)Linker/Core的構(gòu)效關(guān)系5。并且發(fā)現(xiàn)用雜芳環(huán)取代乙烯基活性也是中等程度降低，然而這賦予了化合物優(yōu)化藥代特性的能力。首先，通過(guò)對(duì)烯烴電子生物等排體的考察，發(fā)現(xiàn)其所連苯環(huán)傾向于反式共平面結(jié)構(gòu)，而換成飽和烷基鏈后活性降低67倍，醚鏈活性比烷基鏈進(jìn)一步降低16倍，對(duì)此，進(jìn)行構(gòu)象分析，認(rèn)為兩邊的苯環(huán)傾向于共平面或平行排列，而不是處于正交平面：然后，考察鏈的長(zhǎng)短對(duì)活性的影響，發(fā)現(xiàn)將乙烯基置換成亞甲基，羰基，氧，都會(huì)使活性極大降低。 構(gòu)效關(guān)系研究：我們將化合物分成四個(gè)部分討論起構(gòu)效關(guān)系： 聯(lián)苯的Linker/Core結(jié)構(gòu)，這部分已經(jīng)被密集的考察過(guò)； 咪唑部分，研究很少； 脯氨酸部分，僅有氟化和三元環(huán)化有報(bào)道； 氨基酸及其“蓋子”部分，這部分被密集考察過(guò)。BMS411的結(jié)構(gòu)如下圖所示：結(jié)合方式通過(guò)QUANTA軟件模擬，可見(jiàn)BMS411活性狀態(tài)為γ扭曲形結(jié)構(gòu)，橫穿NS5A二聚體的接觸面，其“蓋子”區(qū)靠近Y93氨基酸，其核心區(qū)域平躺于氨基酸L31殘基之下，氨基酸殘基Q54靠近BMS411的末端，并與α螺旋的氨基酸殘基L28相接觸。CYP3A4 (μM) IC90100CYP2D6 (μM) IC50100CYP2D6 (μM) IC90100CYP2C9 (μM) IC50177。HCV replicon (pM) EC9020177。表一、代表性NS5A抑制劑CompCompanyIn vitro EC50 (pM)Phase1b 1aBMS790052(daclatasvir)Bristol–Myers Squibb9503GS5885Gilead4342ABT267（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）US2012172368A1Abbott5142GSK2336805，WO2011091446A1GlaxoSmithKline8442ACH2928（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）Achillion2–3461ACH3102（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）US2012302538A1Achillion4101PPI461（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）WO2010096777A1Presidio102101續(xù)表一、代表性NS5A抑制劑CompCompanyIn vitro EC50 (pM)Phase1b 1aPPI668（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）US2012115855A1Presidio101001IDX719（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）US2011150827A1Idenix381EDP239（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）US2011217261A1Enanta/Novartis434PCMK8742（結(jié)構(gòu)未知，以專(zhuān)利中代表性化合物代替）US2012083483A1Merck34PC還有另外一些結(jié)構(gòu)類(lèi)型，僅挑選其中高活性代表化合物，見(jiàn)下表：表二、其它代表性NS5A抑制劑CompCompanyIn vitro EC50 (pM)注1b 1aExample 1002BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONA15230Example 44JANSSEN Ramp。Daclatasvir (BMS790052)圖四、NS5A抑制劑結(jié)構(gòu)。三、NS5A抑制劑研究進(jìn)展：大約有60篇專(zhuān)利報(bào)告了NS5A抑制劑作為HCV治療藥物。由A和B圖分析可見(jiàn)，此二聚體在靠近氮端形成了一個(gè)相對(duì)平面的、堿性表面，并在兩個(gè)IB區(qū)形成了大的溝。A）三個(gè)方向的帶狀圖。B、D兩圖顯示區(qū)域一的保守度，一不同顏色表示，品紅色表示95%，淡粉紅色表示75%95%，白色表示75%。圖二、NS5A區(qū)域一單體結(jié)構(gòu)。NS5A區(qū)域一中的36198殘基晶體結(jié)構(gòu)顯示其二聚為一個(gè)U型結(jié)構(gòu)，并且內(nèi)表面排列一系列堿性氨基酸，此氨基酸被認(rèn)為是與病毒RNA結(jié)合部位。最近研究又發(fā)現(xiàn)區(qū)域三（356447殘基）在病毒組裝而不是RNA復(fù)制中起到關(guān)鍵作用。圖一 NS5A在HCV生命周期中的位置NS5A的區(qū)域一（1213殘基）包含一個(gè)鋅離子結(jié)合區(qū)和一個(gè)兩親的氮端螺旋，此螺旋能夠促進(jìn)膜連接（membrane association）。NS5A是一個(gè)含有447個(gè)殘基的磷蛋白，有三個(gè)蛋白域2。二、NS5A靶點(diǎn)：NS5A在HCV生命周期中的復(fù)制和組裝階段發(fā)揮作用，如下圖一所示。而GT1型HCV感染者屬于難治性基因型，中國(guó)的丙肝患者多數(shù)屬于此類(lèi)，%，%，%。NS5A在HCV復(fù)制和組裝中起到重要作用，還與宿主免疫反應(yīng)有關(guān)，是一個(gè)比較新穎的靶點(diǎn)，此類(lèi)藥物大多處在臨床階段，這給我們很多追趕機(jī)會(huì)研發(fā)出中國(guó)自主的丙肝治療藥物。此治療方案對(duì)GT1型HCV感染者效果不明顯，并且存在明顯副作用。建議選取下列化合物做起點(diǎn)，進(jìn)行HCV創(chuàng)新藥物項(xiàng)目開(kāi)發(fā)：核苷類(lèi)HCV核苷聚合酶NS5B抑制劑，此類(lèi)抑制劑活性好、耐藥性好，并且比較廣譜： Sofosbuvir (GS7977) Mericitabine (RG7128)聯(lián)苯類(lèi)蛋白酶NS5A抑制劑，此類(lèi)抑制劑活性極高，并且和其它藥物連用效果較好，然而不耐病毒突變：Daclatasvir (BMS790052)TLR7激動(dòng)劑：此類(lèi)化合物也是治療HBV潛在藥物。綜合上述總結(jié)，我們認(rèn)為HCV藥物最具潛力治療方式是將核苷聚合酶抑制劑（NS5B抑制劑）、NS5A抑制劑、蛋白酶抑制劑結(jié)合的療法。首先針對(duì)耐藥突變問(wèn)題，考慮雞尾酒式療法，以?xún)煞N或三種不同作用靶點(diǎn)或機(jī)制的藥物進(jìn)行治療；并且，針對(duì)耐藥突變問(wèn)題，臨床試驗(yàn)顯示組合中需要含有至少一個(gè)高突變門(mén)檻的藥物成分。途徑/新穎性藥物進(jìn)展備注（靶點(diǎn)等）評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)潛力利巴韋林和IFN連用最早上市療程長(zhǎng)副作用較大☆☆☆☆★★★☆疫苗★★★☆GI5005Phase 1bTherapeutic vaccine (Based on NS3Core fusion protein)★★★☆★★★☆抗體★★★☆CivacirPhase 3AntiHCV enriched immune globulin product★★★☆★★★☆BavituximabPhase 2aminophospholipids on infected cells★★★☆★★★☆多樣調(diào)節(jié)★★★☆ZadaxinPhase 3A 28 amino acid peptide withimmunomodulating properties★★★☆★★★☆EMZ702Phase 2Interferon enhancer★★★☆★★★☆四、總結(jié)和展望：目前已有幾十種DAAs和HTAs藥物進(jìn)入臨床或已經(jīng)上市，為HCV的徹底治愈帶來(lái)曙光，并宣告了全口服、多組分、無(wú)干擾素、廣譜、低副作用、高病毒學(xué)治愈率時(shí)代即將到來(lái)。途徑/新穎性藥物進(jìn)展備注（靶點(diǎn)等）評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)潛力RNA復(fù)制★★★☆JTK109DiscontinuedNS5BDiscoveryNS5B★★★★★★★☆VX759No Development ReportedNS5BClemizolePhase 1 ClinicalNS4B★★★★★★★☆DEBIO025Phase 3 ClinicalCyclophilin 抑制劑與其它藥物聯(lián)用，GT1★★☆☆★★★☆miravirsen、病毒組裝和釋放。途徑/新穎性藥物進(jìn)展備注（靶點(diǎn)等）評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)潛力RNA復(fù)制★★★☆Sofosbuvir (GS7977)Phase 3 ClinicalNDANS5B★☆☆☆★★★★Mericitabine (RG7128)Phase 2 ClinicalNS5B★★☆☆★★★☆VX135Phase 2 ClinicalNS5B★★★☆★★★☆A(yù)BT333Phase 3 ClinicalNS5B PalmI/C★★★☆★★★☆BI207127Phase 3 ClinicalThumbI/A★★★☆★★★☆BMS791325Phase 2 ClinicalThumbI/A★★★☆★★★☆Lomibuvir(VX222)Phase 2 ClinicalNS5B ThumbII/B★★★☆★★★☆A(yù)BT072Phase 2 ClinicalPalmI/C★★★☆★★★☆Setrobuvir (RG7790)Phase 2 ClinicalPalmI/C★★★☆★★★☆GS9669Phase 2 ClinicalNS5B ThumbII/B★★★☆★★★☆TMC647055Phase 2 ClinicalNS5B ThumbI/A★★★☆★★★☆、HCV RNA復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的BS4B和NS5A。不耐突變，與其它藥物連用效果好。途徑/新穎性藥物進(jìn)展備注（靶點(diǎn)等）評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)潛力蛋白加工★★★☆Telaprevir上市NS3/NS4Aincrease SVR rates from~50% to~70%★★★☆Boceprevir上市NS3/NS4AHigh toward GT1, lower toward GT2 and GT3★★★☆Simeprevir(TMC435)Phase 3NDANS3/NS4A★★★☆Faldaprevir (BI201335)Vaniprevir (MK7009)Asunaprevir (BMS650032)ABT450Danoprevir (RG7227)Sovaprevir (ACH1625)Vedroprevir (GS9451)MK5172Neceprevir (ACH2684)Phase 23 NS3/NS4A與上述三個(gè)化合物結(jié)構(gòu)類(lèi)似加黑部分為第二代產(chǎn)品，活性更強(qiáng)，基因型更廣，更耐突變★★★☆GS9132DiscontinuedACH1095No Development ReportedNS2NS3（理論階段）★★★★★★★☆、HCV RNA復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的BS4B和NS5A。、病毒進(jìn)入并脫殼。圖三、HCV的生命周期三、 以生命周期劃分HCV治療藥物整理對(duì)HCV不同周期時(shí)藥物所針對(duì)的不同途徑，我們分四個(gè)階段進(jìn)行總結(jié)，大體如下圖所示：同時(shí)，我們對(duì)各個(gè)途徑的新穎性，各個(gè)靶點(diǎn)、藥物的風(fēng)險(xiǎn)、潛力進(jìn)行了簡(jiǎn)單的評(píng)級(jí)，黑色四星（★★★★）為最高，白色四星（☆☆☆☆）最低。而NS5B則具有RNA依賴(lài)的RNA聚合酶活性，參與HCV基因組復(fù)制。此外，NS3蛋白還具有螺旋酶活性，參與解旋HCVRNA分子，以協(xié)助RNA復(fù)制，NS4的功能尚不清楚。非結(jié)構(gòu)蛋白部分則包括NS2，NS3，NS4A，NS5A和NS5B，非結(jié)構(gòu)蛋白對(duì)病毒的生活周期非常重要。CE1E2p7NS2NS3NS4NS5339。一、 HCV的結(jié)構(gòu)：如右圖所示，HCV病毒體呈球形，直徑小于80nm（在肝細(xì)胞中為3640nm，在血液中為3662nm），為單股正鏈RNA病毒，在核衣殼外包繞含脂質(zhì)的囊膜，囊膜上有剌突. 圖一、HCV結(jié)構(gòu)如下圖所示，HCV的RNA大約由9500－10000bp組成，5′和3′非編碼區(qū)（NCR）分別有319341bp和2755bp，含有幾個(gè)順向和反向重復(fù)序列，可能與基因復(fù)制有關(guān)。所以，全球?qū)π聶C(jī)制的強(qiáng)效抗HCV藥物的研發(fā)正在如火如荼的進(jìn)行中，我們也對(duì)其產(chǎn)生極大興趣。近來(lái)，全口服、無(wú)干擾素的直接靶向病毒的新一代抗丙肝藥物大量出現(xiàn)，為丙肝的徹底治愈帶來(lái)希望，其中尤其以吉立德（Gilead）公司的sofosbuvir最具潛力。但干擾素在全球并不能普遍獲得，并不總是耐受良好，有些病毒基因型對(duì)干擾素的反應(yīng)優(yōu)于其它基因型，而且許多使用干擾素治療的人未完成其療程。目前，還沒(méi)有預(yù)防丙