【正文】 生物科學(xué)學(xué)士分離純化王 姝女沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)學(xué)士組織培養(yǎng)焦 鵬男中科院生態(tài)所微生物學(xué)碩士分離純化沈陽市惠生高技術(shù)醫(yī)藥開發(fā)有限公司專家組主要成員姓 名性 別出生年月工作單位研究方向職稱職 務(wù)歐陽藩男中科院國家生化中心生化工程教授主任 博導(dǎo)吳立軍男沈陽藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教授博 導(dǎo)劉世強(qiáng)男沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)細(xì)胞工程教授博 導(dǎo)六． 項(xiàng)目進(jìn)度及資金需求 計(jì)劃進(jìn)度安排．12： 建立植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)平臺，建立中試車間，2001年8月進(jìn)行蟲草多糖、蟲草素保健食品的報(bào)批工作。在這樣一個(gè)高技術(shù)的行業(yè)，人才的領(lǐng)先將決定技術(shù)的領(lǐng)先，進(jìn)而決定市場的領(lǐng)先。本項(xiàng)目最終將通過境內(nèi)外的證券市場上市套現(xiàn)。隨著企業(yè)生產(chǎn)基地的逐步建成，產(chǎn)品品種的不斷豐富，產(chǎn)品的收益不斷增加，企業(yè)的市場形象和地位將不斷提高。 遠(yuǎn)期策略一方面，由于天然植物藥（中草藥）是中國巨大的醫(yī)藥寶庫，中國擁有世界上最為豐富的中草藥資源，本項(xiàng)目的成功運(yùn)作將為其他中醫(yī)藥制品的研究與開發(fā)提供一個(gè)范例，因此，在蟲草素項(xiàng)目開發(fā)和運(yùn)作成功之后，利用植物組織、細(xì)胞培養(yǎng)的方法來進(jìn)行其他天然植物藥的開發(fā)將陸續(xù)展開，并逐步建立起天然植物藥的標(biāo)準(zhǔn)樣品和基因數(shù)據(jù)庫。 （取得新藥證書以后）特別是在獲取新藥證書后，可以通過技術(shù)轉(zhuǎn)讓的形式將新藥證書賣給有關(guān)的生產(chǎn)企業(yè)，從而實(shí)現(xiàn)前期投資的盡快回收。如從蟲草培養(yǎng)液中獲取蟲草素，作為保健食品原料，向各保健品廠銷售。目前初步確定的業(yè)務(wù)模式包括：■在植物細(xì)胞培養(yǎng)中試過程中可以產(chǎn)生大量的中間產(chǎn)品，這些產(chǎn)品可以作為原料藥對外銷售；■在接受委托進(jìn)行天然植物藥單體有效成分高純度標(biāo)準(zhǔn)樣品開發(fā)的過程中，可以不斷產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)樣品，這些標(biāo)準(zhǔn)樣品可以直接對外出售。，不斷拓展產(chǎn)業(yè)空間：應(yīng)用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，開發(fā)具有我國獨(dú)立知識產(chǎn)權(quán)的中藥新藥和保健品系列，不斷拓展產(chǎn)業(yè)空間。然后再申報(bào)高類別準(zhǔn)字號，提高申報(bào)成功率，逐步降低報(bào)批風(fēng)險(xiǎn)。② 在國內(nèi)爭取專利保護(hù)的同時(shí)力爭使該產(chǎn)品以價(jià)格、質(zhì)量和服務(wù)優(yōu)勢進(jìn)入《中國藥品目錄》，并與擁有廣泛經(jīng)銷渠道的大型醫(yī)藥集團(tuán)建立合作關(guān)系，共同開發(fā)及推廣蟲草素及蟲草多糖等產(chǎn)品，逐步降低市場風(fēng)險(xiǎn)。 （4）市場不定因素的影響：主要是難以預(yù)料的因素的影響。 （2）產(chǎn)品積壓：市場策劃是否到位有可能影響產(chǎn)品銷售。三╯脫氧腺苷（化學(xué)合成）作為藥物在美國已經(jīng)上市。但多為復(fù)方制劑，單體藥物（三╯脫氧腺苷）僅國外有上市，價(jià)格很高。目前細(xì)胞罐培養(yǎng)已經(jīng)初步得到證實(shí)，有待于擴(kuò)大規(guī)模，進(jìn)一步驗(yàn)證。但也存在一定的技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)和市場風(fēng)險(xiǎn)。項(xiàng)目工藝已申報(bào)國家專利，發(fā)明權(quán)及使用權(quán)歸我公司獨(dú)家所有，不存在法律糾紛。運(yùn)用微生物發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)從冬蟲夏草的培養(yǎng)液中分離提取蟲草素和蟲草多糖等有效物質(zhì)的研究國內(nèi)外有許多報(bào)道，但均以搖瓶發(fā)酵為主，未達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平。 本項(xiàng)目產(chǎn)品是通過生物反應(yīng)器大規(guī)模生產(chǎn)有效成分，節(jié)省大量耕地，保護(hù)中藥自然資源和生態(tài)環(huán)境。限制其發(fā)展的主要因素是原料和有效成分含量。，,年產(chǎn)值338萬g，100元/盒，每盒10粒，利潤情況：每盒成本30元。目前在我國含有蟲草素和蟲草多糖的制劑每年銷售額20億元。極具市場競爭力。直接成本雖低但蟲草素和蟲草多糖等的含量則非常低，生產(chǎn)周期長約為75天左右。目前國際上公認(rèn)的替代產(chǎn)品為人工培養(yǎng)冬蟲夏草或北冬蟲夏草菌絲體，篩選有效成分含量高的菌種進(jìn)行人工培育，得到的菌絲體進(jìn)行一些常規(guī)處理制成浸膏、膠囊或口服液。特別是天然冬蟲夏草已作為瀕臨滅絕的植物種受到世界以及我國政府的重點(diǎn)保護(hù)，嚴(yán)禁采摘。由于其具有很高的藥用價(jià)值，深受患者喜愛。從種子選擇、種子培養(yǎng)、生物反應(yīng)器深層發(fā)酵培養(yǎng)到最后分離、純化和檢測，建立了科學(xué)的培養(yǎng)生產(chǎn)體系。比天然的冬蟲夏草和人工栽培的北蟲草高5倍以上。由于蟲草素和蟲草多糖主要以胞外分泌為主，經(jīng)過先進(jìn)的分離、純化技術(shù)得到的蟲草素和蟲草多糖等的含量均比天然的冬蟲夏草和人工栽培的北蟲草有極顯著的提高。在培養(yǎng)液中附加10余種微量元素和氨基酸及其它有機(jī)成分，合理組配很好地控制了菌球的生長過程，進(jìn)而縮短了培養(yǎng)周期，降低了成本，能有效提高其產(chǎn)量。SOD（超氧化物歧化酶）可以消除機(jī)體內(nèi)超氧自由基，具有抗衰老、抗癌抑癌的作用。并有降血糖的作用。蟲草素是一種具有抗菌活性的核苷類物質(zhì)，對核多聚腺苷酸聚合酶有很強(qiáng)的抑制作用。冬蟲夏草主要由于以下疾病的治療：反復(fù)發(fā)作的病毒性感冒易感者細(xì)菌性傳染病易感者免疫球蛋白缺乏或減少和血紅蛋白低下者肝炎、腎炎、呼吸系統(tǒng)疾病的輔助治療各種惡性腫瘤化療、放療副作用的抑制和控制重度體力、腦力勞動疲勞的修復(fù)和病后的機(jī)體康復(fù)功能性體質(zhì)虛弱和陰虛患者。所以大力開展蟲草的研究特別是生產(chǎn)、分離、提取有效成分的研究就具有極大的價(jià)值。所以大力開展蟲草的研究和人工培養(yǎng)就具有極大的價(jià)值。近些年來，隨著對冬蟲夏草認(rèn)識領(lǐng)域的不斷擴(kuò)大，對蟲草的需求，不僅國內(nèi)市場日趨擴(kuò)大，而且東南亞、日本、美國等國際市場的需求量也在增加、依靠自然采收，很受資源的限制，常常出現(xiàn)供不應(yīng)求的現(xiàn)象。迄今國內(nèi)外市場銷售的有關(guān)冬蟲夏草藥品及營養(yǎng)品其原料來源一是取自天然的冬蟲夏草，二是取自人工栽植的蟲草，蟲草菌絲體經(jīng)過傳統(tǒng)的醇洗或水洗制成膠囊及液體口服等劑型，藥用成分復(fù)雜，有效成分含量低。特別是蟲草素的天然含量明顯高于天然冬蟲夏草。運(yùn)用生物技術(shù)方法深層發(fā)酵培養(yǎng)蟲草菌絲體，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中含有豐富的蛋白質(zhì)、Va、Ve等多種維生素及硒、鋅、錳、鉻等多種必需微量元素。中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué) 認(rèn)為冬蟲夏草性味甘、平、入肺腎經(jīng)，功能益肺、腎、 止咳嗽、補(bǔ)虛損、益精氣。無性生殖為蛹草擬青霉(Paecilmyces militarae), 經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)論證北冬蟲夏草不僅具有特殊的營養(yǎng)價(jià)值，而且有明顯的藥用價(jià)值。Sp,PL).為子囊菌亞門(Asycotina)麥角菌目(Clavicipitales)麥角菌科(Cordycepps)真菌子座單生或有數(shù)個(gè)從昆蟲頭部發(fā)出，有時(shí)從節(jié)上發(fā)出，橙黃色，大多不分枝，高2～5厘米，頭部棒形，長1～2厘米，～。沈陽惠生已經(jīng)成功仿制其繁育的自然生態(tài)環(huán)境，為進(jìn)一步進(jìn)行肉蓯蓉的人工繁育打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。近年來肉蓯蓉野生資源破壞嚴(yán)重，產(chǎn)量銳減。主產(chǎn)于內(nèi)蒙、新疆、甘肅、青海等省沙漠中，因是一味補(bǔ)腎壯陽、藥力持久從容的滋補(bǔ)中藥材，故被譽(yù)為“沙漠人參”。按照現(xiàn)有生產(chǎn)規(guī)模(中試規(guī)模)，月產(chǎn)雪蓮總黃酮500克，年產(chǎn)5公斤左右，可以用于生產(chǎn)22萬支雪蓮注射液（），以每支市場價(jià)格6元計(jì),可產(chǎn)生銷售額1320萬元。沈陽惠生已經(jīng)在組培獲得其有效成分雪蓮黃酮和金合歡素的獲取技術(shù)上獲得突破，已經(jīng)進(jìn)入中試階段?，F(xiàn)在，只要能夠涉足的地方，雪蓮均被一掃而光。它對風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及婦科病、癌癥有奇特療效。三. 產(chǎn)品、市場描述以及風(fēng)險(xiǎn)分析在目前階段，沈陽惠生將主要集中于國家嚴(yán)禁采伐的三個(gè)瀕危珍惜植物冬蟲夏草、雪蓮以及肉蓯蓉（沙漠植物）的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的開發(fā)以及產(chǎn)業(yè)化工作。一個(gè)世界范圍內(nèi)的“中醫(yī)熱”正在升溫，這將為中醫(yī)藥的發(fā)展提供良好的機(jī)遇。據(jù)經(jīng)濟(jì)專家預(yù)測，一旦“入世”，受益最大的是紡織業(yè)、交通旅游業(yè)和中醫(yī)藥行業(yè)。，發(fā)展中醫(yī)藥國粹的需要：中國加入世界貿(mào)易組織（WTO）給中醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)帶來了新機(jī)遇，是中國經(jīng)濟(jì)發(fā)展中的重大轉(zhuǎn)折點(diǎn)。因此，應(yīng)用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，在人工控制條件下進(jìn)行，通過生物反應(yīng)器大規(guī)模生產(chǎn)中藥有效成分，解決了原料來源，節(jié)省大量耕地，保護(hù)中藥自然資源，特別是那些瀕危的野生中藥資源，有利于中藥的持續(xù)發(fā)展。隨著中藥生產(chǎn)的粗放式經(jīng)營與管理導(dǎo)致的亂采、亂伐使生態(tài)環(huán)境遭到嚴(yán)重破壞，中草藥資源嚴(yán)重匱乏，有些植物種特別是那些珍貴物種已處于瀕臨滅絕的狀況。，促進(jìn)可持續(xù)發(fā)展，保護(hù)生態(tài)環(huán)境的需要：目前國際社會對天然藥物的需求日益擴(kuò)大。，提高中藥產(chǎn)量和質(zhì)量的需要：傳統(tǒng)中藥產(chǎn)業(yè)是以種植和野生為主的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)，其產(chǎn)量有限，質(zhì)量不穩(wěn)定，品種混亂，嚴(yán)重制約了中藥產(chǎn)品的水平。這無疑對我國中藥產(chǎn)業(yè)提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。在國際中草藥市場150億美元（不含我國大陸市場）的份額中，中國僅占其中的5％，且大部分為原料藥、保健品。是當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的熱點(diǎn)問題和主要發(fā)展方向及新的經(jīng)濟(jì)增長點(diǎn)，也是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的一個(gè)重要舉措，開創(chuàng)了一條低成本、高產(chǎn)出、無污染的工業(yè)化生產(chǎn)天然植物藥的新路。該技術(shù)尤其適合于資源短缺，采集困難，種植要求高的名貴藥材。大規(guī)模的動、植物細(xì)胞培養(yǎng)在生產(chǎn)天然藥物、基因工程藥物和分離純化單一組分方面表現(xiàn)出其鮮明物點(diǎn)。自從Capseik Telling率先采用懸浮培養(yǎng)方法成功地培養(yǎng)出小鼠細(xì)胞（BHK）和Tabata，國內(nèi)外動、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)研究很快遍布各個(gè)醫(yī)藥領(lǐng)域。在目前階段，沈陽惠生將主要集中于國家嚴(yán)禁采伐的三個(gè)瀕危珍惜植物冬蟲夏草、雪蓮以及肉蓯蓉（沙漠植物）的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的開發(fā)以及產(chǎn)業(yè)化工作。依托來自于多所國內(nèi)著名學(xué)府、研究院以及公司自有的高素質(zhì)的研發(fā)隊(duì)伍，沈陽惠生建立了一套成熟的植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，應(yīng)用生物工程研究成果，通過應(yīng)用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)里的離體快繁技術(shù)，大規(guī)模培養(yǎng)、分離、提取中藥有效成分，特別是對那些瀕危的野生植物藥、天然含量低以及具有很高臨床療效藥物進(jìn)行開發(fā)。本項(xiàng)目共需資金人民幣3000萬元，其中1000萬元申請國家計(jì)委貼息貸款，1000萬元來自當(dāng)?shù)厣虡I(yè)銀行，剩余1000萬元以股權(quán)投資方式引