【正文】 有酸產(chǎn)生（有的還產(chǎn)生氣體）。待菌苔明顯生長后，在平板面滴加碘液。有的細(xì)胞能產(chǎn)生淀粉酶，分泌到細(xì)胞外，將淀粉水解成麥芽糖后進(jìn)入細(xì)胞，淀粉遇碘呈紫色；細(xì)菌水解淀粉，則菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈，即可知該菌株是否分泌淀粉酶。（2）操作步驟取受檢菌菌苔涂于干凈的載玻片上，向菌苔上滴一滴30%雙氧水，有氣泡產(chǎn)生的為過氧化氫酶陽性，否則為陰性。④ 觀察在10s內(nèi)菌苔或其邊緣呈現(xiàn)紅色者為陽性，10~30s出現(xiàn)紅色者為遲緩陽性，不呈現(xiàn)紅色或30s以后呈紅色均屬陰性。② 在以干凈的平皿里放一張濾紙，滴上1%鹽酸對氨基二甲基苯胺水溶液，僅使濾紙濕潤即可，不要過濕。由此反應(yīng)可知受檢菌是否具有細(xì)胞色素氧化酶。并記錄細(xì)菌的大小。④ 復(fù)染 滴加石碳酸復(fù)紅液復(fù)染1min，水洗。② 媒染 滴加魯古氏碘液，1min后水洗。不能將載玻片在火上烤，否則菌體形態(tài)會毀壞。② 干燥 將圖片放在室溫下自然干燥。G+細(xì)胞因壁厚肽聚糖網(wǎng)的層次多和結(jié)構(gòu)致密，以及不含脂類等原因，故脫色，就可把類脂等原因，故脫色后，可把結(jié)晶紫復(fù)合物阻攔在細(xì)胞內(nèi)，故呈紫色，反之，G細(xì)菌因細(xì)胞壁薄，外膜類脂含量高，以及肽聚糖層薄且交聯(lián)松散，故用脫色劑處理后，就可把類脂和結(jié)晶紫復(fù)合物溶出細(xì)胞，這種無色細(xì)胞再經(jīng)番紅復(fù)染，就呈紅色。 革蘭氏染色（1）基本原理：由于不同的細(xì)菌細(xì)胞壁化學(xué)成分的不同而引起物理化學(xué)性質(zhì)的差別，導(dǎo)致革蘭氏染色反應(yīng)不同。（3）降解菌的選擇選擇降解效率較高的兩株菌，做后面的細(xì)菌生理生化試驗和鑒定，以及最后的菌種保藏。③ 分別向每支試管中加入1%的KII2顯色劑，顯色時間為120min。（2）降解率的測定① 經(jīng)過108小時的培養(yǎng)，分別用移液器取培養(yǎng)液5mL到5mL的離心管中，在8000rpm離心10分鐘。滅菌后接入此前篩到得8株菌，9號瓶不接菌。④ 分光光度計480nm波長，以蒸餾水作參比，測定吸光值。%的KII2。10號試管不加標(biāo)準(zhǔn)液。 AEO7濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制操作步驟：① AEO7加入100mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL。于10ml試管中加入10ml一定濃度的AEO7溶液，搖勻靜置120min。 特征吸收波長的測定準(zhǔn)確稱取1g I2和2g KI,加蒸餾水溶解，定容至100mL作為KII2顯色劑。Ross和Becher、等利用碘的這一性質(zhì)測定聚氧乙烯型非離子表面活性劑的臨界膠束濃度，認(rèn)為碘與表面活性劑的相互反應(yīng)是基于碘與表面活性劑中氧原子的誘導(dǎo)作用導(dǎo)致了電荷轉(zhuǎn)移形成絡(luò)合物。因此用在篩選培養(yǎng)基上點種的方法，通過長出的菌苔的時間的長短以及大小，以及對篩得的純種菌進(jìn)行進(jìn)一步的篩選，最后選出8個菌株進(jìn)入到下面的降解性能測定階段，這樣就大大縮短了實驗時間，提高了篩選效率[19,20]。⑦ 鏡檢 待標(biāo)本完全干燥后，先用低倍鏡和高倍鏡觀察，將典型部位移至視野中央，滴一滴香柏油在涂有菌體的部位，再用油鏡觀察。⑤ 水洗 傾去染色液，斜置載玻片，用自來水的細(xì)水流由載玻片上端流下，不得直接沖在涂菌處，直洗至從載玻片上流下的水中無染色液的顏色為止。不能將載玻片在火上烤，否則菌體形態(tài)會毀壞。② 干燥 將圖片放在室溫下自然干燥。純化：挑取劃線分離單菌落，繼續(xù)劃線分離，30℃培養(yǎng)，長出單菌落后，用單染色法檢驗細(xì)菌是否為純種菌，如果不是，繼續(xù)挑取單菌落劃線分離，直到檢驗為單菌落為止。分別取各梯度濃度的稀釋液500μL涂布在含5‰AEO7的無機鹽固體培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)3天，長出單菌落。進(jìn)入到菌種分離純化階段。復(fù)篩：再取初篩培養(yǎng)液1mL，加入到新鮮的含有2‰ AEO7但不加酵母膏的無機鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基，同樣條件培養(yǎng)。再取培養(yǎng)液1mL加入到新鮮的LB液體培養(yǎng)基中，同樣條件培養(yǎng)，重復(fù)三次。根據(jù)以上原理，并結(jié)合本實驗特點，我采用含有AEO7的LB液體培養(yǎng)基作為富集培養(yǎng)的培養(yǎng)基。 菌種的富集原理：富集培養(yǎng)是微生物學(xué)家最強有力的手段之一主要是指利用不同微生物間生命活動特點的不同，制訂特定的環(huán)境條件，使在該條件下只有目標(biāo)微生物生長旺盛，從而使其在群落中數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。再分別從菜園和梨園土壤中采集地表層以下15cm深處的土樣，分別標(biāo)號為②、③。（8）蛋白胨胱氨酸培養(yǎng)基[18]蛋白胨 10 g， 胱氨酸 g，Na2SO4 g， 蒸餾水 1000mL。7H2O g，NH4H2PO4 1 g，K2HPO4 。（6）葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基葡萄糖 5g，蛋白胨 5g，K2HPO4(或NaCl) 5g，蒸餾水 1000mL。（4）休和利夫培養(yǎng)基葡萄糖10 g，蛋白胨 2 g，NaCl 5 g，K2HPO4 g，水洗瓊脂 5 g左右，溴麝香草酚藍(lán) g，蒸餾水 1000mL。（2）無機鹽基礎(chǔ)篩選培養(yǎng)基NH4Cl , MgS04 . 7H2O g， g，K2HPO4 g， KCl g，酵母膏 g， AEO7 g（ g），蒸餾水 1000mL。7H2O分析純上海金山區(qū)興塔美興化工廠11K2HPO4分析純國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司12KCl分析純國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司13FeSO4利用篩選出的高效降解菌株對含有一定濃度的AEO廢水進(jìn)行生物處理，檢驗降解效果。然后通過在同樣成分的平板上分離純化。研究獲得降解AEO的菌株。 研究內(nèi)容（1）脂肪醇聚氧乙烯醚（AEO）降解菌的篩選、分離、純化；（2）測定所篩選的菌株在正常工作環(huán)境下對AEO7的降解性能；（3）脂肪醇聚氧乙烯醚（AEO）降解菌的鑒定。因此，精確測定水樣中被微生物降解前、后的濃度，其前后濃度差就是被微生物降解的AEO濃度，從而可以計算出降解率[17]。在酶的作用下發(fā)生CO鏈的氧化斷裂生成烷基酸，進(jìn)一步連續(xù)的β氧化代謝生成二氧化碳和水。在自然界中，AEO的生物降解如圖1所示[16]。第二步為達(dá)到環(huán)境可以接受程度的生物降解，降解產(chǎn)物不再導(dǎo)致污染。 AEO生物降解性和降解機理Balson和Felix[12]認(rèn)為，表面活性劑的生物降解性是指在微生物的作用下，表面活性劑分子結(jié)構(gòu)的破壞，轉(zhuǎn)化為微生物的代謝產(chǎn)物或細(xì)胞濃度，并產(chǎn)生二氧化碳和水。這類活性劑的治理方法很多，但結(jié)合對環(huán)境的影響、經(jīng)濟因素、操作條件等諸多因素，生物降解法如活性污泥法、生物膜法、篩選菌種法等[7,8]是目前最有應(yīng)用前景。 (2)可將LAS完全礦化。OH，O3，H2O2，HO2(5) 以較低的電流密度獲得較大的電流強度，能耗顯著降低。(3) 反應(yīng)速率快，時空產(chǎn)率較二維可以提高兩個數(shù)量級。與傳統(tǒng)的二電極相比，該法有如下特點:(1) 具有更大的電極比表面積，從而增加了催化反應(yīng)的面體比，提高了污染物的解速率。 發(fā)展趨勢—復(fù)極性固定床電解法近年來人們不斷研究開發(fā)AEO廢水等難降解有機廢水的處理技術(shù)，其中復(fù)極性固定床電解法 (BPBC)這一新興技術(shù)成為研究的熱點。對一般AEO廢水效率高，處理能力大，但對高濃度的AEO廢水去除率不高，且降解不徹底。在生物法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的固定化細(xì)胞技術(shù)是處理AEO廢水的新興技術(shù)，其菌體穩(wěn)定性、抗毒性強，適應(yīng)性較高，處理效率高，可反復(fù)使用，且反應(yīng)器運行時間長。但其缺點是AEO對厭氧微生物有一定的抑制作用。在我國，生物法是AEO廢水處理的主要方法，其中活性污泥法應(yīng)用最廣，一般條件下AEO的去除率可達(dá)80%一95%。多相催化氧化法處理 %。(2) 開發(fā)價格低廉性能優(yōu)越的催化劑。該法在處理高濃度AEO模擬廢水存在一個H2O2的最佳投量 ()，過多的H2O2投量會對AEO的降解有不利影響。光催化氧化法是用紫外光照射半導(dǎo)體催化劑，生成強氧化性的催化氧化法是對化學(xué)氧化法的改進(jìn)與強化，主要有均相氧化法，光催化氧化法和多相氧化法Fenton法屬均相氧化法，目前研究的熱點是將Fenton法與其他技術(shù)聯(lián)合使用，例如混凝一Fenton工藝，超聲—Fenton試劑聯(lián)合法。未來應(yīng)重點開發(fā)價廉的吸附材料，如對工業(yè)廢物再利用。用硼泥處理表面活性劑廢水，AEO的去除率達(dá)94%左右，硼泥再生后對AEO去除率仍可達(dá)94%。天然的粘土礦物類吸附劑貨源充足、價廉，應(yīng)用較多?；钚蕴吭诔叵聦EO廢水處理效果理效果較好。組合工藝有微電解一混凝沉淀法，混凝沉淀冰解酸化一接觸氧化法等。目前的研究集中在與其他技術(shù)的聯(lián)合使用和開發(fā)出針對陰離子表面活性劑的高效的混凝劑?，F(xiàn)已有將粉末活性炭吸附與微濾技術(shù)聯(lián)合，該技術(shù)可以提高AEO的去除率，緩解膜的堵塞。當(dāng)AEO的濃度大于其臨 界膠束濃度，此時AEO的分子量較大，則適用超濾技術(shù)。采用煤渣吸附—絮凝沉淀—泡沫分離技術(shù)的組合工藝處理AEO廢水去除率可達(dá)95%以上。工程實踐中常采用泡沫分離塔實現(xiàn)泡沫分離，并常與其他技術(shù)組成組合工藝。 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 泡沫分離方法泡沫分離方法是向AEO廢水中曝氣，從而產(chǎn)生大量的氣泡，使AEO吸附于氣泡表面并隨氣泡浮升至水面，除去形成的泡沫層，從而將A