【正文】 他條件下的得率，所以該最佳工藝條件成立。 ，加入40ml蒸餾水，在超聲波清洗機內設定超聲溫度為60℃，功率為300W，超聲40min。表 31 分析因素與水平水平因素A料液比B超聲時間/minC功率/WD超聲溫度/℃11:35202505521:40303006031:454035065根據表31進行正交試驗，得到結果如下 表32正交試驗直觀分析表序號A料液比B超聲時間/min C超聲功率/WD超聲溫度/℃得率/%11:35202505521:35303006031:35403506541:40203006551:40303505561:40402506071:45203506081:45302506591:454030055K1K2K3R表33方差分析表因素偏差平方和自由度F比F臨界值料液比2時間2功率2溫度2誤差8 根據表333中數據，極差R表明，超聲波法提取榛蘑多糖正交實驗中，各因素對多糖提取率影響程度大小為：料液比 提取時間 超聲功率 溫度。因此，為了更好地考察提取的最優(yōu)條件，綜合各個單因素，從而進一步設計正交試驗，各組試驗均按照常規(guī)試驗方法進行，通過測定各組試驗的多糖得率，經過直觀分析，最后得出最佳的提取水平組合。所以本試驗中，把超聲溫度控制在60℃較為適宜。說明過高的溫度不利于多糖的提取，在植物中多糖多與蛋白質結合為糖蛋白。 固定超聲波功率250W，提取時間30min，料液比1:40，改變溫度。因為強超聲波作用可能導致多糖糖苷鍵斷裂, 造成榛蘑多糖降解為單糖或小分子還原糖，使得率下降，所以提取功率不宜太高。 固定料液比1:40，溫度60℃，提取時間30min，改變超聲功率?？赡苁浅暡ǖ臋C械剪切作用會使一部分多糖降解，導致得率降低。 固定料液比1：40，溫度60℃，超聲功率為250W，改變超聲時間。料液比太大不利于對多糖的提取。固定超聲波功率250W，溫度60℃，超聲時間30min，改變料液比。；相同條件下， 再將濾渣洗入圓底燒瓶二次浸提， 浸提3次后，合并濾液并用旋轉蒸發(fā)器濃縮(原料重:濃縮液= 1:2) ，向濃縮液內加入Sevag試劑除蛋白，按照濾液體積的1/4量加入Sevag試劑(氯仿:丁醇= 4:1)，直到沒有乳白色變性蛋白質析出后，在 150r/min下振蕩20min，離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。3 結果與分析 將葡萄糖配制成不同濃度的溶液，采用苯酚硫酸法測定其在490nm處的吸光值，以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制曲線，得到圖31 圖31葡萄糖標準曲線實驗結果顯示，葡萄糖濃度在0μg/mL30μg/mL區(qū)間，呈線性關系，其相關系數為 。 根據超聲波—酶法最佳工藝條件中的酶解條件，只進行酶解，提取液不再用超聲波處理，進行抽濾、除蛋白、離心、醇沉等操作后，得到榛蘑多糖。，選用正交表L9(34)研究超聲波—酶法聯合提取榛蘑多糖的最佳條件[28]超聲波酶法聯合法提取榛蘑多糖正交因素水平表L9(34)水平因素A加酶率/%B時間/minC溫度/℃DpH1 2 3 —酶法聯合提取榛蘑多糖最佳工藝條件驗證試驗 ，根據正交試驗得出的最佳工藝條件進行酶解，再經超聲波處理后得到提取液，重復3次，得到最佳條件下的多糖得率。（4）pH對榛蘑多糖得率的影響 在50℃，%，酶解時間為90 min 的條件下，、 ，再經超聲處理進行多糖提取，計算得率。（2）酶解時間對榛蘑多糖得率的影響 %，溫度為50℃，pH ，分別酶解60、90、1150 min，再經超聲處理提取多糖，計算得率。[27]。與正交試驗中各條件下得到的得率比較，觀察該值是否最高。以上每個處理均重復3 次。（3）超聲波功率對榛蘑多糖提取率的影響 在料液比1:40，超聲溫度60℃，超聲30min的條件下，分別設定超聲波功率為200、250、300、350、400W，提取多糖，計算得率。分別對料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時間4個因素進行單因素試驗[26].（1）料液比對榛蘑多糖得率的影響 在超聲溫度60℃，超聲波功率250W，超聲30min的條件下，分別配制料液比為1:1:31:1:41:50，提取多糖，計算得率。 ，按一定料液比加入蒸餾水，置于超聲波清洗機中于一定溫度下作用一定時間，得到的提取液抽濾，向濾液內加入Sevag試劑除蛋白，在 150r/min下振蕩20min, 離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。同時, 可根據多糖得率公式計算出榛蘑多糖的得率： 多糖得率(%)=(50 V C f W2 /W3 W1 )100%式中: W1：稱取榛蘑粉的質量( g ) W2：由W1 提取的榛蘑多糖的質量( g ) W3：從W2 中稱取的用于分析測定的榛蘑多糖質量( g ) V：溶解W3 定容后的體積( L ) f ：多糖的校正系數, f= C：由回歸方程計算所得多糖的質量濃度( g/L )。加入25ml蒸餾水，在95℃下回流浸提5h，回流結束后收集濾液； 相同條件下，再將濾渣洗入圓底燒瓶二次浸提， 浸提3次后，合并濾液并用旋轉蒸發(fā)器濃縮（原料重：濃縮液=1:2） ，向濃縮液內加入Sevag試劑除蛋白，按照濾液體積的1/4量加入Sevag試劑（氯仿:丁醇=4:1），直到沒有乳白色變性蛋白質析出后，在150r/min下振蕩20min，4000r/min下離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。以吸光值A為縱坐標，以葡萄糖的質量濃度為橫坐標制作標準曲線。 葡萄糖標準曲線的繪制 采用苯酚—硫酸比色法測定多糖含量[24]。目前榛蘑多糖的提取多采用傳統(tǒng)水提法，提取率偏低，所以本實驗通過進行傳統(tǒng)水提法、超聲波法、酶法和超聲波—酶聯合提取法提取榛蘑多糖，從而得到最佳工藝條件，提高榛蘑多糖的提取率，為創(chuàng)建高效、經濟的多糖提取工藝提供參考，為今后榛蘑多糖精深產品加工提供一定的理論和技術支持。榛蘑肉質鮮美，營養(yǎng)價值豐富，富含蛋白質、多糖及多種維生素和礦物質，具有極高的食用價值。適用于所提取的多糖。萃取工藝成本低，綜合經濟效益顯著。超聲波可在常溫、常壓條件下萃取，且萃取時間短，萃取劑消耗量也較低，因此降低能耗。幾乎適合所有的植物性和動物性材料。由于超聲波產生的強烈的空化作用，大大增加了萃取劑與物料的接觸面積，使用超生比技術兩小時左右即可達到最佳提取率，大大縮短了萃取時間。無需高壓，對實驗儀器及玻璃器皿的要求較低，操作簡單易行。超聲波可在常溫條件下進行萃取，適合一些熱不穩(wěn)定的植物活性成分的萃取。是提取植物（中藥）中活性成分最常用的方法之一。超聲提取法的機理是分成熱機理、力學機制，超生汽蝕機理。廣泛應用于植物活性成分，如多糖提取[23]。廣泛應用于玫瑰精油、不飽和脂肪酸等植物中液態(tài)物質和芳香物質的提取。 超臨界流體萃取(SFE)是以某一介質(COH2O、N2)作為萃取劑，在其臨界溫度和臨界壓力之上的條件下，從液體或固體物料中萃取出待分離組分的一種提取分離技術。水提取多糖的多數是中性多糖［23］。此外，榛蘑多糖對癲癇、耳鳴、眩暈癥也有一定療效［22］。研究發(fā)現榛蘑多糖可以并通過抑制NO、INOS、COX－2和THP－1細胞中的活性因子的表達，而達到抗炎作用［21］。因此得出榛蘑多糖對于低能離子束誘變具有一定的防護作用［20］。(5)榛蘑多糖的抗突變作用 張穎等人在研究榛蘑多糖對低能離子束誘變作用的恢復效應時，發(fā)現從蜜環(huán)菌Am99－1菌株人工發(fā)酵菌體內分離出來的榛蘑多糖Aml，誘變源為低能N+離子束，受試動物為黑腹果蠅，并檢測Aml對離子束誘變果蠅的恢復功能。虞磊［18］等從自由基代謝的角度探討了蜜環(huán)菌菌索多糖的抗衰老機制，通過觀察D－半乳糖致衰小鼠模型的跳臺法和迷宮法學習記憶能力，測定衰老小鼠部分組織中的SOD、MDA、NO、GSH－Px，發(fā)現榛蘑菌索多糖可通過調節(jié)生物的機體免疫功能或者清除自由基來延緩機體組織衰老，觀察果蠅的壽命發(fā)現蜜環(huán)菌菌索多糖亦可顯著延長果蠅的平均壽命和提高果蠅的最長壽命。在研究蜜環(huán)菌誘導細胞間粘附因子ICAM－1的表達能力時，發(fā)現榛蘑多糖在誘導ICAM－1和THP－1細胞中的mRNA的表達存在劑量和時