【正文】 濾、除蛋白、離心、醇沉等操作后，得到榛蘑多糖。 綜上所述，超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖的最佳工藝條件為：料液比1:40，%，酶解溫度50℃，酶解時(shí)間90min，超聲功率300W，超聲時(shí)間40min，超聲溫度60℃。因此，為了更好地考察提取的最優(yōu)條件，綜合各個(gè)單因素，從而進(jìn)一步設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，各組試驗(yàn)均按照常規(guī)試驗(yàn)方法進(jìn)行，通過測定各組試驗(yàn)的提取率，經(jīng)過直觀分析，最后得出最佳的提取水平組合。 %，提取時(shí)間90min，酶解溫度50℃，改變pH。 %，提取時(shí)間90min，pH ，改變酶解溫度。由于纖維素酶價(jià)格較高， %左右，比較合適。 固定酶解溫度50℃，提取時(shí)間90min，pH ，改變加酶率。 ，加入40ml蒸餾水，在超聲波清洗機(jī)內(nèi)設(shè)定超聲溫度為60℃，功率為300W，超聲40min。因此，為了更好地考察提取的最優(yōu)條件，綜合各個(gè)單因素，從而進(jìn)一步設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，各組試驗(yàn)均按照常規(guī)試驗(yàn)方法進(jìn)行，通過測定各組試驗(yàn)的多糖得率，經(jīng)過直觀分析，最后得出最佳的提取水平組合。說明過高的溫度不利于多糖的提取，在植物中多糖多與蛋白質(zhì)結(jié)合為糖蛋白。因?yàn)閺?qiáng)超聲波作用可能導(dǎo)致多糖糖苷鍵斷裂, 造成榛蘑多糖降解為單糖或小分子還原糖，使得率下降，所以提取功率不宜太高?？赡苁浅暡ǖ臋C(jī)械剪切作用會使一部分多糖降解，導(dǎo)致得率降低。料液比太大不利于對多糖的提取。；相同條件下， 再將濾渣洗入圓底燒瓶二次浸提， 浸提3次后，合并濾液并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮(原料重:濃縮液= 1:2) ，向濃縮液內(nèi)加入Sevag試劑除蛋白，按照濾液體積的1/4量加入Sevag試劑(氯仿:丁醇= 4:1)，直到?jīng)]有乳白色變性蛋白質(zhì)析出后，在 150r/min下振蕩20min，離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。 根據(jù)超聲波—酶法最佳工藝條件中的酶解條件，只進(jìn)行酶解，提取液不再用超聲波處理，進(jìn)行抽濾、除蛋白、離心、醇沉等操作后，得到榛蘑多糖。（4）pH對榛蘑多糖得率的影響 在50℃，%，酶解時(shí)間為90 min 的條件下，、 ，再經(jīng)超聲處理進(jìn)行多糖提取，計(jì)算得率。[27]。以上每個(gè)處理均重復(fù)3 次。分別對料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)[26].（1）料液比對榛蘑多糖得率的影響 在超聲溫度60℃，超聲波功率250W，超聲30min的條件下，分別配制料液比為1:1:31:1:41:50，提取多糖，計(jì)算得率。同時(shí), 可根據(jù)多糖得率公式計(jì)算出榛蘑多糖的得率： 多糖得率(%)=(50 V C f W2 /W3 W1 )100%式中: W1：稱取榛蘑粉的質(zhì)量( g ) W2：由W1 提取的榛蘑多糖的質(zhì)量( g ) W3：從W2 中稱取的用于分析測定的榛蘑多糖質(zhì)量( g ) V：溶解W3 定容后的體積( L ) f ：多糖的校正系數(shù), f= C：由回歸方程計(jì)算所得多糖的質(zhì)量濃度( g/L )。以吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以葡萄糖的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。目前榛蘑多糖的提取多采用傳統(tǒng)水提法，提取率偏低，所以本實(shí)驗(yàn)通過進(jìn)行傳統(tǒng)水提法、超聲波法、酶法和超聲波—酶聯(lián)合提取法提取榛蘑多糖，從而得到最佳工藝條件，提高榛蘑多糖的提取率，為創(chuàng)建高效、經(jīng)濟(jì)的多糖提取工藝提供參考，為今后榛蘑多糖精深產(chǎn)品加工提供一定的理論和技術(shù)支持。適用于所提取的多糖。超聲波可在常溫、常壓條件下萃取，且萃取時(shí)間短，萃取劑消耗量也較低，因此降低能耗。由于超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈的空化作用，大大增加了萃取劑與物料的接觸面積，使用超生比技術(shù)兩小時(shí)左右即可達(dá)到最佳提取率，大大縮短了萃取時(shí)間。超聲波可在常溫條件下進(jìn)行萃取，適合一些熱不穩(wěn)定的植物活性成分的萃取。超聲提取法的機(jī)理是分成熱機(jī)理、力學(xué)機(jī)制，超生汽蝕機(jī)理。廣泛應(yīng)用于玫瑰精油、不飽和脂肪酸等植物中液態(tài)物質(zhì)和芳香物質(zhì)的提取。水提取多糖的多數(shù)是中性多糖［23］。研究發(fā)現(xiàn)榛蘑多糖可以并通過抑制NO、INOS、COX－2和THP－1細(xì)胞中的活性因子的表達(dá)，而達(dá)到抗炎作用［21］。(5)榛蘑多糖的抗突變作用 張穎等人在研究榛蘑多糖對低能離子束誘變作用的恢復(fù)效應(yīng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)從蜜環(huán)菌Am99－1菌株人工發(fā)酵菌體內(nèi)分離出來的榛蘑多糖Aml，誘變源為低能N+離子束，受試動(dòng)物為黑腹果蠅，并檢測Aml對離子束誘變果蠅的恢復(fù)功能。在研究蜜環(huán)菌誘導(dǎo)細(xì)胞間粘附因子ICAM－1的表達(dá)能力時(shí)，發(fā)現(xiàn)榛蘑多糖在誘導(dǎo)ICAM－1和THP－1細(xì)胞中的mRNA的表達(dá)存在劑量和時(shí)間依賴關(guān)系，在人體單核細(xì)胞中，榛蘑多糖誘導(dǎo)ICAM－1 的表達(dá)是通過ROS/JNK信號通路去激活轉(zhuǎn)錄因子NF－KB、AP－SP－1和STAT－1的［16］。而榛蘑多糖可在較短時(shí)間內(nèi)大量獲得，多糖含量高，便于對榛蘑多糖關(guān)于血糖影響的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在一定濃度范圍內(nèi)AMP－l對AXN損傷的INS－l細(xì)胞分泌胰島素和C肽均具有一定的促進(jìn)作用，效果明顯。(3)榛蘑多糖的降糖作用 研究發(fā)現(xiàn)榛蘑多糖(AMP－1) 能使正常小鼠的糖耐量增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組相比，榛蘑多糖可使細(xì)胞間隙增大，懸浮細(xì)胞增多，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。、肝癌細(xì)胞SMMC－7721的形態(tài)學(xué)變化。AMP能增強(qiáng)機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能，可作為免疫增強(qiáng)劑。王惠國等[8]研究表明，給小鼠腹腔注射AMP具有增加小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)脾臟T 淋巴細(xì)胞的增殖能力，提高小鼠血清溶血素水平的作用。 利用榛蘑與天麻的共生關(guān)系，還可用榛蘑培育藥材──天麻，從而提高天麻的產(chǎn)量[5]。 榛蘑中富含大量多糖，除多糖外，榛蘑中蛋白質(zhì)含量達(dá)44%，含有18種氨基酸及鉀、鈣、鎂、鐵、鋅等礦物質(zhì)元素，維生素BB2和維生素C含量也較高[3]。一般生長在淺山區(qū)的榛柴崗上，所以得名“榛蘑”。 polysaccharides。 結(jié)果如下：%；%；超聲波法提取榛蘑多糖的最佳工藝條件為料液比1:40，超聲時(shí)間40min，超聲功率300W，超聲溫度60℃，%；超聲波—酶法聯(lián)合提取的最佳工藝條件為料液比1:40，%，酶解溫度50℃，酶解時(shí)間90min，超聲功率300W，超聲時(shí)間40min，超聲溫度60℃，%。分別對加酶率、酶解時(shí)間、酶解溫度、pH為因素，進(jìn)行單因素試驗(yàn)。（4）采用超聲波法，提取榛蘑多糖。榛蘑還有著重要的藥用價(jià)值，其多糖成分是一種能夠控制細(xì)胞的分裂分化和調(diào)節(jié)細(xì)胞生長衰老的活性多糖，具有抗氧化、抗輻射、促進(jìn)造血、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力等藥理作用。榛蘑肉質(zhì)鮮美，而且富含蛋白質(zhì)、多糖及多種維生素和礦物質(zhì)，營養(yǎng)豐富，具有極高的食用價(jià)值。（3）采用傳統(tǒng)水提法，原料經(jīng)浸提、過濾、濃縮、醇沉、抽濾等操作后，測定吸光值，計(jì)算多糖得率。（5）采用超聲波酶聯(lián)合提取法，在提取液中加入纖維素酶，經(jīng)酶解后，在超聲波法最佳工藝條件下超聲處理，提取多糖?！? 文獻(xiàn)查閱，方案設(shè)計(jì)—— 準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器，購買試驗(yàn)材料—— 繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線—— 傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖—— 超聲波法提取榛蘑多糖條件優(yōu)化—— 超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖條件優(yōu)化—— 酶法提取榛蘑多糖—— 數(shù)據(jù)處理并撰寫、修改論文—— 準(zhǔn)備答辯其中： 參考文獻(xiàn)篇數(shù)： 25篇以上（其中，外文文獻(xiàn)3篇以上） 論 文 字 數(shù)： 專業(yè)負(fù)責(zé)人意見簽名：年 月 日超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑粗多糖工藝優(yōu)化摘 要 本試驗(yàn)以榛蘑為原料，研究其多糖的提取工藝，通過傳統(tǒng)水提法、超聲波法、酶法、超聲波—酶聯(lián)合提取法四種方法對榛蘑多糖進(jìn)行提取，根據(jù)單因素和正交試驗(yàn)的結(jié)果，得到最佳的提取工藝條件。The extraction percent of soluble polysaccharides from Arimillaria mellea with enzyme method is %. According to validation experiment, pared with traditional methods, ultrasonic wave bined with enzyme method produced higher extraction percent of soluble polysaccharides(the times of the traditional water bath extraction, times of the ultrasonic wave method extraction, times of the enzyme method extraction ,respectively). Key words：Armillaria mellea。extraction technology.目 錄摘要Abstract1 緒論 1 1 1 1 1 2 3 3 4 4 4 4 5 52 材料和方法 6 試驗(yàn)器材 6 試驗(yàn)儀器 6 試驗(yàn)材料 6 試驗(yàn)方法 7 7 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 7 7 7—酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖 8 93 結(jié)果與分析 1