【正文】 0 10 10 11 11 13 14 14 14 16 17 18 184 結(jié)論 19參考文獻(xiàn)致謝超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝研究1 緒論 榛蘑為真菌植物門真菌蜜環(huán)菌的子實(shí)體。在人們追求健康飲食的今天，榛蘑由于其肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)豐富及出色的藥用功能，受到越來越多人的歡迎[2]。經(jīng)常食用可加強(qiáng)肌體免疫力，益智開心，延年輕身等作用，還可以防止皮膚干燥，預(yù)防某些心腦血管疾病和呼吸道及消化道疾病[4]。Li YP[7]等在使用昆明純種小鼠研究榛蘑多糖時(shí)發(fā)現(xiàn)，榛蘑多糖對環(huán)磷酰胺引起的小鼠骨髓細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。另有報(bào)道AMP能在體外顯著增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的作用[11]，并可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO且呈現(xiàn)一定的濃度相關(guān)性，在高濃度時(shí)，對巨噬細(xì)胞分泌IL－1有一定的促進(jìn)分泌作用。實(shí)驗(yàn)中，將肝癌細(xì)胞SMMC－ 7721進(jìn)行體外培養(yǎng)，研究AMP的抗腫瘤作用。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法分析其對凋亡相關(guān)蛋白bcl－2表達(dá)的影響。榛蘑多糖的抗腫瘤作用不僅在體外實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證，也體現(xiàn)在化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)紅外光譜檢測，榛蘑多糖具有β－型糖苷鍵，這種構(gòu)效關(guān)系的多糖具有抗腫瘤的藥理活性，并且在對移植S180小鼠進(jìn)行在體抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，也證實(shí)其抗腫瘤的作用。操玉平等［13］通過培養(yǎng)大鼠胰島素瘤細(xì)胞(INS－1) ，并以四氧嘧啶(AXN) 損傷細(xì)胞，培養(yǎng)液中加入不同濃度的AMP－1，檢測其對INS－l細(xì)胞葡萄糖刺激的胰島素和C 肽分泌量的影響，并檢測細(xì)胞存活率。AMP對血糖的作用機(jī)制尚不明確。榛蘑多糖作為蜜環(huán)菌的主要成分之一亦被發(fā)現(xiàn)有此項(xiàng)作用，在研究培養(yǎng)藥用型真菌蜜環(huán)菌抗氧化作用活性時(shí)，發(fā)現(xiàn)蜜環(huán)菌勻漿提取物榛蘑多糖具有強(qiáng)大的清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化作用［15］。丁誠實(shí)［19］等通過觀察榛蘑殼聚糖對D－半乳糖致衰老小鼠的影響和對果蠅壽命的影響，測定受試小鼠血清中的SOD活性、MDA的含量以及分析小鼠記憶學(xué)習(xí)行為等可以得出榛蘑殼聚糖有顯著抗衰老作用。(6)其他作用 榛蘑多糖具有鎮(zhèn)靜作用，能明顯減少小鼠自發(fā)活動(dòng)，并能使環(huán)己烯巴比妥鈉或戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時(shí)間顯著延長。 水作為溶劑提取多糖是最常使用的一種方法，可以用熱水提取，也可以用冷水浸泡。其特點(diǎn)是產(chǎn)物純度高，質(zhì)量好，特別適用于熱敏性原料，但提取率較溶劑萃取法低[23]。 超聲波是指頻率為15KHz～60MHz之間的一種高頻彈性機(jī)械波，通常需要介質(zhì)如空氣、水等進(jìn)行傳播。：（1）常溫萃取。（3）萃取效率高。（5）節(jié)能環(huán)保。 植物細(xì)胞壁是由纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、果膠、物質(zhì)構(gòu)成，通常提取劑添加適量的纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和分解的細(xì)胞壁,半纖維素、果膠、破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu),加速細(xì)胞的有效成分溶出率，提高提取效率，縮短提取時(shí)間[23]。榛蘑還有著重要的藥用價(jià)值，其多糖成分具有抗氧化、抗衰老、抗輻射、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、降血糖等藥理作用，在食品行業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用前景，所以榛蘑多糖引起了許多人的關(guān)注，不少科研工作者開始研究榛蘑多糖的提取純化及各種理化性質(zhì)。 g，加水定容至100mL，得到質(zhì)量濃度為500 μg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，、 mL，分別置于10 mL容量瓶中，補(bǔ)加蒸餾水至2 mL，加入5%苯酚1 mL，混合均勻后快速加入98%濃硫酸7 mL，搖勻后室溫放置30 min，在波長490nm下測定吸光值A(chǔ)。 ，定容至100 mL 后準(zhǔn)確吸取200 μL 于10 mL 容量瓶中，補(bǔ)加蒸餾水至2 mL，加入5%苯酚1 mL，混合均勻后快速加入98%濃硫酸7 mL，搖勻后室溫放置30 min，以不含樣品的溶液作為空白，于490 nm測定吸光度，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程可計(jì)算出相應(yīng)的多糖質(zhì)量濃度。每個(gè)處理重復(fù)3 次。（4）超聲溫度對榛蘑多糖提取率的影響 在超聲波功率250W，料液比1:40，超聲30min的條件下，分別設(shè)超聲溫度為50、60、70、80℃，提取多糖，計(jì)算得率。 超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖 ，按超聲波法提取榛蘑多糖正交試驗(yàn)得到的最佳料液比加入一定量的水，再向溶液中加入一定量的纖維素酶，調(diào)節(jié)溶液的pH為某一固定的值，并在一定溫度下水浴一定時(shí)間后，進(jìn)行超聲處理，其中超聲的功率、時(shí)間、溫度參照超聲波法提取榛蘑多糖得到的最佳工藝條件，對得到的提取液抽濾，向?yàn)V液內(nèi)加入Sevag試劑除蛋白，在150r/min下振蕩20min, 離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。（3）酶解溫度對榛蘑多糖得率的影響 ，%，酶解時(shí)間為90 min 條件下，分別設(shè)酶解溫度為450、560℃，再經(jīng)超聲處理提取多糖，計(jì)算得率。與正交試驗(yàn)中各條件下得到的得率比較，觀察該值是否最高?；貧w方程為：y = ，R2= x為葡萄糖質(zhì)量濃度，μg/mL y為吸光值 傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖，加入25mL蒸餾水， 在95℃下回流浸提5h，回流結(jié)束后收集濾液。圖32不同料液比下的榛蘑多糖得率 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖32所示：隨著料液比的增大，多糖得率先大幅增加，料液比為1:40時(shí)多糖得率達(dá)到最大，之后多糖得率緩慢下降，添加溶劑的量過多時(shí)，超聲波被溶劑吸收較多，作用于料液的相對減少，從而影響榛蘑多糖的析出。圖33不同提取時(shí)間下榛蘑多糖得率 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖33所示：隨著超聲時(shí)間的增加，多糖得率不斷升高，在時(shí)間達(dá)到30min時(shí)，得率達(dá)到最大，之后略有下降趨勢。圖34不同超聲功率下榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖34所示：隨著超聲波功率的不斷提高，多糖得率不斷升高，在功率達(dá)到300W時(shí)，得率達(dá)到最大，之后隨著功率的提高得率呈下降趨勢。圖35不同溫度下榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖33所示：隨著溫度的升高，多糖得率緩慢提高，在60℃時(shí)，得率達(dá)到最大，之后略微下降。根據(jù)單因素的試驗(yàn)結(jié)果，得出對多糖得率影響突出的相關(guān)因素，主要影響因素為料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時(shí)間。根據(jù)K值分析可得，最佳工藝條件為A2B3C2D2 ，即料液比為1:40，超聲時(shí)間為40min，超聲功率為300W，超聲溫度為60℃。 在超聲波處理之前先進(jìn)行酶解，其中超聲波條件為時(shí)間40min，料液比1:40，超聲波的固定功率為300 W，超聲溫度60℃。所以開始時(shí)加入纖維素酶，多糖得率有顯著的提高，%后，可能由于纖維素酶過量，底物已被酶解完全，所以得率不再迅速升高，而是趨于一個(gè)穩(wěn)定的值。考慮到節(jié)約能源，所以本試驗(yàn)酶解90min左右比較合適。因此本試驗(yàn)選取酶解溫度為50℃，比較合適。根據(jù)單因素的試驗(yàn)結(jié)果，得出對提取率影響突出的相關(guān)因素，主要影響因素為加酶率、解時(shí)間、酶解溫度、pH。根據(jù)K值分析可得，最佳工藝條件為A3B2C2D2 ，%，酶解時(shí)間90min，酶解溫度50℃。%，高于其他條件下的得率，所以該最佳工藝條件成立。(2)超聲波法提取榛蘑多糖試驗(yàn)中，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)的結(jié)果，各因素對多糖得率影響程度大小為：料液比 提取時(shí)間 超聲功率 溫度。(4)酶法提取榛蘑多糖實(shí)驗(yàn)中，%，酶解溫度50℃，酶解時(shí)間90min，條件下，%。趙曉丹老師在論文的題目選擇、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)進(jìn)展、論文撰寫的過程中對我耐心的指導(dǎo)，傾注了大量的心血。東北林業(yè)大學(xué)畢業(yè)論文評審意見表畢業(yè)論文題目超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑粗多糖工藝優(yōu)化學(xué)生姓名冷帥辰專業(yè)班級08食品科學(xué)與工程1班指導(dǎo)教師評語:建議成績：指導(dǎo)教師（簽字）： 年 月 日東北林業(yè)大學(xué)畢業(yè)論文評審意見表畢業(yè)論文題目超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑粗多糖工藝優(yōu)化學(xué)生姓名冷帥辰專業(yè)班級08食品科學(xué)與工程1班評閱人評語:建議成績：評閱人（姓名、職稱）: 年 月 日東北林業(yè)大學(xué)畢業(yè)論文評審意見表畢業(yè)論文題目超聲波—酶法聯(lián)合提取榛蘑粗多糖工藝優(yōu)化學(xué)生姓名冷帥辰專業(yè)班級08食品科學(xué)與工程1班評閱人評語:建議成績：評閱人（姓名、職稱）:年 月 日答辯委員會(huì)意見: 答辯委員會(huì)(教師姓名、職稱)：畢業(yè)論文成