【正文】 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；（9）HZQF160全溫振蕩培養(yǎng)箱，太倉(cāng)市華美生化儀器廠。本實(shí)驗(yàn)為以后進(jìn)一步研究蛹蟲草子實(shí)體天然色素的結(jié)構(gòu)奠定基礎(chǔ)，也進(jìn)一步為開發(fā)蛹蟲草子實(shí)體天然色素產(chǎn)品提供了理論依據(jù)以及廣闊的市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)前景，其實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)方法也為其他領(lǐng)域的研究提供了平臺(tái)和參考。為了研究出有利于人們身體健康的、經(jīng)濟(jì)效益高的蛹蟲草子實(shí)體中天然色素的深加工產(chǎn)品，就需要我們廣大的食品科學(xué)家、生物學(xué)家和醫(yī)學(xué)家們的共同努力，從而帶動(dòng)整個(gè)研究的快速發(fā)展。蛹蟲草天然色素作為蛹蟲草子實(shí)體中的生理活性物質(zhì)之一，也是研究的重點(diǎn)。 研究?jī)?nèi)容及研究意義 蛹蟲草作為我國(guó)名貴且傳統(tǒng)的強(qiáng)壯滋補(bǔ)品，在歷史上很早就引起了重視和應(yīng)用。 薄層層析有許多優(yōu)點(diǎn)[46]：它保持了操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易等特點(diǎn)，同時(shí)展開速率快，一般僅需15～20分鐘；混合物易分離，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。 薄層色譜法 薄層色譜，或稱薄層層析(thin—layer chromatography），是以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)[45]。HPLC技術(shù)在天然色素成分分析中的應(yīng)用研究主要有玉米黃素、β玉米黃素、葉黃素、番茄紅素、α，β 胡蘿卜素的分析。對(duì)于熱不穩(wěn)定性或極性大的天然色素來(lái)說(shuō)，HPLC 是一種有效的分離分析方法。 高效液相色譜法（HPLC） 高效液相色譜法是一種以液體為流動(dòng)相的現(xiàn)代柱色譜分離分析技術(shù)[43]。波長(zhǎng)長(zhǎng)（頻率小）的光線能量小，波長(zhǎng)短（頻率大）的光線能量大。 特點(diǎn) 條件溫和、有效成分理化性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn) 適用范圍紅花黃色素 蛹蟲草子實(shí)體天然色素的測(cè)定方法 紫外可見(jiàn)光吸收光譜法紫外可見(jiàn)分光光度法是根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)波長(zhǎng)為200760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來(lái)的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法[42]。將蝦殼用鹽酸浸泡24h 后過(guò)濾，濾渣用95%乙醇浸泡,提取液經(jīng)蒸餾后得到濃縮的粗制蝦青素提取物。 適用范圍 水溶性、醇溶性的花色苷類、黃酮類、脂溶性色素 據(jù)姚成立[41]等的研究報(bào)告提出：%的鹽酸水溶液浸泡2h，除去雜質(zhì)和雜色后，再用7%的乙醇水溶液在40℃下浸提，然后過(guò)濾、濃縮、干燥而得。 超臨界CO2萃取技術(shù)萃取紫草色素含雜質(zhì)少，色價(jià)高，產(chǎn)品色質(zhì)好，避免了有機(jī)溶劑萃取的溶劑殘留問(wèn)題； . 8% 的最大提取率； 所得玉米黃色素的性能指標(biāo)優(yōu)于傳統(tǒng)方法，萃取率高且不含殘留溶劑，產(chǎn)品指標(biāo)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)等。 適用范圍 番茄紅素、β胡蘿卜素、紫草色素、玉米黃色素 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[40]，超臨界CO2萃取技術(shù)在天然色素萃取中的應(yīng)用研究主要有番茄紅素、β胡蘿卜素、紫草色素、玉米黃色素等的提取。 特點(diǎn) 無(wú)化學(xué)溶劑消耗和殘留、無(wú)污染, 避免了色素在高溫下的熱裂化，保護(hù)了色素的天然活性，保持了天然色素的色澤、香氣純正。 特點(diǎn) 超聲波法在提取過(guò)程產(chǎn)生強(qiáng)烈的振動(dòng)、空化、攪拌，與傳統(tǒng)提取方法相比具有生產(chǎn)周期短、無(wú)需加熱、產(chǎn)率高、條件溫和有效成分不被破壞等優(yōu)點(diǎn) 參照姬小明[38]的方法，稱取一定量樣品，以丙酮為提取劑，在料液比為1∶20g/mL的情況下, 避光條件下用超聲波提取1h，超聲后在室溫下振蕩30min，最后經(jīng)離心后，取上清液得天然色素的浸提液。最后經(jīng)紫外可見(jiàn)光吸收光譜法測(cè)得天然色素的產(chǎn)量為696μg/g。在微波功率為140W的提取條件下，提取3min。例如在用水做溶劑時(shí)，在微波場(chǎng)下，水分子高速轉(zhuǎn)動(dòng)成為激發(fā)態(tài)，而當(dāng)水分子本身釋放能量回到激態(tài)時(shí)，它所釋放能量傳遞給其它物質(zhì)分子，加速其熱運(yùn)動(dòng)，縮短被萃取分子由物料內(nèi)部擴(kuò)散到萃取溶劑界面的時(shí)間，從而使萃取速率提高數(shù)倍，同時(shí)還降低了萃取溫度，最大限度的保證了萃取質(zhì)量。最后經(jīng)紫外可見(jiàn)光吸收光譜法測(cè)得天然色素的產(chǎn)量為2736μg/g。 適用范圍：溶于丙酮的色素 酸熱提取法 原理　　主要是由于酸熱法使用了對(duì)細(xì)胞壁中原來(lái)結(jié)構(gòu)緊密的某些成分(多糖和蛋白質(zhì)等)具有強(qiáng)力疏松作用的鹽酸，并配合沸水處理及速冷處理，使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)得以破壞，胞內(nèi)物質(zhì)溶出。稍后再室溫下振蕩30min，之后經(jīng)過(guò)4000r/min的離心機(jī)離心10min，最后取得蛹蟲草子實(shí)體中的天然色素提取液。由于不同研究者用的提取方法不同，所以蛹蟲草子實(shí)體中天然色素的得率也不同。 天然色素提取方法蛹蟲草子實(shí)體天然色素的提取一般是采用研磨的方法[32]。徐清海[31]《天然色素的提取及其生理功能》中提到：從我國(guó)食藥兩用的紫蘇中提取的紫蘇色素，有解毒、散寒、行氣和胃的功效。黃酮類色素還可以保護(hù)血管，調(diào)節(jié)血管的擴(kuò)張，防止動(dòng)脈硬化和栓塞。例如：β胡蘿卜素食維生素A的前體，可提高機(jī)體的免疫功能，可防治中風(fēng)、心血管疾病的作用[30]；番茄紅素可以清除自由基，并能有效預(yù)防前列腺癌的發(fā)生，還可以激活免疫細(xì)胞，防止心腦血管疾病的發(fā)生；玉米黃色素是單線態(tài)氧，可防止脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的鏈?zhǔn)絺鬟f，從而可以清除膜內(nèi)的自由基，維持生物膜的完整性；梔子黃色素具有抗氧化能力和解熱、消炎、利膽的功效。四吡咯環(huán)共軛結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，這類色素的性能主要由共體系結(jié)合的金屬離子和衍生的外圍結(jié)構(gòu)決定。 四吡咯類色素 目前應(yīng)用于食品著色的四吡咯類色素主要有葉綠素、血紅素、膽紅素和藍(lán)藻素[28]。植物色素在植物體中含量較少，分離純化較為困難[27]，其中有的共存物存在時(shí)還可能產(chǎn)生異味，因此生產(chǎn)成本較合成色素高。天然植物色素大多為花青素類、類胡蘿卜素等，因此天然色素不但是無(wú)毒無(wú)害的物質(zhì)，而且還含有很多人體必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和微生物物質(zhì)，例如番茄紅色素，β胡蘿卜素等。 天然色素的性質(zhì) 副作用小，安全性高 絕大多數(shù)天然色素來(lái)自動(dòng)物、植物組織。 酮類色素 酮類色素主要包括：姜黃色素、姜黃油樹脂、姜黃、姜黃素、郁金色素、郁金香紅色素等。不溶于水，溶于脂肪和脂肪溶劑，亦稱脂色素。 類胡蘿卜素類 類胡蘿卜素是一類重要的天然色素的總稱，屬于化合物。天然植物色素可根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，形態(tài)來(lái)源和溶解性進(jìn)行分類，最常用的方法是按照化學(xué)結(jié)構(gòu)來(lái)分類。 天然色素的種類天然色素按來(lái)源和性質(zhì)，可分為植物、動(dòng)物、微生物和礦物色素。而來(lái)源于天然植物的根、莖、葉、花、果實(shí)和動(dòng)物、微生物等的色素，稱為天然色素。 其他作用 除以上功效外，蛹蟲草子實(shí)體還有其他功能，例如：抗病毒、抗菌、明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)、干擾人體RNA 及DNA合成，預(yù)防治療腦血栓、腦溢血、腎功能衰竭，利尿，同時(shí)還有抑制血小板積聚防止血栓形成，消除面斑，抗衰防皺的功效。張桂英等也做了這方面的實(shí)驗(yàn)，結(jié)論是柞蠶蛹蟲草具有提高老齡大鼠超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）活性和明顯降低LPO含量的作用。人之所以會(huì)衰老，老化跡象一點(diǎn)一滴出觀，如色素沉淀、體力衰退、是因?yàn)轶w內(nèi)產(chǎn)生氧化作用，所謂“氧化作用”就類似于生銹，抗氧化劑的補(bǔ)充有助于降低氧化的速度，減慢衰老的腳步。 抗衰老作用 年齡的增長(zhǎng)和某些體外因素會(huì)造成機(jī)體和皮膚組織自由基產(chǎn)生超過(guò)機(jī)體正常清除自由基的的能力，從而使皮膚組織造成傷害，導(dǎo)致衰老。 鎮(zhèn)靜、抗驚厥作用 陳桂寶[23]等研究表明，蛹蟲草有明顯的鎮(zhèn)靜、耐缺氧、抗炎等作用，對(duì)異丙腎上腺素誘發(fā)小鼠心肌耗氧量增加也有明顯的保護(hù)作用。蛹蟲草煎劑對(duì)須瘡癬菌、絮狀表皮癬菌、石膏樣小芽孢癬菌、羊毛狀小芽孢癬菌等真菌及鳥結(jié)核桿菌、枯草桿菌、鼻疽桿菌等結(jié)核桿菌也均有抑制作用。湯新強(qiáng)[21]等將人工蛹蟲草胞外多糖與治療劑量的卡鉑合用，可增強(qiáng)卡鉑的抗腫瘤作用。孫科峰[20]等實(shí)驗(yàn)表明：蛹蟲草子實(shí)體可明顯延長(zhǎng)S180 腹水型小鼠的生存率,對(duì)S180 實(shí)體瘤小鼠的腫塊生長(zhǎng)有一定的抑制作用。 抗癌作用 蛹蟲草有良好的抗癌作用，而發(fā)揮最大功效的就是蛹蟲草子實(shí)體中的蟲草素。戴瑛[18]等實(shí)驗(yàn)得出：蛹蟲草提取物可調(diào)節(jié)小鼠機(jī)體組織的免疫功能，可以緩解由于內(nèi)毒素或類似物質(zhì)造成的肺部炎癥，具有一定的肺保護(hù)作用。%為不飽和脂肪酸，此外，尚含有維生素B1麥角脂醇、六碳糖醇、多種生物堿等，具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能，提高細(xì)胞能量、抗疲勞的功效。此外，蛹蟲草子實(shí)體中含有的氨基酸、維生素對(duì)蛹蟲草的功效開發(fā)也有一定作用。腺苷是用于合成三磷酸腺苷（ATP）、腺嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的重要中間體。腺苷是一種遍布人體細(xì)胞的內(nèi)源性核苷，可直接進(jìn)入心肌經(jīng)磷酸化生成腺苷酸，參與心肌能量代謝，同時(shí)還參與擴(kuò)張冠脈血管，增加血流量。%、%%，說(shuō)明麥角甾醇有較強(qiáng)的抑瘤活性。d、50mg/kg鄧玉清[15]等人在《微生物麥角甾醇的研究進(jìn)展》中印證了：角固醇是微生物細(xì)胞膜的重要組成部份，對(duì)確保細(xì)胞膜的完整性，膜結(jié)合酶的活性，膜的流動(dòng)性，細(xì)胞活力以及細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔?。超氧化物歧化酶還可以被應(yīng)用在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)和化妝品等領(lǐng)域[14]。SOD是氧自由基的自然天敵，是機(jī)體內(nèi)氧自由基的頭號(hào)殺手，是生命健康之本。對(duì)人體不斷地補(bǔ)充SOD具有抗衰老的特殊效果。 超氧化物歧化酶（SOD）超氧化物歧化酶Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，別名肝蛋白、奧谷蛋白，簡(jiǎn)稱SOD。多糖作為藥物始于1943年，并廣泛作為廣譜免疫抑制劑。 大量研究表明，蟲草多糖有著多種生物活性功能，被醫(yī)學(xué)界和藥物學(xué)界認(rèn)為是當(dāng)前世界上非常好的免疫促進(jìn)劑之一[9]，具有廣泛的藥理作用：可活化巨噬細(xì)胞刺激抗體產(chǎn)生，提高人體免疫能力，改善呼吸系統(tǒng)，可使腎上腺重量、血漿皮質(zhì)醇、醛固酮及腎上腺內(nèi)膽固醇含量增加，有促進(jìn)腎上腺的作用，抑制腫瘤生長(zhǎng)，并具有抗腫瘤[10]、抗輻射、降血糖和脂蛋白、止咳、化痰、潤(rùn)肺和延緩衰老等藥理作用，此外,蟲草多糖還能抗心律失常，抗心肌缺血，擴(kuò)張外周血管，降壓，降血脂，抑制血小板聚集。它的抗癌活性和免疫活性已引起人們的極大興趣。黎穎[8]在《甘露醇的性質(zhì)、生產(chǎn)與發(fā)展建議》中提到：甘露醇（蟲草酸）由于能部分吸收、并發(fā)生代謝，是一種較強(qiáng)的自由基清除劑，以及其滲透性脫水和利尿的作用。 蟲草酸