生物免疫分析技術ppt課件-文庫吧資料
2025-05-18 12:35本頁面
【正文】 抗原與固相抗體競爭結合的結果而異。 步驟： A 將已知抗體吸附于固相載體表面，溫育后清洗； B 將可能含抗原的待檢溶液和酶標記的已知抗原溶液以適當比例混合，加入已包被的載體孔中，溫育后清洗； C 加入酶作用的底物，產生顯色反應。 （二）間接法 步驟： A 將已知可溶性抗原吸附于載體（聚苯乙烯板或聚乙苯乙烯小珠），經溫育后清洗； B 加入待檢稀釋血清，若血清中有相應特異性抗體存在則與吸附的抗原結合，溫育后清洗； C 加入酶標記的抗球蛋白抗體，此時酶標記抗抗體與吸附的抗原抗體復合物結合，溫育后清洗； D 加入酶作用底物（或稱基質），酶分解底物并顯色，用光電比色計測定底物顯色深淺，即可推知抗體量。 酶 底 物 顯色反應 測定波長 辣根過氧化物酶 鄰苯二胺 四甲替聯苯胺 氨基水楊酸 鄰聯苯甲胺 2,2‘連胺基 2(3乙基 并噻唑啉磺酸 6)銨鹽 橘紅色 黃色 棕色 蘭色 藍綠色 492 460 449 425 642 堿性磷酸酯酶 4硝基酚磷酸鹽 (PNP) 萘酚 ASMx磷酸鹽 +重氮鹽 黃色 紅色 400 500 葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖 +甲硫酚嗪 +噻唑蘭 黃色 深藍色 405 420 β Ｄ 半乳糖苷酶 甲基傘酮基半乳糖苷 (4MuG) 硝基酚半乳糖苷 (ONPG) 熒光 黃色 360,450 420 ELISA的種類和變化 （一）雙抗體夾心法 （二）間接法 （三）競爭法 （四）雙位點一步法 （五）捕獲法測 IgM抗體 （六）應用親和素和生物素的 ELISA （一）雙抗體夾心法 此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原 步驟： A 將已知抗體吸附于載體上，溫育后清洗； B 加入待檢標本溶液，使溶液中的抗原與吸附的抗體結合，溫育后清洗； C 加入酶標記特異性抗體，溫育后清洗； D 加入酶作用底物，產生顯色反應，顏色的改變與所
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