酶免疫技術(shù)ppt課件(2)-文庫吧資料
2025-01-11 20:12本頁面
【正文】 E E 底物 雙抗體夾心法檢測抗原 ? 適用于檢測含有至少兩個抗原決定簇的多價抗原 （ 1）將已知抗體包被于固相反應(yīng)板上，洗滌。 Ag+ AbE AgAbE+ AbE （以標記 Ab檢測 Ag為例） 第三節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ ELISA） 一、基本原理 底物顯色 定性或定量的分析 包被 將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面 反應(yīng) 加入待測抗體或 抗原和酶標抗原 或抗體 洗滌 使結(jié)合在固相上 的抗原抗體復(fù)合物 與未結(jié)合的分離 1 2 3 4 二、方法類型及反應(yīng)原理 （一）檢測抗原的方法 將 己知抗體 包被固相載體，待檢標本中的相應(yīng) 抗原 與固相表面的抗體結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分。依據(jù)測定方法又可分為 液相 和 固相酶免疫測定 。 因此，不需對反應(yīng)液中 結(jié)合和游離 的酶標記物進行分離， 直接測定 反應(yīng)系統(tǒng)中 總酶活性的變化 即可推算出被測樣品中抗原的含量。 與抗原（抗體）結(jié)合的標記抗體（抗原），稱為 結(jié)合 標記物。 24 第二節(jié) 酶免疫技術(shù)的分類 克隆酶供體免疫測定 酶免疫分析技術(shù) 酶免疫組織化學(xué)技術(shù) 酶免疫測定技術(shù) 均相酶免疫測定 異相酶免疫測定 酶放大免疫測定技術(shù) 液相酶免疫測定 固相酶免疫測定： 酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) 組織切片或其它標本中抗原的定位分析 液體標本中抗原或 抗體的定性和定量 一、均相酶免疫測定法 酶蛋白與抗原或抗體結(jié)合形成 酶標記物 。 以聚笨乙烯固相載體（如制 ELISA板） 為例說明免疫吸附的過程： 抗原（抗體） → 用 液稀釋 → 4186。 是一種多孔薄膜過濾材料，包括硝酸纖維素膜（ NC）、尼龍膜和玻璃纖維素膜等。主要有微量反應(yīng)板、小試管和小珠三種。 三、固相載體 ?固相抗體或抗原是非均相酶免技術(shù)中將游離和結(jié)合的酶標記物迅速分離的最常用方法 ?固相抗體或抗原 :就是把抗體或抗原結(jié)合到固相載體的表面 （一）固相載體的要求 ?結(jié)合抗體或抗原的容量大 ?抗體或抗原牢固地固定在其表面 ?不影響免疫反應(yīng)性 ?利于反應(yīng)充分進行 ?固相方法簡便易行，快速經(jīng)濟 （二）固相載體的種類 1．塑料制品 由聚苯乙烯、聚氯乙烯制成。 （ 1） 免疫活性鑒定： 常用免疫電泳或雙向免疫擴散法，出現(xiàn)沉淀線表示結(jié)合物中的抗體 (抗原 )具有免疫活性。 （二）酶標記物的純化與鑒定 1．酶標記物的純化 標記完成后應(yīng)除去反應(yīng)溶液中的游離酶、游離抗體 (抗原 )、酶聚合物及抗體 (抗原 )聚合物，避免 游離酶增加非特異顯色以及游離抗體 (抗原 )的競爭作用。 βGal 的底物 4甲基傘酮基 βD半乳糖苷（ 4MUG ） 酶作用后，生成高強度熒光物 ，用熒光計測量。 HRP常用底物 （二）堿性磷酸酶 （ alkaline phosphatase， AP) 是一種磷酸酯水解酶，從大腸桿菌提取 AP的 底物 對 硝基苯磷酸酯（ pNPP ） 經(jīng) AP作用后的產(chǎn)物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405 nm。不穩(wěn)定，有致癌性。第八章 酶免疫技術(shù)
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