電泳技術(shù)方王楷ppt課件-文庫吧資料
2025-05-07 18:13本頁面
【正文】 定溶液的 pH條件下可解離成帶正電荷或負(fù)電荷的基團(tuán)。 清 蛋白 泳 動 最 塊 ， 其 余 依次 α α β 、 γ 球 蛋白 。 5 、 計算 總 吸 光 度 光 密度 總和 T ＝ A ＋ α 1 ＋ α 2 ＋ β ＋ γ 各 部分 蛋白 質(zhì) 的 百分?jǐn)?shù) ： 蛋白質(zhì) ％ ＝ A / T 100 ％ + 白蛋白 (A) α1 α2 β γ 血清蛋白的 pI 大多在 7 . 5 以下，在 p H8 . 6 的巴比妥緩沖液中以負(fù)離子形式存在，并且蛋白質(zhì)的分子量、立體構(gòu)象、等電點及形狀也有差異，在電場中遷移速度不同，可以在醋酸纖維薄膜上分離成 A 、 α 1 、 α 2 、 β 、 γ 五條區(qū)帶。 2 ） 剪 下 各 條 蛋白 帶 和 在 膜 空白 部位 剪 一條 帶 （ 空白 帶 的 寬 度 以 最 窄 的 條帶 為 準(zhǔn) ， why ？ ） ， 將 各 條 帶 浸 入 試管 ， 不時 搖動 ， 洗 脫 藍(lán)色 。用濾紙吸干薄膜。通電，電壓 100V, 時間 1 h 。 2 ） 用點樣器蘸血清少許（ 不能看見有液滴形成 ），按在 點樣處（點樣要與膜邊緣垂直，且大小均勻）。 實驗操作步驟及注意點 1 、 準(zhǔn)備與點樣 1 ） 將已充分浸透的醋酸纖維膜取出，用濾紙吸去多余的 緩沖液。使蛋白固定并染色，再脫色（洗去多余染料）。 A、 α α β 、 γ 五條區(qū)帶。 影響因素： 1 、聚丙烯酰胺凝膠孔徑的大小 2 、緩沖系統(tǒng) 3 、離子強(qiáng)度 血 清 蛋 白 醋 酸 纖 維 薄 膜 電 泳 目的： 原 理： 血清蛋白在 ，分子大小、形狀各有差異。 具有如下優(yōu)點： 1 、 一定濃度下，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好 2 、 化學(xué) 性能 穩(wěn)定 ， 與 被 分離 物 不起 化學(xué) 反應(yīng) 3 、 對 pH 和 溫度 變化 較 穩(wěn)定 4 、 幾乎 無 電滲 作用 ， 樣品 分離 重復(fù) 性 較好 5 、 樣品 不易 擴(kuò)散 ，
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