【正文】 產(chǎn)氣。二、生理生化試驗　　微生物生化反應(yīng)是指用化學反應(yīng)來測定微生物的代謝產(chǎn)物，生化反應(yīng)常用來鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物。霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲都常帶有不同顏色，因而菌落邊緣和中心，正面和背面顏色常常不同，如青霉菌：孢子青綠色，氣生菌絲無色，基內(nèi)菌絲褐色。液體培養(yǎng)也和細菌相似，有均勻生長、沉淀或在液面形成菌膜。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運動、擴散情況?！　。保┘毦呐囵B(yǎng)特征包括以下內(nèi)容：在固體培養(yǎng)基上，觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。２、細菌細胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細胞群體叫菌落（colony）?！　∫后w培養(yǎng)：在實驗中，通過液體培養(yǎng)可以使微生物迅速繁殖，獲得大量的培養(yǎng)物，在一定條件下，還是微生物選擇增菌的有效方法。２）根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)，可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩大類?！　。荷顚右后w培養(yǎng)；用石蠟油封存；半固體穿刺培養(yǎng)。有的將一些動物的死的或活的組織如牛心、羊腦加入到培養(yǎng)基中，也可適合厭氧菌的生長。在厭氧微生物的培養(yǎng)過程中，最重要的一點就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣。　　厭氧培養(yǎng)：也稱“厭氣培養(yǎng)”。在實驗室中，斜面培養(yǎng)是通過棉花塞從外界獲得無菌的空氣?！　『醚跖囵B(yǎng)：也稱“好氣培養(yǎng)”。分子氧存在對它們生長產(chǎn)生毒害，不是被抑制，就是被殺死。　　　　這類微生物在生長過程中，不需要氧氣，但也不怕氧氣存在，不會被氧氣所殺死。　　　　這類菌是需要氧氣的?！　　　∵@類微生物在有氧氣存在或無氧氣存在情況下，都能生長，只不過所進行的代謝途徑不同罷了。很多需氧微生物不能在氧氣濃度大于大氣中氧氣濃度的條件下生長?！　　　∵@類微生物需要氧氣供呼吸之用。各種微生物在不能生長發(fā)育的水分活性范圍內(nèi)，均具有狹小的適當?shù)乃只钚詤^(qū)域。微生物是不能脫離水而生存的。３）水分　　水分是微生物進行生長的必要條件。但也常受其它環(huán)境條件的影響而發(fā)生變化。也會死亡。超過最低生長溫度，微生物不會生長，溫度太低，甚至會死亡。在生長溫度三基點內(nèi)，微生物都能生長，但生長速率不一樣。另一方面，隨著營養(yǎng)物濃度的增加，生長率愈接近最大值。這是因為除了生長需要能量以外，細菌還需要能量來維持它的生存。它的數(shù)值很小，表明細菌所需要的營養(yǎng)濃度非常之低，所以在自然界中，它們到處生長。1) 營養(yǎng)物濃度 細菌的生長率與營養(yǎng)物的濃度有關(guān):μ=μmax*C/(K+C) 　　營養(yǎng)物濃度與生長率的關(guān)系曲線是典型的雙曲線。１、影響微生物生長的因素　　微生物的生長，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到外界許多因素的影響。三、培養(yǎng)　　微生物的生長，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、ＰＨ等。另一種方法是，在接種后，利用N2或CO2取代培養(yǎng)基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。然后快速冷卻，并進行接種。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。在相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，經(jīng)過多次重復(fù)移種，最后富集的菌株很容易在固體培養(yǎng)基上長出單菌落。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。（圖３－６）當接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，最后在所劃的線上分散著單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個細胞長成一個菌落。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進行劃線。（圖３－５，a）圖３－５　傾注平板法（a）涂布平板法（b）圖解 ２、涂布平板法　　首先把微生物懸液通過適當?shù)南♂專∫欢康南♂屢悍旁跓o菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落。左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化，方法有許多種。如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)（Pure culture）。在向培養(yǎng)皿內(nèi)倒培養(yǎng)基或接種時，試管口或瓶壁外面不要接觸底皿邊，試管或瓶口應(yīng)傾斜一下在火焰上通過。不要直接燒環(huán)，以免殘留在接種環(huán)上的菌體爆濺而污染空間。接種環(huán)的火焰滅菌方法：通常接種環(huán)在火焰上充分燒紅（接種柄，一邊轉(zhuǎn)動一邊慢慢地來回通過火焰三次），冷卻，先接觸一下培養(yǎng)基，待接種環(huán)冷卻到室溫后，方可用它來挑取含菌材料或菌體，迅速地接種到新的培養(yǎng)基上?！　】諝庵械碾s菌在氣流小的情況下，隨著灰塵落下，所以接種時，打開培養(yǎng)皿的時間應(yīng)盡量短。在實驗臺上方，空氣流動應(yīng)緩慢，雜菌應(yīng)盡量減少，其周圍雜菌也應(yīng)越少越好?！　嶒炁_面不論是什么材料，一律要求光滑、水平。２、無菌操作　　培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。所用的活體可以是整個動物；也可以是某個離體活組織，例如猴腎等；也可以是發(fā)育的雞胚。　?。罚┳⑸浣臃N 該法是用注射的方法將待接的微生物轉(zhuǎn)接至活的生物體內(nèi)，如人或其它動物中，常見的疫苗預(yù)防接種，就是用注射接種，接入人體，來預(yù)防某些疾病?！　。担┩坎冀臃N 與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落。C左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達到稀釋的目的。它的做法是：用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠生長。做穿刺接種時，用的接種工具是接種針。除三點外，也有一點或多點進行接種的?！　。玻┤c接種 在研究霉菌形態(tài)時常用此法。常用的接種工具有接種環(huán)，接種針等。（圖３－３）　圖３－３　接種和分離工具1．接種針 　　　　　常用的接種方法有以下幾種：　?。保﹦澗€接種 這是最常用的接種方法。有時滴管、吸管也可作為接種工具進行液體接種。１、接種工具和方法　　在實驗室或工廠實踐中，用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標簽。培養(yǎng)基的保存　　培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱內(nèi)?！　∮糜嘘P(guān)的標準菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時，如無菌生長或生長不好。1176。并測定其最終pH?！　…傊泵媾囵B(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃60℃時，擺置成適當斜面，待其自然凝固。血液、體液和抗生素等則應(yīng)以無菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50176?！　∧承┪窡岢煞?，如糖類，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時滅菌，以為測定該批培養(yǎng)基最終pH之用。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）。７、培養(yǎng)基的分裝　　培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當容器內(nèi)。C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi)，裝入量不得超過燒瓶容量的1/2，每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個雞蛋的蛋白，強力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121176。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。PH調(diào)整后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。例如，而腸浸液pH卻會有顯著的升高。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補足。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。最好使用不銹鋼萵加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。４、培養(yǎng)基各成份的混合和溶化　　培養(yǎng)基所用化學藥品均應(yīng)是化學純的?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。２、培養(yǎng)基的制備記錄　　每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，最終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。三、培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項 １、培養(yǎng)基配方的選定　　同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。根據(jù)培養(yǎng)基用于生產(chǎn)的目的來區(qū)分，可以分為種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基。膽鹽具有抑制腸道菌以外的細菌的作用（選擇性），乳糖和中性紅（指示劑）能幫助區(qū)別乳糖發(fā)酵腸道菌（如大腸桿菌）和不能發(fā)酵乳糖的腸道致病菌（如沙門氏菌和志賀氏菌）。例如食品檢驗中常用的麥康凱培養(yǎng)基是一例。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍培養(yǎng)基就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基?！　。常╄b別培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學藥品，使難以區(qū)分的微生物經(jīng)培養(yǎng)后呈現(xiàn)出明顯差別，因而有助開快速鑒別某種微生物?！　。玻┰鲋撑囵B(yǎng)基 在自然界中，不同種的微生物常生活在一起，為了分離我們所需要的微生物，在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質(zhì)，以增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘汰其它微生物，這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基常用于菌種篩選和選擇增菌中。　?。保┻x擇培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)以殺死或抑制不需要的菌種生長的培養(yǎng)基，稱之為選擇培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基有時可用來觀察微生物的動力，有時用來保藏菌種?！　。常┌牍腆w培養(yǎng)基 如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中，就制成了半固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基在實際中用得十分廣泛?！　。玻┕腆w培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。２、根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來區(qū)分，可以分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。例如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等。這類培養(yǎng)基化學成分精確、重復(fù)性強，但價格昂貴，而微生物又生長緩慢，所以它只適用于做一些科學研究，例如營養(yǎng)、代謝的研究。這種培養(yǎng)基的穩(wěn)定性常受生產(chǎn)廠或批號等因素的影響。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有：牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血清等。根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學成分是否完全了解來區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。洗液有很強的腐蝕作用，使用時應(yīng)特別小心，避免濺到衣服、身體和其他物品上。若用皂液未能洗凈的器皿，可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。用過的玻璃器皿　　凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用后可隨時沖洗，吸取過化學試劑的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。新購的玻璃器皿　　除去包裝沾染的污垢后，先用熱肥皂水刷洗，流水沖凈，再浸泡于１～２％的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時，使游離的堿性物質(zhì)除去，再以流水沖凈。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況，經(jīng)過一定的處理，洗刷干凈。常用的化學消毒劑有：石碳酸、來蘇水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。消毒劑在低濃度時也能殺菌（如1：1000硫柳汞）。能抑制或阻止微生物生長繁殖的藥物，稱為防腐劑。二、化學方法　　一般化學藥劑無法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑。它的最大優(yōu)點是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學成分。通過過濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達到除菌的目的。經(jīng)輻射后的食品，因大量微生物被殺滅，再用冷凍保藏，可使保存期延長。２、輻射　　利用輻射進行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學藥劑消毒的缺點，所以應(yīng)用越來越廣，目前主要應(yīng)用在以下幾個方面：　?。保┙臃N室、手術(shù)室、食品、藥物包裝室常應(yīng)用紫外線殺菌?！　　＠鏑a+2與PO43化合，就會產(chǎn)生磷酸鈣沉淀。４）滅菌對培養(yǎng)基成分的影響　　?！　　νN微生物來講，幼齡菌比老齡菌對熱更敏感。C，10分鐘就會被殺死；但各種孢子、特別是芽孢最能抗熱，其中抗熱性最強的是嗜熱脂肪芽孢桿菌，要在121176。３）影響滅菌的因素　　。如滅菌的對象是砂土、石蠟油等面積大、含菌多、傳熱差的物品，則應(yīng)適當延長滅菌時間。C。由于蒸汽壓的上升，水的沸點也隨之提高。它適用于各種耐熱、體積大的培養(yǎng)基的滅菌，也適用于玻璃器皿、工作服等物品的滅菌。此法不需加壓滅菌鍋，適于推廣，但操作麻煩，所需時間長。C恒溫箱中過夜，讓殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體。C，15~30分鐘，殺死其中的營養(yǎng)體。若采用間歇滅菌的方法，就能殺滅物品中所有的微生物。此法適用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒?！　。褐苯訉⒁镜奈锲贩湃肭逅校蠓?5分鐘，即可殺死細菌的全部營養(yǎng)和部分芽孢。C，30分鐘既可達到消毒目的?！　。河行┦澄飼蚋邷仄茐臓I養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營養(yǎng)和風味，又進行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。２）濕熱滅菌法:　　在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因為一方面細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含水量高，容易變性。C，恒溫1小時即可。此法徹底可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、環(huán)、試管口及不能用的污染物品或?qū)嶒瀯游锏氖w等的滅菌。高溫可使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和酶類發(fā)生變性而失活，從而起滅菌作用，低溫通常起抑菌作用。消毒是指應(yīng)用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營養(yǎng)體的方法，而滅菌是指用物理和化學方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，使之呈無菌狀態(tài)?！　∪旧慕Y(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負反應(yīng)菌體都呈紅色?！　。罚┺t梁色液（?。┤?0秒鐘后，自來水沖洗?！　。担┧?，用吸水紙吸去水分?！　。常┳詠硭疀_洗。　　革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，具體操作方法是：　　１）涂片固定。此外，兩類菌的細胞壁等對結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的通透性也不一致