【正文】 00的稀釋液，換用1支1ml滅菌吸管，按上述操作依次作10倍遞增稀釋液(3)根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗(yàn)樣品污染情況估計(jì)，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。溫箱、水浴鍋、天平、顯微鏡、均質(zhì)器或乳缽、溫度計(jì)、平皿、試管、發(fā)酵管、吸管、載玻片、接種針乳糖—膽鹽發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、麥康凱、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）、遠(yuǎn)騰氏瓊脂、革蘭氏染色液(1)以無菌操作將檢樣25g（或25ml）放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字。 ②稀釋度的選擇 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。2）h取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目乘以倍數(shù)，即得1g（1mL）樣品所含菌落總數(shù)。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置（36177。(5)稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基[可放置在（46177。(3)另取1ml的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。：電熱恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、恒溫水浴鍋、托盤天平、電爐、吸管、廣口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、試管、試管架、酒精燈、均質(zhì)器或乳缽、滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子、75％酒精棉球、玻璃蠟筆、登記?。?5％乙醇、生理鹽水、15％氫氧化鈉溶液、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、檢驗(yàn)方法菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序：檢樣→做成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液→選擇2～3個適宜稀釋度各以1ml之量分別入滅菌平皿內(nèi)→每皿內(nèi)加入46℃適量營養(yǎng)瓊脂→菌落數(shù)→報(bào)告(1)以無菌操作，將檢樣25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)先置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。 (3)計(jì)算公式①16格25格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式： 酵母細(xì)胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)/100400104稀釋倍數(shù)②25格x16格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式： 酵母細(xì)胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)/80400104稀釋倍數(shù)(4)血球計(jì)數(shù)板的清潔 血球汁數(shù)板使用后，用自來水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95％的乙醇、無水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥。 ⑥當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計(jì)數(shù)大方格的上方和右方線上的酵母細(xì)胞(或只計(jì)數(shù)下方和左方線上的酵母細(xì)胞)。⑤計(jì)數(shù)時，如果使用16格25格規(guī)格的計(jì)數(shù)室，要按對角線位，取左上、右上、左下、右下4個中格（即100個小格）的酵母菌數(shù)。 ③將血球計(jì)數(shù)板用擦鏡紙擦凈，在中央的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的厚玻片。(2)血球計(jì)數(shù)板的使用①用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個數(shù)。 計(jì)數(shù)室通常有兩種規(guī)格。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面?zhèn)€刻有一個方格網(wǎng)。 (1)血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造 血球計(jì)數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。②測量菌體的長度和寬度各占目鏡測微尺幾格，然后換算出菌體的實(shí)際長度。若更換物鏡、目鏡的放大倍數(shù)時，必須再進(jìn)行校正標(biāo)定。 (3)計(jì)算方式①目鏡測微尺每格長度=兩個重疊刻度間物鏡測微尺格數(shù)10/兩個重疊刻度間目鏡測微尺格數(shù)②以同樣方法，分別在不同倍率的物鏡下測定測微尺上每格的實(shí)際長度。③先用低倍鏡觀察，對準(zhǔn)焦距，待看清物鏡測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺的刻度與物鏡測微尺的刻度相平行，并使兩尺的左邊第一條線相重合，再向右尋找兩尺的另外一條重合線。(2)目鏡測微尺的標(biāo)定①取下接目鏡，旋下目鏡上的目透鏡，將目鏡測微尺放人接目鏡的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透鏡，并裝入鏡筒內(nèi)。②物鏡測微尺的構(gòu)造 物鏡測微尺為一塊特制的載玻片，其中央有一小圓圈。后者是在乎板上長成菌落后再計(jì)數(shù)，反應(yīng)較真實(shí)，但費(fèi)時太長。 微生物常用的計(jì)數(shù)方法有兩種，即直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。：麥芽汁培養(yǎng)基、酵母菌。 酵母菌大小的測定和細(xì)胞計(jì)數(shù)學(xué)會測微尺和血球計(jì)數(shù)板的使用方法，建立對微生物大小的概念。簡單染色 ：金黃色葡萄球菌和枯草桿菌染成紅色。(7)鏡檢 。(5)用蕃紅染液復(fù)染1min，水洗。(3)加碘液媒染1min后水洗。 涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脫色→水洗→復(fù)染→水洗→干燥→觀察(1)取大腸桿菌和枯草桿菌分別做涂片、干燥、固定，方法均與簡單染色的相同。用吸水紙時切勿將菌體擦掉。(5)水洗 斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。 (3)固定 固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標(biāo)本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過2～3次，共約2～3s，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜,放置待冷后，進(jìn)行染色。：石炭酸復(fù)紅染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、碘液、95％乙醇、蕃紅染液：金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢(1)涂片 在載玻片的中央滴一滴無菌蒸餾水，將接種環(huán)在火焰上燒紅，待冷卻后從斜面挑取少量菌種與玻片上的水滴混勻后，在載玻片上涂布成一均勻的薄層。主要的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法。 簡單染色法又叫普通染色法，只用一種染料使細(xì)菌染上顏色，如果僅為了在顯微鏡下看清細(xì)菌的形態(tài)，用簡單染色即可。微生物染色 學(xué)習(xí)微生物的染色原理、染色的基本操作技術(shù)，從而掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。先用滅菌刀削去部分表面封蠟，用點(diǎn)燃的酒精棉球消毒表面，然后用滅菌刀切開奶酪，以無菌操作切取表層和深層檢樣各少許，置于滅菌乳缽內(nèi)切碎，加入少量生理鹽水研成糊狀。以無菌操作打開包裝，取適量檢樣置于滅菌三角燒瓶內(nèi)，在45℃水浴或溫箱中加溫，溶解后立即將燒瓶取出，用滅菌吸管吸取25mL奶油放入另一含225mL滅菌生理鹽水或滅菌奶油稀釋液的燒瓶內(nèi)（瓶裝稀釋液應(yīng)預(yù)置于45℃水浴中保溫，作10倍遞增稀釋時所用的稀釋液亦同），振搖均勻，從檢樣融化到接種完畢的時間不應(yīng)超過30min。、酸奶以無菌操作去掉瓶口的紙罩紙蓋，瓶口經(jīng)火焰消毒后以無菌操作吸取25mL檢樣，放入裝有225mL滅菌生理鹽水的三角燒瓶內(nèi)，振搖均勻（酸乳如有水分析出于表層，應(yīng)先去除）。各種小型包裝和乳與乳制品，每件樣品量為：生奶1瓶或1包；消毒奶1瓶或1包；奶粉1瓶或1包（大包裝者200g）；奶油1塊（113g）；酸奶1瓶或1罐；煉乳1瓶或1罐；奶酪（干酪）1個。鮮乳一般不應(yīng)超過3h，在氣溫較高或路途較遠(yuǎn)的情況下應(yīng)進(jìn)行冷藏，不得使用任何防腐劑。采樣時應(yīng)注意部位等代表性。見菌落總數(shù)、大腸菌群測定及各有關(guān)致病菌和霉菌的檢驗(yàn)。檢驗(yàn)時先充分振搖吸取瓶、管中的液體，作為原液，再按要求作10倍遞增稀釋。檢驗(yàn)肉禽及其制品受污染的程度，一般可用板孔5cm2的金屬制規(guī)板，壓在受檢物上，將無菌棉拭稍沾濕，在板孔5cm2的范圍內(nèi)揩抹多次，然后將板孔規(guī)板移壓另一點(diǎn)，用另一棉拭揩抹，如此共移壓揩抹10次，總面積50cm2，共用10只棉拭。注：以上樣品的采集和送檢及檢樣的處理均以檢驗(yàn)肉禽及其制品內(nèi)的細(xì)菌含量從而判斷其質(zhì)量鮮度為目的。(3)各類熟肉制品檢樣的處理直接切取或稱取25g，以下處理同生肉。(2)鮮、凍家禽檢樣的處理先將檢樣進(jìn)行表面消毒，用滅菌剪子或刀去皮后，剪取肌肉25g（一般可從胸部或腿部剪?。韵绿幚硗?。(4)臘腸、香肚等生灌腸采取整根、整只，小型的可采數(shù)根、數(shù)只，其總量不少于250g。(2)禽類（包括家禽和野禽）鮮、凍家禽采取整只，放無菌容器內(nèi)；帶毛野禽可放清潔容器內(nèi)，立即送檢，以下處理要求同上述生肉。送檢時應(yīng)注意冷藏，不得加入任何防腐劑。五、食品微生物學(xué)一般檢驗(yàn)技術(shù)各類食品微生物檢樣樣品的采集與制備實(shí)例(1)生肉及臟器檢樣如是屠宰場后的畜肉，可于開腔后，用無菌刀采取兩腿內(nèi)側(cè)肌肉各50g（或劈半后采取兩側(cè)背最長肌肉各50g）；如是冷藏或銷售的生肉，可用無菌刀取腿肉或其他部位