細(xì)胞生物學(xué)實驗匯總-文庫吧資料
2025-03-29 12:04本頁面
【正文】 or固定劑 15min ↓ 70%酒精復(fù)水 5min 30%酒精復(fù)水 5min ↓ H20 ↙ ↘實驗組 對照組 → 5%三氯乙酸(TCA) ∣ 90℃保溫，15min ∣ ↙↓ H2o 5min ↙ 1mol/L Hcl 室溫 15min ↓ H2O漂洗 ↓ Schiff 試劑 4060min ↓ 亞硫酸水溶液沖洗三次（每次5分鐘） ↓ 自來水 ∣ 將染色后的根尖或表皮漂洗干凈。2）亞硫酸水（洗滌劑）：用200ml 普通自來水（不要用蒸餾水, 以免引起誤差）、10ml 10%的偏重亞硫酸鈉水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者在使用前混合，現(xiàn)用現(xiàn)配?！緦嶒炗闷贰?．試劑 1）schiff 氏試劑 堿性品紅置入三角燒瓶內(nèi)沸騰的蒸餾水中，時時搖動玻璃瓶，煮沸5min 使之充分溶解，冷卻至50℃時過濾，加入10ml 1mol/L HCl，冷至25℃時， 偏重亞硫酸鈉（Na2S2O3）無水亞硫酸鈉（NaHSO3），在室溫冷暗處至少放置24h（有時需2~3 天），使其顏色退至淡黃色，密封瓶口，藏于暗處，最好保存于4℃冰箱中（可保存數(shù)月或更長時間）。DNA經(jīng)溫稀酸水解，其上的嘌呤堿和脫氧核酸之間的鍵打開，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑中的無色品紅反應(yīng)，形成紫紅色的化合物， 因此Feulgen反應(yīng)中，顯示紫紅色的細(xì)胞部位，即標(biāo)志有DNA的存在。其反應(yīng)機(jī)制如下圖所示。Schiff 試劑中的無色品紅可與醛基反應(yīng)，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基為發(fā)色團(tuán)，故可呈現(xiàn)出紫紅色。因?qū)NA 的顯示反應(yīng)具有高度專一性，故常被用來顯示細(xì)胞內(nèi)DNA的分布情況。自來水沖洗，晾干后鏡檢。取出，用吸管吸取34根根尖置于載玻片上，吸干水后搗碎，滴Carnoy液3滴涂開，酒精燈烤干。固定：取出根尖，投入Carnoy液固定半小時，冰箱中保存?zhèn)溆?。實驗步驟：將小麥種子培養(yǎng)在培養(yǎng)在培養(yǎng)皿中，室溫下發(fā)芽，待胚根長達(dá)12厘米時。（2）秋水仙素處理，能使大量細(xì)胞分裂停留在中期，有助于觀察染色體。4．戊二醛作用：良好的固定劑，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)保持它原有狀態(tài)；5．考馬斯亮蘭作用：非專一性結(jié)合蛋白質(zhì)，使蛋白著色（藍(lán)色）。2．M－緩沖液和磷酸緩沖液作用：維持細(xì)胞的滲透壓?！緦嶒炗闷贰?．材料：新鮮洋蔥鱗莖2．試劑 1） M 緩沖液（pH ）各成分終濃度為：50mmol/L 咪唑(MW:)； 50mmol/L KCl(MW:)； 它們對細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長、運(yùn)動、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔谩Ｓ捎诩?xì)胞經(jīng)TritonX100 抽提后剩下的主要是細(xì)胞骨架成分，使得顯現(xiàn)更清晰。目前研究細(xì)胞骨架的主要方法是應(yīng)用高壓電鏡或免疫熒光顯微鏡技術(shù)。當(dāng)用適當(dāng)濃度的TritonX100 處理細(xì)胞時，能溶解質(zhì)膜結(jié)構(gòu)中及細(xì)胞內(nèi)許多蛋白質(zhì)，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻不被破壞顯得更清晰，M緩沖液洗滌細(xì)胞，可以提高細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性，戊二醛固定能較好地保存細(xì)胞骨架成分，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)R250 染色后，可使細(xì)胞骨架蛋白著色，而胞質(zhì)背景著色弱，有利細(xì)胞骨架纖維顯示。2．小麥（或綠豆）幼根根尖液泡系的中性紅染色觀察小麥（或綠豆）幼苗根尖（12cm）縱切面切片，1/3000 中性紅溶液1 滴染色510min，載玻片于37℃恒溫水浴，蓋上蓋玻片壓扁根尖，顯微鏡下觀察。【方法步驟】1．線粒體的超活染色與觀察1）口腔上皮細(xì)胞線粒體的超活染色：1/5000 詹納斯綠B12 滴，口腔上皮細(xì)胞（牙簽刮?。d玻片于37℃恒溫染色1015min，顯微鏡下觀察。細(xì)胞中的線粒體呈藍(lán)綠色的顆粒。詹納斯綠 B（Janus green B）是線垃體的專一性活細(xì)胞染色劑，毒性很小，屬于堿性染料，解離后帶正電，由電性吸引堆積在線粒體膜上。實驗四：線粒體和液泡系的超活染色與觀察【基本原理】線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，細(xì)胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?！緦嶒灲Y(jié)果】在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個同核體細(xì)胞。【結(jié)果觀察】在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個同核體細(xì)胞。5．（每4 人）取懸液1mL 到1 個試管中， mL 預(yù)熱的50％PEG 混勻，置于30℃水浴中溫浴3－5min；取未融合和融合的血細(xì)胞懸液各1 滴分別滴于載玻片上的兩側(cè)，蓋上蓋玻片。3．棄上清液(用吸管吸去)，％生理 鹽水5mL，用指彈法（或吸管輕吹）將細(xì)胞團(tuán)塊彈散，混勻后1000r／min
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