細(xì)胞生物學(xué)教程-文庫(kù)吧資料
2025-04-10 23:49本頁(yè)面
【正文】 內(nèi)取出所需的組織(或器官)，經(jīng)消化，分散為單個(gè)游離的細(xì)胞，在人工培養(yǎng)下，使其不斷的地生長(zhǎng)及繁殖。初步掌握無(wú)菌操作方法。I．原代細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庠?xì)胞培養(yǎng)的基本方法及操作過(guò)程。為此有必要使學(xué)生在細(xì)胞培養(yǎng)方面得到一些初步的感性知識(shí)，了解動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本操作過(guò)程，觀察體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特征，對(duì)原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞有一個(gè)基本概念。 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)目前已廣泛地被應(yīng)用于生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。 細(xì)胞培養(yǎng)的突出優(yōu)點(diǎn)，一是便于研究各種物理、化學(xué)等外界因素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和分化等的影響；二是細(xì)胞培養(yǎng)便于人們對(duì)細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)(如細(xì)胞骨架等)、細(xì)胞生長(zhǎng)及發(fā)育等過(guò)程的觀察。細(xì)胞培養(yǎng)是用無(wú)菌操作的方法將動(dòng)物體內(nèi)的組織(或器官)取出，模擬動(dòng)物體內(nèi)的生理?xiàng)l件，在體外進(jìn)行培養(yǎng)．使其不斷地生長(zhǎng)、繁殖，人們借以觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)、繁殖、細(xì)胞分化以及細(xì)胞衰老等過(guò)程的生命現(xiàn)象。 實(shí)驗(yàn)七四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果核分析驗(yàn)交壓片標(biāo)本1—2張，要求細(xì)胞分散均勻，形態(tài)完整，中期分裂相中染色體數(shù)目齊全，互不重疊，能夠進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)和照相。封好的片于可放培養(yǎng)皿內(nèi)濕濾紙上的火柴棒支架上，蓋上培養(yǎng)皿，可放冰箱內(nèi)保存2—3天。11．封存：壓好的片子如果來(lái)不及觀察或照相，必須進(jìn)行暫時(shí)封存。10．鏡檢：把壓好的片子放顯微鏡下，先觀察細(xì)胞分散狀況和中期分裂相的多少，再檢查分裂中期細(xì)胞中的染色體是否完全散開(kāi)。左手指壓住吸水紙的左邊，右手指從吸水紙的左端向右方輕輕抹去。8．洗滌：吸去酶液，加蒸餾水，用吸管換洗幾次，除去殘留酶液后加入45％醋酸。6漂洗：吸去卡寶品紅，用漂洗液換洗2—3次，每次1—2min。；把根尖投入預(yù)熱的58—60℃ lm01／L熱Hcl中，恒溫條件下水解14一15min。也可把根尖浸入小燒杯內(nèi)的自來(lái)水中，杯內(nèi)加冰兩小塊，在0一4℃冰箱內(nèi)低溫處理24h左右。三、實(shí)驗(yàn)方法：切取o．5cm長(zhǎng)的洋蔥根尖部分。染色液: 55ml原液B加6m1冰醋酸和6ml 37％甲醛(此液適用于植物原生質(zhì)體培養(yǎng)中細(xì)胞核和核分裂的染色)。 植物染色體標(biāo)本的制備與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)植物染色體標(biāo)本的制各技術(shù)，字握染色體的計(jì)數(shù)了解染色體的生物學(xué)意義二、實(shí)驗(yàn)用品材料洋蔥根尖試劑1．Carnoy固定液2．％秋水仙素溶液卡寶品紅染液配方I原液A：稱取3g堿性品紅，溶于l00ml 70％酒精中(此液可無(wú)限期保存)。2 簡(jiǎn)圖表示Feulgen反應(yīng)的染色結(jié)果。 (515min)↓蒸餾水↓%固綠酒精溶液 (各5min)↓流水沖洗 (6090min)↓亞硫酸水(I II III) ↓1mol/L Hcl←蒸餾水(過(guò)一下) ↓∣驗(yàn) (23min)↓ ↓83%酒精 (23min)(23min)↓純酒精I(xiàn)I (35min)↓純酒精I(xiàn)③Schiff試劑: 先將200ml蒸餾水煮沸,由火上取下,加入堿性品紅1g,℃時(shí),冷至25℃時(shí)加入1g偏亞硫酸鈉充分振蕩后蓋緊瓶塞,呈淡黃色或近于無(wú)色,加中性活性炭一匙, g,劇烈振蕩1min,.④亞硫酸鈉水溶液(漂白液)10%偏重亞硫酸鈉水溶液5ml,蒸餾水100,5,搖勻,防止因SO2的逸出而失效.⑤%固綠酒精溶液(95%酒精溶解)⑥5%三氯醋酸、四 實(shí)驗(yàn)方法石蠟切片↓溶蠟二甲苯I實(shí)驗(yàn)五 石蠟切片法一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)石蠟切片法,觀察染色結(jié)果,了解其反應(yīng)原理.二 實(shí)驗(yàn)原理DNA經(jīng)弱酸(1mol/LHcl)水解,其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵打開(kāi),使脫氧核糖的一端形成游離的醛基,這些醛基在原位與Schiff試劑(無(wú)色品紅亞硫酸鈉溶液)反應(yīng),形成紫紅色的化合物,是由于反應(yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)含有醌基,醌基是發(fā)色團(tuán),抽提去細(xì)胞中的DNA而得到陰性反應(yīng),從而證明了Feulgen反應(yīng)的專一性.三 實(shí)驗(yàn)用品1 材料Carnoy液固定的洋蔥根尖切片2 試劑①Carnoy固定液:3份95%酒精加1份冰醋酸。 ?。逼 ?②1/5000詹納斯綠Ｂ溶液 Ringer溶液中,稍加熱(3040℃)溶解,用濾紙過(guò)濾后,即為1%原液.取1ml1%原液加入49mlRinger溶液,即得1/5000工作液,以保持充分的氧化能力.③1/3000中性紅溶液 Ringer液,稍加熱(3040℃)溶解,用濾紙過(guò)濾,裝入棕色瓶中于暗處保存.臨用前取1ml1%原液加入29mlRinger溶液,即得1/3000工作液,將其裝入棕色瓶中備用.３ 材料： 人口腔上皮細(xì)胞 洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞 綠豆幼根根尖四 實(shí)驗(yàn)方法（一）線粒體的超活染色與觀察１ 人口腔黏膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察載玻片于３７℃恒溫水?。?/5000詹納斯綠Ｂ溶液 ?。驳巍 ∪丝谇簧掀ぜ?xì)胞黏液 牙簽刮取染色１０－１５min，蓋上蓋玻片，吸去
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