理學(xué)酶工程ppt課件-文庫吧資料
2025-02-27 22:20本頁面
【正文】 胞的結(jié)構(gòu) 2022/3/13 58 2022/3/13 59 2022/3/13 60 2022/3/13 61 2） 微囊法 是利用各類型的膜將 微生物細(xì)胞（ 酶）封閉起來，這類膜能使低分子產(chǎn)物和底物通過，而酶和其他高分子物質(zhì)不能通過，所以 只適合底物和產(chǎn)物都是小分子物質(zhì)的酶的固定。 包埋法一般較少改變酶的高級(jí)結(jié)構(gòu)，酶的回收率較高；但它僅適用于小分子底物和產(chǎn)物的酶，因?yàn)橹挥行》肿游镔|(zhì)才能擴(kuò)散進(jìn)入載體的網(wǎng)格。 固定化對(duì)于吸附載體的要求包括： 無生物毒抗物理降解、具有抗化學(xué)降解、抗生物降解的穩(wěn)定性，具有一定的機(jī)械強(qiáng)度和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。 2022/3/13 54 —— 利用各種固體吸附劑將酶或含酶菌體吸附在其表面上而使酶固定化的方法 （二）固定化方法 吸附法 包埋法 結(jié)合法 交聯(lián)法 分類 2022/3/13 55 常用吸附劑 —— 活性炭、氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅膠、羥基磷灰石。 ? (3)細(xì)胞生長快、而且多、反應(yīng)快。 2022/3/13 51 ㈠ 什么是固定化酶？ 水溶性酶（細(xì)胞） 水不溶性載體 水不溶性酶或細(xì)胞 （固定化酶或細(xì)胞） 固定化技術(shù) 二、固定化酶及固定化細(xì)胞 —— 固定化技術(shù) 及應(yīng)用 2022/3/13 52 酶在使用過程中 ： 2. 只能在水溶液中催化底物反應(yīng) 起難回收 固定化酶： ，利于連續(xù)自動(dòng)化生產(chǎn) 缺點(diǎn)： 固定化過程中有時(shí)會(huì)引起酶的失活 2022/3/13 53 細(xì)胞的固定化方法 固定化細(xì)胞是在固定化酶的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。 蛋白質(zhì)在此 pH梯度凝膠中泳動(dòng)，當(dāng)遷移至 pH值等于 pI處時(shí)，就不再泳動(dòng)，而被濃縮成狹窄的區(qū)帶。 其次一些低 pI的載體兩性電解質(zhì)分子 （ 荷其次多的負(fù)電 ） 也將向陽極移動(dòng) ， 直到它的凈電荷被減少到零才停止 。 2022/3/13 46 ㈡ 引入電場時(shí)的變化 載體兩性電解質(zhì)分子將向陰極或陽極遷移 ， 帶有最低等電點(diǎn)的分子 （ 荷最多的負(fù)電 ） 將最快地向陽極遷移 。在外電場作用下，自然形成pH梯度，是一種特殊的緩沖液。 ? 等電聚焦 就是在電泳介質(zhì)中放入 載體兩性電解質(zhì) ，當(dāng)通以直流電時(shí)，兩性電解質(zhì)即形成一個(gè)由 陽極到陰極逐步增加的 pH梯度 ，在此體系中，不同的蛋白質(zhì)即移動(dòng)到或聚焦于其相當(dāng)?shù)牡入婞c(diǎn)位置上，也就是說被聚焦于一個(gè)狹的區(qū)帶中，電泳技術(shù)中的等電點(diǎn)聚焦也稱為聚焦電泳。 2022/3/13 42 等 電 聚 焦 電 泳 IEFE Isoelectric Focusing Electrophoresis ? IEFE一種利用具有 pH梯度的支持介質(zhì)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。 ? 梯度凝膠比單一濃度凝膠的分離范圍更寬，可以同時(shí)分離較大范圍分子量的蛋白質(zhì)。 ? 不連續(xù)系統(tǒng) 中由于 緩沖液離子成分 ， pH， 凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性 ， 帶電顆粒在電場中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng) ， 分子篩效應(yīng) ， 還具有濃縮效應(yīng) ， 因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳 。具有分子篩的作用。因而其遷移率僅反映蛋白質(zhì)分子大小，故廣泛用于 蛋白質(zhì)分子量的測定 。 2022/3/13 35 在蛋白質(zhì)組學(xué)中對(duì)電泳的分類 ?一維電泳 (one dimensional gel electrophoresis, 1DE)，現(xiàn)在普遍采用垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） ?二維電泳 (twodimensional gel electrophoresis, 2DE)，又稱雙向電泳 2022/3/13 36 非變性電泳 (native PAGE)： 遷移率由分子大小、分子形狀、凈電荷多少?zèng)Q定。電泳后，不同的蛋白質(zhì)組成被分離形成帶狀區(qū)間。 2022/3/13 34 （ 3）酶分離純化的電泳技術(shù) 電泳 — 在外電場作用下，由于蛋白質(zhì)所帶凈電荷的大小和性質(zhì)不同，因而其泳動(dòng)方向和速率也不同，從而達(dá)到分離的目的。 2022/3/13 33 通過高壓泵，連續(xù)的將流動(dòng)相按一定流速流過柱子，通過進(jìn)樣器注入樣品混合物。 ②溶劑系統(tǒng)采用高壓，因此洗脫速度增大。被結(jié)合的物質(zhì)再用洗脫劑把它從柱上洗脫下來。 2022/3/13 28 原理： 利用生物大分子間 特異的親和能力 來純化生物大分子，如： 抗原和抗體；酶和底物或輔酶或抑制劑；激素和受體； RNA和其互補(bǔ)的 DNA等。 ? 帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負(fù)電荷的稱之陽離子樹脂。這樣通過一定長度的凝膠層析柱后，大小不同的分子蛋白就被分開了。 2022/3/13 22 （ 2）層析分離 是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)（分子的大小和形狀、分子極性、吸附力、分子親和力和分配系數(shù)）的不同，使各組分的分布程度不同而達(dá)到分離。通過控制 T，使大量雜質(zhì)蛋白變
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