【正文】 或 3000 噸時(shí)，外國(guó)企業(yè)還不害怕，因?yàn)槟窃?5 萬 — 6 萬噸的國(guó)際市場(chǎng)中算不了什么。日本武田公司關(guān)閉了其在美國(guó)的工廠。于是，瑞士羅氏公司被迫應(yīng)戰(zhàn)， 1995 年開始第一次降價(jià)，以每公斤 12 美元降到每公斤 7 美元。 從 1990 年到 1996 年短短 6 年的時(shí)間里，中國(guó) VC 生產(chǎn)能力增長(zhǎng)了好幾倍，出口雖也有一定的增長(zhǎng)，但沒有生產(chǎn)能力增長(zhǎng)得快，供過于求是必然的。工作人員告訴我們，綠色的標(biāo)志代表水，紅色的標(biāo)志代表酸堿，銀色的標(biāo)志代表蒸汽，黑色的標(biāo)志代表物料。 四、 參觀生產(chǎn)車間 我們參觀的是 提取 車間 （圖 5） 。當(dāng)然，如果 VC 片中添加一些對(duì)人體有益的成分，也會(huì)使其價(jià)格比較高。腎上腺髓質(zhì)所分泌的腎上腺素和去甲腎上腺素是有酪氨酸轉(zhuǎn) 化而來，在次過程需要 VC 的參與。人體受到異常的刺激，如劇痛、寒冷、缺氧、精神強(qiáng)刺激，會(huì)引發(fā)抵御異常刺激的緊張狀態(tài)。 促進(jìn)淋巴母細(xì)胞的生成，提高機(jī)體對(duì)外來和惡變細(xì)胞的識(shí)別和殺滅；參與免疫球蛋白的合成； 提高 CI 補(bǔ)體酯酶活性，增加補(bǔ)體 CI 的產(chǎn)生； 促進(jìn)干擾素的產(chǎn)生，干擾病毒 mRNA 的轉(zhuǎn)錄，抑制病毒的增生。白細(xì)胞含有豐富的 VC，當(dāng)機(jī)體感染時(shí)白細(xì)胞內(nèi)的VC 急劇減少。 從以上可知，只要 VC 充足，則 VC、谷胱甘肽、 SH 形成有力的抗氧化組合拳，清除自由基，阻止脂類過氧化及某些化學(xué)物質(zhì)的毒害作用，保護(hù)肝臟的解毒能力和細(xì)胞的正常代謝。 酶是生化反應(yīng)的催化劑，有些酶需要有自由的琉基（ SH）才能保持活性。它有兩種存在形式，即氧化型和還原型，還原型對(duì)保證細(xì)胞膜的完整性起重要作 23 用。為此，谷胱甘肽和酶起著重要作用。 8．保護(hù)細(xì)胞、解毒，保護(hù)肝臟。豐富的膠原蛋白有助于防止癌細(xì)胞的擴(kuò)散； VC 的抗氧化作用可以抵御自由基對(duì)細(xì)胞的傷害防止細(xì)胞的變異；阻斷亞硝酸鹽和仲胺形成強(qiáng)致癌物亞硝胺。使難以吸收利用的三價(jià)鐵還原成二價(jià)鐵，促進(jìn)腸道對(duì)鐵的吸收，提高肝臟對(duì)鐵的利用率，有 助于治療缺鐵性貧血。可以保護(hù)其它抗氧化劑，如維生素 A、維生素 E、不飽和脂肪酸，防止自由基對(duì)人體的傷害?？纱龠M(jìn)膽固醇的排泄，防止膽固醇在動(dòng)脈內(nèi)壁沉積，甚至可以使沉積的粥樣斑塊溶解。牙齦是軟組織，當(dāng)缺乏蛋白質(zhì)、鈣、 VC 時(shí)易產(chǎn)生牙齦萎縮、出血。 3．牙齦萎縮、出血。這種情況在皮膚表面發(fā)生，則產(chǎn)生淤血、紫癍；在體內(nèi)發(fā)生則引起 疼痛和關(guān)節(jié)漲痛。微血管是所有血管中最細(xì)小的，管壁可能只有一個(gè)細(xì)胞的厚度，其強(qiáng)度、彈性是由負(fù)責(zé)連接細(xì)胞具有膠泥作用的膠原蛋白所決定。 2．壞血病。膠原蛋白占身體蛋白質(zhì)的 1/3，生成結(jié)締組織，構(gòu)成身體骨架。 維生素 C 對(duì)人體的作用 ： 近代研究表明 VC 對(duì)人體健康至關(guān)重要： 1．膠原蛋白的合成需要維生素 C 參加，所以 VC 缺乏 ，膠原蛋 白不能正常合成，導(dǎo)致細(xì)胞連接障礙。一旦吸收，就分布到體內(nèi)所有的水溶性結(jié)構(gòu)中，正常成人體內(nèi)的維生素 C 代謝活性池中約有 1500mg維生素 C， 22 最高儲(chǔ)存峰值為 3000mg 維生素 C。 生產(chǎn)過程中要注意三廢的處理： ? 母液回收、濃縮、結(jié)晶甩濾，提高收率 ? 廢鹽酸回收后可再用于第一次交換 萊氏法和兩步發(fā)酵法的工藝比較 （ 1）萊氏法工藝 ?葡萄糖、 高壓催化氫化、黑醋菌氧化、丙酮保護(hù)、次氯酸鈉氧化、鹽酸轉(zhuǎn)化、維生素 C ?優(yōu)點(diǎn) ? 生產(chǎn)工藝成熟、各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)先進(jìn)、生產(chǎn)技術(shù)水平較高、 ? 總收率達(dá) 65%、優(yōu)級(jí)品率 100% ?缺點(diǎn) ? 需要丙酮保護(hù)羥基、反應(yīng)步驟增多，連續(xù)操作有困難 ? 丙酮用量大，苯的毒性大 ? 勞動(dòng)保護(hù)強(qiáng)度大，并污染環(huán)境 （ 2）兩步發(fā)酵法 ?葡萄糖 高壓催化氫化 兩步微生物氧化 酸（堿）轉(zhuǎn)化 維生素 C ?優(yōu)點(diǎn) ? 生物氧化具有特異性，省去了保護(hù)和脫保護(hù)兩步 ? 革除了大量有機(jī)溶劑 ? 改善了勞動(dòng)條件和環(huán)境保護(hù)問題 ? 革除了動(dòng)力攪拌，大大節(jié)約了能源 三、 吳老師給我們普及 VC 知識(shí) 維生素 C（ Vitamin C ， Ascorbic Acid）又叫 L抗壞血酸，是一種水溶性維生素。 此步驟的生產(chǎn)流程可簡(jiǎn)單寫為： 古龍酸粉 ???? ?? 甲醇、濃硫酸 古龍 酸甲酯 ?? ?? 小蘇打 VCNa （甲醇溶液） ??? ?? 結(jié)晶、冷凍 晶體 ?? ?? 過濾 VCNa溫品 ?? ?? 加水 VCNa 水溶液 ??? ?? 離子交換 VC 水溶液????????? ?? 結(jié)晶、脫水碳吸附、壓濾、濃縮、 粗 VC 20 ⑷ 精制 : 在潔凈區(qū)中 操作。 2酮基 L古龍酸在甲醇中用濃硫酸催化酯化 ，攪拌并加熱，使溫度為 66~68℃ ，反應(yīng)4h 左右即為酯化終點(diǎn)， 生成 2酮基 L古龍酸甲酯，加 NaHCO3 轉(zhuǎn)化生成維生素C 鈉鹽，經(jīng)氫型離子交換樹脂酸化得到維生素 C。傳統(tǒng) 工藝是加熱沉淀法，發(fā)酵液經(jīng)靜置沉降后通過 732 氫型離子交換樹脂柱，調(diào)節(jié) pH 至蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，并加熱使蛋白質(zhì)凝固，然后用高速離心機(jī)分離出菌絲、蛋白和微粒，清液再次通過陽離子交換柱，酸化為 2酮基 L古龍酸的水溶液，濃縮結(jié)晶后得到 2酮基 L古龍酸。 ， L山梨糖生成 2酮基 L古龍酸的轉(zhuǎn)化率可達(dá) 70~85%。種子和發(fā)酵培養(yǎng)基的成份類似 ,主要有 L山梨糖、玉米漿、尿素、碳酸鈣、磷酸二氫鉀等， pH 值為 。 ② . 第二步發(fā)酵 氧化葡萄糖酸桿菌 (Gluconobacter oxydans，小菌 )和巨大芽孢桿菌 (Bacillus megaterium，大菌 )混合培養(yǎng)。 發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液經(jīng)低溫滅菌，移入第二步發(fā)酵罐作原料。 ⑴ 發(fā)酵 ① . 第一步發(fā)酵 黑醋酸菌（ Acetobacter suboxydans）經(jīng)種子擴(kuò)大培養(yǎng)，接入發(fā)酵罐，種子和發(fā)酵培養(yǎng)基主要包括山梨醇、玉米漿、酵母膏、碳酸鈣等成份， pH ~。 此方法的生產(chǎn)流程可簡(jiǎn)單寫為： D葡萄糖 ? ?? H2 D山梨醇 ? ?? O2 L 18 山梨糖 ??? ?? 硫酸、丙酮 雙丙酮 L山梨 糖 ??????? ?? 4K M n O2ON a O H][ 、氧化 雙丙酮 L古龍酸糖 ??? ?? HC l][酸化 2酮 L古龍酸 ?? ?? ][轉(zhuǎn)化 維生素 C 此方法的 注意事項(xiàng)及三廢處理 1) 車間進(jìn)行還原反應(yīng)時(shí)氫氣自制，故配有氫氣柜。 1. 萊氏法 是維生素 C 生產(chǎn)的經(jīng)典方法，是由 Reichstein 和 Grussner 研究開發(fā)的。 二、 聽 工作人員 給我們講解東藥 VC 的生產(chǎn)流程 ： 生產(chǎn)維生素 C 的 生產(chǎn)方法 有萊氏法、兩 步 發(fā)酵法、新兩 步 發(fā)酵法等。經(jīng)專家鑒定：東北制藥的萬噸維生素 C 新工藝和工業(yè)化技術(shù)水平在發(fā)酵法生產(chǎn)維生素 C 領(lǐng) 域處于國(guó)際先進(jìn)水平，該工藝使維生素 C 總收率提高了近 25%、制造成本降低了 67%，實(shí)現(xiàn)了維生素 C 生產(chǎn)的規(guī)模生產(chǎn)效益。 在萬噸級(jí)維生素 C 生產(chǎn)裝置的實(shí)際應(yīng)用中，該公司設(shè)計(jì)采用了 300 立方米氣升式發(fā)酵罐，為國(guó)內(nèi)首創(chuàng)；同時(shí)引進(jìn)了具有世界先進(jìn)水平的超濾裝置，并采用先進(jìn)的連續(xù)式流程和滲析半連續(xù)組合工藝。 通過實(shí)施觀念創(chuàng)新、思維創(chuàng)新、制度創(chuàng)新、技術(shù)創(chuàng)新和管理創(chuàng)新，東北制藥初步形成了獨(dú)具特色的企業(yè)創(chuàng)新理論指導(dǎo)體系。 東北制藥具備強(qiáng)大的生產(chǎn)能力，企業(yè)技術(shù)裝備先進(jìn)，主導(dǎo)產(chǎn)品的各項(xiàng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)均處于國(guó)際、國(guó)內(nèi)先進(jìn)水平。 就這樣我們結(jié)束了為期半天的益康參觀實(shí)習(xí)， 七月六號(hào) 上午我們?nèi)チ松蜿枛|北制藥廠。 圖 3 圖 4 三、 實(shí)習(xí) 小結(jié) ： 這次去益康，我們收獲頗多， 由于他們實(shí)驗(yàn)室的潔凈程度特高，要進(jìn)去得經(jīng)過好幾層的消毒，而且還要穿防護(hù)服，所以我們沒有進(jìn)去 參觀，不過通過他們的微機(jī)監(jiān)控室我們也能夠清楚的看見各個(gè)車間都是做 什么的，再加上工作人員的認(rèn)真講解，我們學(xué)到很多課本上沒有的知識(shí)，也將有些學(xué)過的知識(shí)結(jié)合與實(shí)踐相結(jié)合。激發(fā)了我們對(duì)發(fā)酵罐知識(shí)點(diǎn)的回憶。 由于 我們是 7 月份參觀的益康，這個(gè)時(shí)期正是他們停產(chǎn)的時(shí)期，所以很多車 16 間我們都沒有參觀到。 在雞頭上為約 米左右噴霧，噴完后要最大限度地降低通風(fēng)換氣量，以保證氣霧免疫效果，同時(shí)也要防止通風(fēng)不良而造成 窒息死亡，一般噴霧后密閉雞舍 10~20分即可。氣霧免疫時(shí)，將疫苗按規(guī)定稀釋好，用噴霧器或空壓機(jī)將疫苗液噴成氣霧粒子。刺種時(shí)，刺針針尖向下，使藥液自然下垂，避開血管，肌肉和骨骼，使刺種針垂直刺入翼膜。如果滴眼時(shí)雞剛好閉眼、滴鼻時(shí)雞打噴嚏或鼻孔產(chǎn)生氣泡現(xiàn)象，必須重復(fù)接種。 b) 滴鼻點(diǎn)眼免疫 疫苗稀釋要用蒸餾水或生理鹽水，用量與配量相匹配。 菌種 發(fā)酵罐培養(yǎng) 收毒 中間品檢驗(yàn) 種子培養(yǎng) 培養(yǎng)基 滅菌 裝箱 貼標(biāo) 軋蓋 壓塞 入庫 28℃ 標(biāo)簽 滅菌 鋁蓋 成品檢驗(yàn) 清洗 病毒液暫存 15℃ 化苗 配苗 分裝 凍干保護(hù)劑 配制 滅菌 滅菌 西林瓶 精洗 粗洗 滅菌 粗洗 膠塞 精洗 凍干干燥 半壓塞 15 特別注意疫苗的用水量，一般為雞日飲水量的 30%，疫苗用量高于平均用量的 2~3 倍，保證所有的雞同時(shí)喝到疫苗水，并在 ~1 小時(shí)內(nèi)飲完。 1℃ 照蛋 轉(zhuǎn)瓶 滅菌 晾干 精洗 粗洗 培養(yǎng)液 冷庫 15℃ 解凍 28℃ 病毒液暫存 15℃ 化苗 配苗 中間品檢驗(yàn) 分裝 凍干保護(hù)劑 配制 滅菌 滅菌 西林瓶 精洗 粗洗 裝箱 貼標(biāo) 軋蓋 壓塞 入庫 15℃ 標(biāo)簽 滅菌 清洗 鋁蓋 成品檢驗(yàn) 滅菌 粗洗 膠塞 精洗 凍干干燥 半壓塞 14 ⒊菌種培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 6) 舉例說明 雞新城 疫苗的 使用 方法： a) 飲水免疫 首先要保證足夠的飲水器，并把飲水器清洗干凈， 達(dá)到 無抗菌、消毒藥物殘留；飲水免疫前停水 2~4 小時(shí)；疫苗水中不含金屬離子和氯離子，可使用涼開水或蒸餾水，最 好使用去離子水，并在其中加入 2~3%鮮牛奶或 ~%脫脂奶粉，以穩(wěn)定病毒活性。 12 ⒈ 雞胚培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 蛋庫（ SPF 蛋） 脫外包 接毒 雞胚前孵化 蛋表面消毒 后孵化 冷蛋（ 4℃ ） 收獲病毒 配苗 裝箱 貼標(biāo) 軋蓋 壓塞 分裝 入庫 15℃ 滅菌 凍干保護(hù)劑 標(biāo)簽 滅菌 粗洗 清洗 膠塞 鋁蓋 配制 配制 滅菌 照蛋 中間品檢驗(yàn) 病毒液暫存 15℃ 化苗 照蛋 滅菌 西林瓶 精洗 精洗 成品檢驗(yàn) 粗洗 凍干干燥 半壓塞 13 ⒉ 細(xì)胞培養(yǎng)弱毒疫苗生產(chǎn)工藝流程 蛋庫（ SPF 蛋） 脫外包 接毒 雞胚孵化 蛋表面消毒 轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng) 177。特別是2020 年中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第 202 號(hào)、 2020 年中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第 404 號(hào)和中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第 442 號(hào)頒布以來 ,SPF 雞蛋和 SPF 雞的使用量明顯增加 (據(jù)不完全統(tǒng)計(jì) ,2020 年全國(guó)使用 SPF 雞為 28 348 只 ,2020 年約 73 000 只 ),正負(fù)壓 SPF 雞隔離器的數(shù)量也明顯增多 (2020 年為 96 臺(tái) ,2020 年為 1 232臺(tái) ),SPF 雞蛋的生產(chǎn)和銷售正向產(chǎn)業(yè)化、專業(yè)化邁進(jìn)。 20 世紀(jì) 80 年代 ,農(nóng)業(yè)系統(tǒng)進(jìn)行 SPF 雞技術(shù)的開發(fā)研究。由于我國(guó)獸藥實(shí)施 GMP 管理 ,SPF 雞卵的需求量大增。 SPF 蛋： SPF 為 specific pathogen free 的縮寫意思為無特定病原體， SPF 雞蛋既是由無特定病原體雞下的，無特定病原體雞蛋。 5) 典型疫苗 的 生產(chǎn)工藝流程 根據(jù)以上總結(jié)的制造疫苗的各項(xiàng)操作步驟，益康員工給我們重點(diǎn)介紹了幾種疫苗的生產(chǎn)工藝流程。 工序五： 配苗 1．滅活疫苗：不同病毒采用不同滅活劑，有的需加佐劑，分裝。培養(yǎng)當(dāng)出現(xiàn) 70%~85%以上細(xì)胞病孌時(shí)，即可收獲。用傳代細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)注意不要用種瘤細(xì)胞。常用細(xì)胞培養(yǎng)方法為靜止培養(yǎng)和轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。如豬瘟兔化弱毒牛睪丸細(xì)胞疫苗用犢牛睪丸原代細(xì)胞，狂犬病弱毒細(xì)胞適應(yīng)疫苗，采用 BHK21。 工序三 ： 細(xì)胞制備 （