【正文】 的全部或一部分。186．一旦克隆了一個遺傳定位的基因，就可以用 技術(shù)來鑒定基因組DNA文庫中與之相鄰的基因克隆。185．在構(gòu)建 CDNA克隆之前，可以用 來富集一特殊的核苷酸序列。183．將含有外源基因組一個酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個 ，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個 。181．一個細菌的表面大約有 個同 DNA結(jié)合的位點。(blunt end ligation)的連接效率比粘性末端連接的效率低得多，所以通常在連接反應(yīng)體系中適量添加促進大分子凝聚的凝聚劑，以提高平末端 DNA連接的效率。 。，必須考慮其表達的三個基本條件： (1) (2) (3) (4) 。 HB101及其衍生株不宜用煮沸法分離質(zhì)粒 DNA，其原因是 。 NaCl和檸檬酸鈉組成的試劑，其中 NaCl的作用是使 ，而檸檬酸鈉的作用是 。 。 PCR主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列設(shè)計 引物來合成相應(yīng)的基因。 DNA時，要戴手套操作，原因是 。 cDNA的合成中要用到 S1核酸酶，其作用是切除在 。，英國劍橋大學(xué)的 第一個合成了具有3’，5’—磷酸二酯鍵的 TpT和 pTpT，為此獲得了 年的諾貝爾獎。 DNA保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 作用。 DNA分離過程中造成 DNA分子斷裂的因素很多，主要有(1) (2) (3) 。 DNA分離過程中，通常要進行透析，其目的是 。 SDS分離 DNA時，要注意 SDS的濃度，0．1％和 l級的 SDS的作用效果是不同的，前者 ，后者 。 DNA聚合酶得到的 PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個突出堿基末端的雙鏈DNA分子。 (3) 。：(1) 。 109細胞／ml時，即可通過離心收 集菌體。(3) (4) 。 DNA的方法有：(1) 。 DNA時要使用金屬離子整合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是 。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含 DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維 持穩(wěn)定?！确鲁樘?DNA時，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少許異戊醇。143. SDS是分離DNA時常用的一種陰離子除垢劑，它有四個作用： (1) ； (2) ； (3) ； (4) 。，插入外源 DNA片段后，總的長度應(yīng)在噬菌體基因組的 的范圍內(nèi)。 M13有10個基因，分為三個功能集團，其中與復(fù)制有關(guān)的兩個基因是： 和 。 DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是 ，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是 。 DNA不宜作為基因工程載體，原因是：(1) (2) (3) 。，即插入型和取代型。，主要原因是 和 。成環(huán)后的粘性末端部位就叫做 位點。其原因主要是在λ噬菌體線性DNA分子的兩端各有一個 個堿基組成的天然粘性末端。它有一個復(fù)制起點，進行 向復(fù)制。 DNA為 kb，有 多個基因。，主要有兩方面的原因：一是 ；二是 。它的復(fù)制子來自 ， Amp抗性基因則是來自 。126. pUC18質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。124．把那些沒有可檢測表型的質(zhì)粒稱為 。122．YAC的最大容載能力是 ，BAC載體的最大容載能力是 。120．質(zhì)粒的消失同染色體基因的突變是不同的，前者不能恢復(fù)，后者可以通過 恢復(fù)該基因的性狀。118．一個帶有質(zhì)粒的細菌在有 EB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，一部分細胞中已測不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫 。116. 復(fù)制子由三部分組成：(1) (2) (3) 。114．如果兩個質(zhì)粒不能穩(wěn)定地共存于同一個寄主細胞中，則屬于 群， 這是因為它們的 所致。113．就克隆一個基因(DNA片段)來說，最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部 分： 、 、 。但是在正常條件下只有一個起點可能居支配地位。然而，質(zhì)粒的復(fù)制可以是 向的、或是 向的。111．由于不同構(gòu)型的 DNA插入 EB的量不同，它們在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率也不 同， SC DNA的泳動速度 ，OC DNA泳動速度 ， LDNA居中，通過凝膠電泳和 EB染色的方法可將不同構(gòu)型的 DNA分別開來。109．反轉(zhuǎn)錄酶除了催化 DNA的合成外，還具有 的作用，可以將 DNARNA雜種雙鏈中的 水解掉。107．切口移位(nick translation)法標記 DNA的基本原理在于利用 的 和 的作用。105．EGTA是 離子螯合劑。103．CIP催化脫磷酸時有兩種最適溫度，一種是37℃，適用于 端脫磷酸；另一種是56℃，適用于 端脫磷酸。101. 為了防止 DNA的自身環(huán)化，可用 脫去雙鏈DNA 。99．RNA連接酶作用時除了需要 ATP和 Mg2+外，還需要 。 (2) 的活性。它在體內(nèi)的作用是參與 T4噬菌體 不參與 DNA合成的連接，但在 中可能有作用。96．T4RNA連接酶是1972年發(fā)現(xiàn)的，并于 1977年純化。94. 技術(shù)可以用來鑒定 DNA分子中與 DNA結(jié)合蛋白相互作用的特定序列。93．在 S1保護實驗中， S1切割的溫度有兩種：20℃和45℃，這是因為：在20℃時， 。以 Mn2+／Mg2+作為輔助因子，只能在單鏈 DNA或雙鏈 DNA的3’突出端加尾。具有3’突出末端的雙鏈 DNA也是較好的反應(yīng)底物。91．從小牛胸腺中分離純化的末端轉(zhuǎn)移酶催化的基本反應(yīng)是將 ，同時釋放出游離的無機磷。該酶的3’ →5’外切活性既能作用于單鏈 DNA也能作用于雙鏈 DNA，不過作用于 鏈的活性要強于 鏈。該酶由大腸桿菌基因 編碼，是一種單鏈球蛋白，分子量為109kDa，酶蛋白中含有一個 Zn原子。，一個Weiss單位是： 。第二是它們催化平末端連接的能力不同，在正常情況下只有 T4 DNA連接酶能夠連接平末端，E．coli DNA連接酶則不能。E．coli DNA連接酶是由大腸桿菌基因 編碼，也是一條多肽鏈的單體，分子量為 kDa。 DNA連接酶： E．coli DNA連接酶和 T4 DNA連接酶。 濃度的甘油溶液中。，使得酶在 DNA序列上的識別位點只有部分得到切割，它的理論依據(jù)是 。 DNA是由4種堿基組成的，所以任何限制性內(nèi)切核酸酶的切割頻率的理論值應(yīng)該是 。 ；而第一個用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是 。，需要離心2秒鐘，其目的是 和 。，第一個大寫字母取自 ，第二、三兩個字母取自 ，第四個字母則用 表示。在這些亞基中，α亞基具有 作用；β亞基具有 的活性；γ亞基的作用則是 。根據(jù)對限制性內(nèi)切核酸酶識別序列的分析，限制性內(nèi)切核酸酶識別序列具有 傾向，即它們在識別序列中含量較高。，就是：(1) (2) 。切割的方式有 ，產(chǎn)生末端的 DNA片段或 的 DNA片段。它們的作用底物為雙鏈 DNA，極少數(shù)Ⅱ類酶也可作用于單鏈 DNA，或DNA／RNA雜合雙鏈。，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點相互位置的 。66. 年 Luria和 Human在 T偶數(shù)噬菌體對大腸桿菌感染實驗中首次發(fā)現(xiàn)了細 菌的 現(xiàn)象。(restriction endonuclease)是指已被證明是 的酶。這一工作具有劃時代的意義，但是他們并沒有 。： ； 和 。60. Cohen等在 年構(gòu)建了第一個有功能的重組 DNA分子。基因工程技術(shù)的誕生，使人們從簡單地利用現(xiàn)存的生物資源進行諸如發(fā)酵、釀酒、制醋和醬油等傳統(tǒng)的生物技術(shù)時代，走向 的時代。翻譯的最后一步被稱為 ，并且需要—套 因子。57．核糖體沿著 mRNA前進，它需要另一個延伸因子 ，這一步需要 的水解。55．蛋白質(zhì)合成的起始過程很復(fù)雜，包括一系列被 催化的步驟。53．釋放因子蛋白與核糖體上 A位點的 密碼結(jié)合，導(dǎo)致肽基轉(zhuǎn)移酶水解連接新生多肽與tRNA分子的化學(xué)鍵。51. 包括兩個tRNA分子的結(jié)合位點： ，即 P位點，緊密結(jié)合與多肽鏈延伸尾端連接的 tRNA分子，和 ，即 A位點，結(jié)合帶有一個氨基酸的tRNA分子。蛋白水解過程也涉及細胞外毒素的活性，如蜜蜂的 和動物激素的活性，如