分子生物學(xué)試題word版-文庫吧資料
2025-01-17 01:26本頁面
【正文】 氧核糖的 3’位置缺少一個(gè)羥基。由于這種顏色標(biāo)志，重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然。這些位點(diǎn)上如果沒有 克隆外源性 DNA 片段，在質(zhì)粒被導(dǎo)入 lac的大腸桿菌后，質(zhì)粒攜帶的半乳糖苷酶基因?qū)⒄１磉_(dá)，與大腸桿菌的半乳糖苷酶基因互補(bǔ)，產(chǎn)生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物 Xgal和誘導(dǎo)劑 IPTG后，出現(xiàn)藍(lán)色的菌落。 （ 2） 、良好載體的條件 必須有自身的復(fù)制子； 載體分子上必須有限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，即多克隆位點(diǎn)，以供外源 DNA插入； 載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志，以區(qū)別陽性重組子和陰性重組子； 載體分子必須有足夠的容量； 可通過特定的方法導(dǎo)入細(xì)胞； 對(duì)于表達(dá)載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子、前導(dǎo)順序、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)等 DNA調(diào)控元件。 堿性磷酸酶：催化去除 DNA、 RNA等的 5磷酸基團(tuán)。 逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴于 RNA的 DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄 RNA成為 DNA的酶，產(chǎn)物 DNA又稱互補(bǔ) DNA。 DNA連接酶：將兩段 DNA分子拼接起來的酶。 途徑： ? 信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化 ? 受體活化 G蛋白 ? 活化后的 G蛋白激活腺苷酸環(huán)化酶（ AC） ? AC催化 ATP生成 cAMP ? cAMP活化 PKA， PKA使目標(biāo)蛋白磷酸化，調(diào)節(jié)代謝酶的活性或調(diào)節(jié)基因的表達(dá) （八）、 IP3Ca2+信號(hào)途徑： ? 信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化 ? 受體活化 G蛋白 ? 活化后的 G蛋白激活 PLC ? PLC水解 PIP2生成 IP3 和 DG ? IP3 使鈣通道打開，細(xì)胞內(nèi) Ca2+升高 ? Ca2+與 CaM結(jié)合，激活 Ca2+CaM依賴的蛋白激酶 ? Ca2+CaM依賴的蛋白激酶使目標(biāo)蛋白磷酸化。 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用：活化的 ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。 Raf是 MAPK 級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子，由此啟動(dòng)了 MAPK的三級(jí)激活過程。 低分子量 G蛋白 Ras的活化： SOS可促進(jìn) Ras釋放 GDP，結(jié)合 GTP的反應(yīng)，使 Ras激活。 Grb2 是作為接頭蛋白結(jié)合到受體上。 （ 2）、 mRNA選擇性剪接對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的作用 （ 3）、 mRNA運(yùn)輸?shù)目刂? （五）、受體的特點(diǎn)？ 答： 高度專一性； 高度親和性； 可逆性； 可飽和性； 特定的作用模式 （六）、表皮生長因子介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑？ 答：表皮生長因子受體是一個(gè)典型的蛋白酪氨酸激酶受體，這個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要步驟是： 受體二聚化的形成及其磷酸化：表皮生長因子與受體的結(jié)合使受體發(fā)生二聚化，從而改變受體構(gòu)象，使蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，受體自身的幾個(gè)蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化。 ? 反式作用因子的組合式調(diào) 控作用：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。 ? 反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合：反式作用因子被激活后，即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。 反式作用因子：一般具有三個(gè)功能域（ DNA 識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其他蛋白結(jié)合域）；能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作 用元件；對(duì)基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。 轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程為： TFⅡ D結(jié)合 TATA盒； RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合 TFⅡ DDNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與 RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開放復(fù)合物。 （三）、真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？ 答：真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過反式作用因子、順式作用元件和 RNA聚合酶的相互作用來完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程。 CAP 的正性調(diào)節(jié)：在啟動(dòng)子上游有 CAP 結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)， cAMP 濃度升高，與 CAP 結(jié)合，使 CAP 發(fā)生變構(gòu)， CAP 結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的 CAP 結(jié)合位點(diǎn)，激活 RNA 聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄 ，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。 阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：沒有乳糖存在時(shí)， I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱 序列 O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。 真核基因組的特點(diǎn)： ① 真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)； ② 基因組 DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)； ③ 真核基因?yàn)閱雾樂醋?，而?xì)菌和 病毒的結(jié)構(gòu)基因多為多順反子； ④ 基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)； ⑤ 真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因，由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成； ⑥ 存在大量的重復(fù)序列； ⑦ 功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族； ⑧ 存在可移動(dòng)的遺傳因素； ⑨ 體細(xì)胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。 二、 問答題 （一）、病毒、原核、真核基因組的特點(diǎn)？ 答： 病毒基因組的特點(diǎn)： ① 種類單一； ② 單倍體基因組：每個(gè)基因組在病毒中只出現(xiàn)一次； ③ 形式多樣； ④ 大小不一；⑤ 基因重疊； ⑥ 動(dòng)物 /細(xì)菌病毒與真核 /原核 基因相似：內(nèi)含子； ⑦ 具有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因； ⑧ 基因編碼區(qū)無間隔：通過宿主及病毒本身酶切； ⑨ 無帽狀結(jié)構(gòu)； ⑩ 結(jié)構(gòu)基因沒有翻譯起始序列。 4 周期蛋白：是一類呈細(xì)胞周期特異性或時(shí)相性表達(dá)、累積與分解的蛋白質(zhì)，它與周期素依賴性激酶共同影響細(xì)胞周期的運(yùn)行。 4 核酸探針：探針是指能與某種大分子發(fā)生特異性相互作用，并在相互作用之后可以檢測出來的生物大分子。 4 SD序列：轉(zhuǎn)錄出的 mRNA要進(jìn)入核糖體上進(jìn)行翻譯，需要一段富含嘌呤的核苷酸序列與大腸桿菌
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