分子生物學(xué)試題word版(存儲(chǔ)版)
【正文】 控的作用 （ 3）、 mRNA運(yùn)輸?shù)目刂? （五）、受體的特點(diǎn)？ 答： 高度專一性； 高度親和性； 可逆性； 可飽和性； 特定的作用模式 （六）、表皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑？ 答：表皮生長(zhǎng)因子受體是一個(gè)典型的蛋白酪氨酸激酶受體，這個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要步驟是： 受體二聚化的形成及其磷酸化：表皮生長(zhǎng)因子與受體的結(jié)合使受體發(fā)生二聚化，從而改變受體構(gòu)象，使蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，受體自身的幾個(gè)蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化。 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用：活化的 ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。 堿性磷酸酶：催化去除 DNA、 RNA等的 5磷酸基團(tuán)。2’,3’ddNTP與普通 dNTP不同，它們?cè)诿撗鹾颂堑?3’位置缺少一個(gè)羥基。 溫度：溫度過(guò)高不利于復(fù)性，而溫度過(guò)低，少數(shù)堿基配對(duì)形成的局部雙鏈不易解離，適宜的溫度是較 TM值低 25度。 （十四）、探針的種類和優(yōu)缺點(diǎn)？ 答： cDNA探針：通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄獲得 cDNA后，將其克隆于適當(dāng)?shù)目寺≥d體，通過(guò)擴(kuò)增重組質(zhì)粒而使 cDNA 得到大量的擴(kuò)增。 隨機(jī)引物法：隨機(jī)引物是人工合成的長(zhǎng)度為 6個(gè)寡核苷酸殘基的寡聚核苷酸片段的混合物。 DNA模板變性：模板雙鏈 DNA?單鏈 DNA， 94℃ 。否則會(huì)使引物和模板錯(cuò)誤配對(duì)。 引物與模板結(jié)合時(shí)，引物的 5’端最多可以游離十幾個(gè)堿基而不影響 PCR反應(yīng)的進(jìn)行。 底物濃度 工作濃度 20200umol/L， dNTPs 濃度過(guò)高可加快反應(yīng)速度，也增加堿基的錯(cuò)配率和實(shí)驗(yàn)成本。 （二十）、大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)外源基因必須具備的條件？ 答： 要求外源基因的編碼區(qū)不能 含有內(nèi)含子； 表達(dá)的外源片段要位于大腸桿菌啟動(dòng)子的下游，并形成正確的閱讀框架； 轉(zhuǎn)錄出的 mRNA必須有與大腸桿菌 16S rRNA3，末端相匹配的 SD序列，才能被有效的翻譯成蛋白質(zhì)。 （二十三）、基因敲除的基本程序？ 答：通過(guò) DNA同源重組，使得胚胎干細(xì)胞特定的內(nèi)源基因被破壞而造成功能喪失，然后通過(guò)胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)得到該基因喪失的小鼠模型的過(guò)程稱為基因敲除。 ④ 倒位： DNA鏈內(nèi)重組，使其中一段方向倒置。 ② 缺失：一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈從 DNA大分子上消失。 基本原理：將目的基因或基因組片段用顯微注射等方法注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞中，使目的基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞再植入受體動(dòng)物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，人們可以通過(guò)分析轉(zhuǎn)基因和動(dòng)物表型的關(guān)系，揭示外源基因的功能；也可以通過(guò)轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動(dòng)物品種。退火溫度與引物 Tm值有關(guān)，引物 Tm值在 5580 ℃ 范圍較為理想。 Mg 2+濃度過(guò)高又使酶催化非特異性擴(kuò)增增強(qiáng)。 引物 3’端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn)，因此一定要與模板 DNA配對(duì)。 引物的堿基盡可能隨機(jī)，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積現(xiàn)象。 PCR全過(guò)程每一步的轉(zhuǎn)換是通過(guò)溫度的改變來(lái)控制的。 （十五）、探針的標(biāo)記法？ 答： 缺口平移法：此法是利用適當(dāng)濃度的 DNase Ⅰ 在 DNA 雙鏈上隨機(jī)切割單鏈，造成單鏈切口。兩個(gè)不同基因組 DNA 變性后的相對(duì)雜交速率取決于樣品濃度絕對(duì)一致時(shí)的相對(duì)復(fù)雜性（即 DNA中的堿基數(shù)）。 （十三）、影響雜交的因素？ 答： 核酸分子的濃度和長(zhǎng)度：核酸濃度越大，復(fù)性速度越快。由于這種顏色標(biāo)志，重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然。 逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴于 RNA的 DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄 RNA成為 DNA的酶，產(chǎn)物 DNA又稱互補(bǔ) DNA。 Raf是 MAPK 級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子，由此啟動(dòng)了 MAPK的三級(jí)激活過(guò)程。 ? 反式作用因子的組合式調(diào) 控作用：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。 （三）、真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？ 答：真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過(guò)反式作用因子、順式作用元件和 RNA聚合酶的相互作用來(lái)完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過(guò)程。 二、 問(wèn)答題 （一）、病毒、原核、真核基因組的特點(diǎn)？ 答： 病毒基因組的特點(diǎn)： ① 種類單一； ② 單倍體基因組：每個(gè)基因組在病毒中只出現(xiàn)一次； ③ 形式多樣； ④ 大小不一；⑤ 基因重疊； ⑥ 動(dòng)物 /細(xì)菌病毒與真核 /原核 基因相似：內(nèi)含子； ⑦ 具有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因； ⑧ 基因編碼區(qū)無(wú)間隔：通過(guò)宿主及病毒本身酶切； ⑨ 無(wú)帽狀結(jié)構(gòu)； ⑩ 結(jié)構(gòu)基因沒(méi)有翻譯起始序列。 4 管家基因：在生物體生命的全過(guò)程都是必須的，且在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因。若因此而改變了限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)則可導(dǎo)致相應(yīng)的限制性片段的長(zhǎng)度和數(shù)量發(fā)生變化，稱為 RFLP。可以作為一種調(diào)控特定基因表達(dá)的手段。在正常細(xì)胞內(nèi)未激活的細(xì)胞癌基因叫原癌基因，當(dāng)其受到某些條件激活時(shí)，結(jié)構(gòu)和 表達(dá)發(fā)生異常，能使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。 2 錯(cuò)義突變： DNA分子中堿基對(duì)的取代，使得 mRNA的某一密碼子發(fā)生變化，由它所編碼的氨基酸就變成另一種的氨基酸，使得多肽鏈中的氨基酸順序也相應(yīng)的發(fā)生改變的突變。 2 退火：指將溫度降至引物的 TM 值左右或以下，引物與 DNA 摸板互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成雜交鏈。 1 基因工程：有目的的通過(guò)分子克隆技術(shù)，人為的操作改造基因，改變生物遺傳性狀的系列過(guò)程。它可位于被增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄基因的上游或下游，也可相距 靶基因較遠(yuǎn)。 端粒：以線性染色體形式存在的真核基因組 DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒。 順式作用元件：是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識(shí)別和結(jié)合的特異 DNA序列。其中由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞間信息分子；而在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息調(diào)控信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)信息分子。 1 感染：以噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組 DNA
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