【正文】 物免疫系統(tǒng)發(fā)生反應(yīng)。（4）正常P53還能抑制cmyc\ras基因或腺病毒E1A對細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用。四、法醫(yī)：應(yīng)用DNA多態(tài)性分析、DNA指紋技術(shù)。（3）受體介導(dǎo)反義RNA轉(zhuǎn)移技術(shù)?，F(xiàn)在主要應(yīng)用基因工程技術(shù)制取酶制劑。10 帽子結(jié)構(gòu)：5端第1個核苷酸是甲基化鳥嘌呤核苷酸，它以5端三磷酸酯鍵與第2個核苷酸的5端相連，而不是通常的5磷酸二酯鍵。17 啟動子：是RNA聚合酶結(jié)合的區(qū)域，操縱基因?qū)嶋H上不是一個基因，而是一段能被特異阻遏蛋白識別和結(jié)合的DNA序列。真核細(xì)胞內(nèi)含有大量的序列特異性的DNA結(jié)合蛋白，其中一些蛋白的主要功能是使基因開放或關(guān)閉，稱為反式作用因子，簡稱反式因子。32 逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子：真核生物中一些中度重復(fù)序列的轉(zhuǎn)移成分則與一般細(xì)菌中的轉(zhuǎn)移成分不同，要先轉(zhuǎn)錄成RNA，再逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA，然后重新整合到基因組中，這種逆轉(zhuǎn)錄旁路的轉(zhuǎn)移成分稱為——33 端粒：以線性染色體形式存在的真核基因組DNA的末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)，稱——，功能主要有保護(hù)線性DNA的完整復(fù)制，保護(hù)染色體末端及決定細(xì)胞的壽命等。41 基因表達(dá)：是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定的蛋白質(zhì)，進(jìn)而發(fā)揮其特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過程。這些小分子能夠繼續(xù)向下游傳遞信息，因而被稱為細(xì)胞內(nèi)小分子信使，亦稱為第二信使。并使其獲得新的表型 的過程。７０　ＤＮＡ復(fù)性：當(dāng)促使變性的因素解除后，兩條ＤＮＡ鏈又可通過堿基互補(bǔ)配對結(jié)合形成ＤＮＡ雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱——７１印跡：凝膠中的ＤＮＡ片段雖然在堿變性過程中已經(jīng)變性成單鏈并已斷裂，轉(zhuǎn)移后，各個ＤＮＡ片段在膜上的相對位置與在凝膠中的相對位置仍然一樣，因而稱為——７２　Northern印跡雜交：將待測ＲＮＡ樣品經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行固－液相雜交，檢測ＲＮＡ（主要是mＲＮＡ）的方法。８１基因敲除：通過ＤＮＡ同源重組，使得ＥＳ細(xì)胞特定的內(nèi)源基因被破壞而造成其功能喪失，然后通過ＥＳ細(xì)胞介導(dǎo)得到該基因喪失的小鼠模型的過程稱為——；其基本程序：（１）構(gòu)建打靶載體；（２）ＥＳ細(xì)胞的體外培養(yǎng)；（３）重組載體轉(zhuǎn)染ＥＳ細(xì)胞；（４）重組體轉(zhuǎn)染的ＥＳ細(xì)胞的鑒定；（５）ＥＳ細(xì)胞胚胎移植和嵌合體雜交育種。其表達(dá)產(chǎn)物主要包括跨膜受體、胞質(zhì)調(diào)節(jié)因子或結(jié)構(gòu)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、細(xì)胞周期因子、DNA損傷修復(fù)因子以及其它一些功能蛋白。97 基因干預(yù)：采用特定的方式抑制某個基因的表達(dá)，或者通過破壞某個基因而使之不能表達(dá)，以達(dá)到治療疾病的目的。89病毒癌基因：病毒所攜帶著的致轉(zhuǎn)化基因。８０　基因打靶：是指通過ＤＮＡ定點(diǎn)同源重組，改變基因組中的某一特定基因，從而在生物活體內(nèi)研究此基因的功能。６８探針：雜交體系中已知的核酸序列稱作探針。將所有的重組DNA分子都導(dǎo)入宿主細(xì)胞并進(jìn)行擴(kuò)增，得到分子克隆的混合體，這樣一個混合體稱為—60cDNＡ：是指體外用逆轉(zhuǎn)錄酶催化，以mＲＮＡ為模板合成的互補(bǔ)ＤＮＡ。47 組合式基因調(diào)控：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對基因表達(dá)的調(diào)控不是由單一因子完成的，而是幾種因子組合，發(fā)揮特定的作用，稱為——48 細(xì)胞通訊：細(xì)胞間識別、聯(lián)絡(luò)和相互作用的過程稱為——49 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：針對外源信號所發(fā)生的細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)全過程稱為——50 調(diào)控結(jié)合元件：細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子有許多都是蛋白質(zhì)，其分子中存在著一些特殊的結(jié)構(gòu)域，它們是信號分子相互識別的部位，信號分子通過這些特殊結(jié)構(gòu)域的識別和相互作用而有序銜接，形成不同的信號傳遞鏈或稱為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，這些結(jié)構(gòu)域稱為——51 第二信使：G蛋白活化之后唧 可激活其下游的效應(yīng)分子，如腺苷酸環(huán)化酶和磷脂酶C等。３８　光修復(fù)：生物體內(nèi)有一種光復(fù)活酶，被光激活后能利用光反提供的能量使紫外線照射引起的嘧淀二聚體分開，恢復(fù)原來的兩個核苷酸，稱為光修復(fù)。29 負(fù)增強(qiáng)子（沉默子）；增強(qiáng)子內(nèi)含負(fù)調(diào)控序列，稱為——30 基因家族：指核苷酸序列或編碼產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)具有一定程度同源性的一組基因。23 順式調(diào)控元件（順式作用元件）：是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識別和結(jié)合的DNA序列。16 操縱子：是指數(shù)個功能上相關(guān)聯(lián)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動子和操縱基因）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止信號所構(gòu)成的基因表達(dá)單位，所轉(zhuǎn)錄的RNA為多順反子。8 信使RNA：從DNA分子轉(zhuǎn)錄的RNA分子中，有一類可作為蛋白質(zhì)生物合成的模板，稱為信使RNA。它是從分子水平上研究人體在正常和疾病狀態(tài)下的生命活動及其規(guī)律，從分子水平開展人類疾病的預(yù)防、診斷和治療研究的一門科學(xué)。84 反義RNA在基因治療中的意義和需解決的問題及前景：通過反義RNA結(jié)合細(xì)胞中特異mRNA而調(diào)控其翻譯，可望按劑量來調(diào)節(jié)特定基因的表達(dá)或功能。81 基因診斷策略：一、遺傳性疾?。海?）直接診斷策略，即直接檢測導(dǎo)致遺傳病發(fā)生的各種基因突變；（2）間接診斷策略，即尋找具有基因缺陷的染色體并判斷被檢者是否具有這條染色體。75 P53抑制細(xì)胞生長機(jī)制：（1）P53蛋白可抑制cyclinA的表達(dá)，故P53基因的變異或缺失，可使cyclinA過量表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞在DNA復(fù)制不完全時即進(jìn)入M期而致癌，（2）P53能阻礙DNA聚合酶與DNA復(fù)制起始復(fù)合物的結(jié)合而抑制DNA復(fù)制的啟動，進(jìn)而阻止DNA的復(fù)制。７０　突變類型：點(diǎn)突變（轉(zhuǎn)換和顛換）、缺失（一個堿基或一段核苷酸鏈從ＤＮＡ大分子上消失）、插入（一個原來沒有的堿基或一段原來沒有的核苷酸鏈插入ＤＮＡ大分子中間）、倒位（ＤＮＡ鏈內(nèi)重組，使其中一段方向反置）７１　突變所引起的遺傳效應(yīng)包括：（１）遺傳密碼的改變：錯義突變、無義突變、同義突變、移碼突變；（２）對mRNA剪接的影響（3）蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失。６３　轉(zhuǎn)基因動物的應(yīng)用：（１）對基因組織或階段特異表達(dá)的研究（２）通過研究轉(zhuǎn)入外源基因后的新表型，可以發(fā)現(xiàn)基因的新功能；（３）導(dǎo)入外源基因后，由于基因的隨機(jī)插入，可能會導(dǎo)致內(nèi)源基因的突變，對這些突變表型進(jìn)行分析，可以發(fā)現(xiàn)新的基因（４）可用于只在胚胎期才表達(dá)的基因的結(jié)構(gòu)和功能的研究（５）建立研究外源基因表達(dá)、調(diào)控的動物模型（６）對遺傳性疾病的研究（７）建立人類疾病的動物模型，（８）動物新品種的培育（９）基因產(chǎn)品的制備（１０）在免疫學(xué)中，可用于對免疫機(jī)制、免疫相關(guān)疾病的研究及建立免疫性疾病動物模型等。（５）引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過７０％，引物３末端連續(xù)８個堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增（６）引物３端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn)，因此一定要與模板ＤＮＡ配對（７）引物與模板結(jié)合時，引物的５端最多可以游離十幾個堿基而不影響ＰＣＲ反應(yīng)的進(jìn)行。切口處產(chǎn)生一個５末端和一個３末端，３末端即可作為引物，在大腸桿菌ＤＮＡ聚合酶Ｉ的５－３ＤＮＡ聚合酶活性的催化下，以互補(bǔ)的ＤＮＡ單鏈為模板，依次將dNTP連接到切口的３端羥基上，合成新的ＤＮＡ單鏈；同時ＤＮＡ聚合酶Ｉ的５－３核酸外切酶活性在切口處將舊鏈人５末端逐步切除，新合成鏈不斷延伸，從而使原ＤＮＡ分子上的部分核苷酸殘基被標(biāo)記的核苷酸所取代。靶核酸：Ｎ所檢測的靶核酸是ＲＮＡ，Ｓ是ＤＮＡ（２）ＲＮＡ電泳：ＲＮＡ樣品依其分子量大小在變性膠中進(jìn)行分離，凝膠中需加入變性劑，防止ＲＮＡ分子形成二級結(jié)構(gòu)，維持其單鏈線性狀態(tài)。MaxamGilbert法基本原理：采用化學(xué)試劑處理末端放射標(biāo)記的DNＡ單鏈片段，造成堿基特異性切割，由此產(chǎn)生一組具不同長度的ＤＮＡ鏈的反應(yīng)混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小分離和放射自顯影，直接讀出待測ＤＮＡ的核苷酸順序。（3）所用表達(dá)載體必須是大腸桿菌表達(dá)載體。過程：（1）制備目的基因和相關(guān)載體（2）將目的基因和有關(guān)載體進(jìn)行連接（3）將重組的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（4）DNA重組體的篩選和鑒定（5）DNA重組體的擴(kuò)增、表達(dá)和其它研究。（6）TaqDNA聚合酶和其它耐熱DNA聚合酶。（4）DNA序列分析。配體與受體結(jié)合；（2）受體激活G蛋白（3）G蛋白激活或抑抑細(xì)胞中的效應(yīng)分子；（4）效應(yīng)分子改變細(xì)胞內(nèi)小分子信使的含量與分布；（5）細(xì)胞內(nèi)小分子信使作用于相應(yīng)的靶分子，使之構(gòu)象改變，從而改變細(xì)胞的代謝過程及基因表達(dá)等功能。在核內(nèi)，它可使一些轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生磷酸化，從而改變細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的狀態(tài)。25反式作用因子的激活方式及作用方式：激活方式（1）表達(dá)式調(diào)節(jié)；（2）共價修飾；（3）配體結(jié)合（4）蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用。22 嚴(yán)謹(jǐn)反應(yīng)機(jī)制：在氨基酸缺乏時，游離核糖體與空載的tRNA增加，在ATP存在下，產(chǎn)生pppGpp（鳥苷5磷酸）和ppGpp(鳥苷4磷酸)。轉(zhuǎn)換和顛換只引起ＤＮＡ局部的改變，而ＤＮＡ其它部分的結(jié)構(gòu)不受影響，故稱為點(diǎn)突變。（3）都由一個結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。（6）編碼區(qū)在基因組中所占的比例（約占50%）遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真核基因組，但又遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于病毒基因組。這是其主要調(diào)控功能，還可作為DNA復(fù)制的抑制因子，與引物RNA互補(bǔ)結(jié)合抑制DNA的復(fù)制，以及在轉(zhuǎn)錄水平上與mRNA5末端互補(bǔ)，阻止RNA合成轉(zhuǎn)錄。（2）含有很多稀有堿基或修飾堿基。問答題：1 衰老與基因的結(jié)構(gòu)與功能的變化有關(guān)，涉及到：（1）生長停滯