【正文】 明了什么 ? 鎖鑰學說：酶和底物的關系就象鎖與鑰匙那樣的剛性關系，酶活性中心結構與底物的結構互相吻合，緊密結合成中間絡合物。鍵 (Bond)專一性：對于鍵兩端的基團沒有嚴格的要求。 ① 結構專一性： 絕對專一性：只作用于一個特定的底物。 組成活性中心的氨基酸： His、 Lys、 Asp、 Glu、 Ser、 Cys等 ?有哪幾種類型 ? 又稱特異性，是指酶對底物嚴格的選擇性。 合成酶類（ LigasesorSynthetases）：連接酶，與 ATP分解反應相偶聯(lián)催化 CC、CO、 CN以及 CS鍵的形成反應。 異構酶類（ Isomerases）：催化各種同分異構體的相互轉化。 裂合（裂解）酶類（ Lyase）：催化從底物分子中非水解性移去一個基團或原子形成雙鍵的反應及其逆反應。根據(jù)基團分成 8個亞類：轉移碳基、酮基或醛基、?；?、糖基、烴基、含氮基、含磷基和含硫基的酶。 ? 國際系統(tǒng)分類法： 1961 年國際酶學委員會（ EnzymeCommittee,EC）根據(jù)酶所催化的反應類型和機理，分成 6大類： 氧化 還原酶類（ Oxidoreductases）：催化氧化 還原反應，主要是氫的轉移或電子傳遞的反應。 系統(tǒng)命名法：底物名稱（底物全部列出，用冒號 :分隔） +反應性質 +酶的命名法。酶只作用于某一種或某一類特定的底物；反應條件溫和：常溫、常壓和接近中性酸堿度水溶液中進行；酶易失活：使蛋白質變性的因素（如強酸、強堿高溫等）能使酶變性失去活性；酶活力可調節(jié)控制：酶 和代謝物的區(qū)域化分布；變構調節(jié)、共價修飾調節(jié)和酶原激活；酶含量的調節(jié)（誘導、阻遏和降解）；激素調節(jié)等；某些酶催化活力與輔酶、輔基及金屬離子有關；酶促反應無副反應。 二 .簡答題 ?如何證明 ? 化學本質： 大多數(shù)酶是蛋白質：酶水解的產(chǎn)物是氨基酸；使蛋白質變性的因素也能使酶變性；酶具有兩性解離和等電點性質；不能透過半透膜；和蛋白質具有相同的顏色反應 Ribozyme（核酶）：有催化活性的天然 RNA ?有何區(qū)別 ? 共性：用量少而催化效率高；穩(wěn)定底物形成過渡態(tài)，降低反應的活化能，加速反應；改變化學反應的速度，不改變化學反應平衡；反應前后酶本身不變化。 酶的轉換數(shù)：每秒鐘每個酶分子能催化的發(fā)生變化的底物微摩爾數(shù)，用 kcat表示（ mmol/S）。 多酶體系：為催化一個連續(xù)反應鏈的一系列順序反應，功能相關，不同種類的酶彼此聚合而成體系。 單體酶：一條肽鏈或幾條肽鏈共價締合蛋白質酶。 別構調節(jié)劑：能與別構蛋白的別構部位結合使蛋白產(chǎn)生別構效應的物質。 Vmax和表觀 Km都減小。 Vmax減小，表觀 Km不變。 Vmax不變，表觀 Km增大。如磺胺藥抑菌。如有機磷 化合物使羥基酶磷?；Щ?。 不是酶的特征常數(shù)，會受到酶的濃度、底物以及緩沖液的種類等因素的影響。不是酶的特征常數(shù)，會受到酶的濃度、底物以及緩沖液的種類等因素的影響。 同功酶：催化相同化學反應，但在蛋白質分子的 結構、理化性質和免疫性能等方面都存在明顯差異的一組酶 可逆共價修飾：酶的催化下，酶分子上特定基團與某種化學基團發(fā)生可逆性共價結合，從而改變酶的活性。 活性部位（ activesite）：酶分子中直接與底物結合，并和酶催化作用直接有關的部位。 CNBr 處理得到 ① Ala、 Gly、 Lys、 Thr； ② Gly、 Met、 Ser、 Tyr：（ Gly、 Ser、Tyr） –Met； ② 在 ① 前得（ Gly、 Ser、 Tyr） –Met–（ Ala、 Gly、 Lys、 Thr） 胰蛋白酶處理得到 ① Ala、 Gly； ② Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr：（ Gly、 Met、Ser、 Thr、 Tyr） –Lys； ② 在 ① 前得（ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys–（ Ala、Gly） 糜蛋白酶處理得到 ① Gly、 Tyr； ② Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr： ① Gly–Tyr；① 在 ② 前得 Gly–Tyr–（ Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr） DNFB反應可產(chǎn)生 DNPGly： N–末端為 Gly 與肼無水條件下加熱， Gly解離出來： C–末端為 Gly Gly–Tyr與（ Gly、 Ser、 Tyr） –Met：（ Gly–Tyr–Ser） –Met （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys與 Gly–Tyr–Ser–Met：（ Gly–Tyr–Ser–Met–Thr）–Lys （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys–（ Ala、 Gly）： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala、 Gly） C–末端為 Gly： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala–Gly） 該肽的氨基酸順序： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–Ala–Gly 酶化學習題 一 .名詞解釋 酶：生物活細胞產(chǎn)生的、具有催化能力的以蛋白質為主要成分的生物催化劑 全酶：脫輔酶蛋白與輔因子金屬離子或有機小分子化合物結合形成的結合酶 輔酶：與酶蛋白以非共價鍵疏松結合 ,容易被透析或超濾法除去輔因子如 TPP、NAD 等。與肼無水條件下加熱， Gly解離出來。用糜蛋白酶處理得到 ① Gly、 Tyr； ② Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr。該八肽用 CNBr處理得到 ① Ala、 Gly、 Lys、 Thr； ② Gly、Met、 Ser、 Tyr。 ⑤ 絲氨酸和 丙氨酸： pH7． 0絲氨酸、丙氨酸凈電荷接近零，絲氨酸非極性小，絲氨酸先洗脫。 ③ 谷氨酸和纈氨酸： pH7． 0谷氨酸凈電荷－ 纈氨酸凈電荷接近零，谷氨酸先洗脫。 中性氨基酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′α–NH3＋ )/2 酸性氨基酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′R–COO－ )/2 ＋＋堿性氨基酸： pI=(pK′α–NH3+pK′R–NH3)/2 －－ ① 谷氨酸： pI=(pK′α–COO+pK′R–COO)/2＝ (＋ )∕2＝ ② 精氨酸： pI=(pK′α–NH3＋ +pK′R–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ ③ 丙氨酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′α–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ 用強酸型陽離子交換樹脂分離下述每對氨基酸，當用 pH7． 0的緩沖液洗脫時，下述每對中先從柱上洗脫下來的是哪種氨基酸？ ① 天冬氨酸和賴氨酸： pH7． 0 天冬氨酸凈電荷－ 賴氨酸凈電荷＋ 1，天冬氨酸先洗脫。 pH：保存液態(tài)樣品時注意其穩(wěn)定 pH范圍 時間：生化和分子生物學樣品不可能永久存活。 水份：水參加水解、酶解、水合和加合，加速氧化、聚合、離解和霉變。 ? 空氣：潮解、微生物污染和自動氧化。溶解度法和高速離心沉降法，現(xiàn)已很少再用。 ? 含量測定方法：凱氏定氮法、 Lowry法、紫外吸收法、染料結合法、膠體金法 純度鑒定方法：電泳、離心沉降、 HPLC和溶解度分析等。吸附、萃取、沉淀法（熱變性、鹽析、有機溶劑沉淀等）、離子交換（批量吸附、胖柱交換）、親和層析等； ? 晚期分離純化 :細分級，分辨力高。 以電荷差異為依據(jù) ：電泳、電滲析、等電點沉淀、吸附層析和離子交換層析等。 ? 分離生物大分子的方法： 以分子大小和形態(tài)差異為依據(jù)：差速離心、區(qū)帶離心、超濾、透析和凝膠過濾等。 攪拌與氧化：溫和 攪拌，加入少量巰基乙醇或半胱氨酸防止巰基氧化。 ? 主要影響因素： 離子強度： ～ ～ ； pH值：避免過酸、過堿，一般 pH6～ 8，蛋白質和酶穩(wěn)定的范圍內，常偏離等電點的兩側； 溫度： 0℃ ～ 5℃ ，溫度耐受力強的蛋白質和酶，可提高溫度使雜蛋白變性。 ⑦ 產(chǎn)物的濃縮，干燥和保存。 ④ 生物大分子制備的前處理 生物材料的選擇細胞的破碎生物大分子的提取 ⑤ 生物大分子的分離純化 選擇和探索分離純化方案（最困難過程）。 ② 掌握目的產(chǎn)物的物理 化學性質（文獻調研和預備性實驗） ③ 建立相應的可靠的分析測定方法。 ? 20種氨基酸 遠紫外區(qū) (220nm)：均有光吸收 近紫外區(qū) (220300nm)：酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸含共軛雙鍵苯環(huán)，在 280nm處有最大吸收峰。 ③ 球狀蛋白質的不對稱性增加、粘度增加、擴散系數(shù)降低 ,某些蛋白質結 晶能力喪失。 ② 蛋白質變性后親水基團被掩埋 ,溶解度降低、失去水膜，易形成沉淀析出 。 變性特征 : 1）生物活性喪失（主要標志）。 ? 穩(wěn)定蛋白質膠體系統(tǒng)的因素：分子表面的親水基團與周圍水分子結合形成水化層 (水膜 )；分子表面的親水基團可 結合或釋放 H+,帶一定電荷，水溶液中蛋白質顆粒帶相同電荷。 原膠原蛋白： 3 條左手螺旋多肽鏈相互纏繞形成右手超螺旋分子，長 300nm，直徑為 ；靠鏈間氫鍵以及螺旋和超螺旋的反向盤繞維持超螺旋結構穩(wěn)定性。 蛋白質的別構效應