細(xì)胞工程制藥復(fù)習(xí)ppt課件-文庫吧資料
2025-01-14 05:22本頁面
【正文】 的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù) ? 2）用培液將其稀釋到例如每毫升內(nèi) 10個(gè)細(xì)胞。 ? 在 HAT培養(yǎng)基中， HPRT 或 TK 親本細(xì)胞死亡，淋巴細(xì)胞亦逐漸死亡， 只有雜種細(xì)胞存活 。 ? 淋巴細(xì)胞具有 合成 DNA的 兩條途徑 。 ? 原理： ? 雜交瘤技術(shù)中，常選用次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷 （ HPRT） 或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型 （ TK）骨髓瘤細(xì)胞 為親本之一， 無補(bǔ)救途徑 。 ? 2）淋巴細(xì)胞 免疫方法 ? 體內(nèi)法 ? 體外法 ? 脾細(xì)胞和骨髓細(xì)胞混勻 ? 離心 ? 沉淀滴加 50%的 PEG ? 靜置 90秒 ? 滴加不含血清培液或 BSS 5－ 10ml ? 靜置 10分鐘 ? 細(xì)胞團(tuán)塊分散，加 HAT溶液 ，稀釋 ? 加入有飼細(xì)胞的多孔培養(yǎng)板 ? 2－ 3天半量換液， 7天后完成 細(xì)胞融合的選擇示意圖 1） HAT選擇系統(tǒng) ? HAT：是含一定濃度 次黃嘌呤（ H） 、 氨基喋呤（ A） 及 胸腺嘧啶核苷（ T） 的一種 選擇性培養(yǎng)基 ，其中三種成分與細(xì)胞 DNA合成有關(guān)。 單抗的特點(diǎn) ? ? ? ? ? 單抗的制備原理 ? ? 單抗的制備過程 ? ? ? ? ? ? 1）骨髓瘤細(xì)胞 ? 一般不分泌抗體 ? 能在體外無限繁殖和連續(xù)繼代培養(yǎng) ? 為 HPRT－ 或 TK－ 。 一、抗體的結(jié)構(gòu)與功能 二、 單克隆抗體的制備 ?雜交瘤技術(shù)： 將能夠產(chǎn)生抗體的 B淋巴細(xì)胞和具有無限增殖力的骨髓瘤細(xì)胞融合在一起，形成雜交瘤細(xì)胞。 ?3） 溫度敏感突變型 ?親本一： Kan＋， 37度 ?親本二：高溫敏感突變型， Kan－ ?雜種細(xì)胞能在高溫和含 Kan培養(yǎng)基生長。 注意事項(xiàng) ?1）介質(zhì)要求高 ?2）控制電壓的強(qiáng)度和時(shí)間 優(yōu)點(diǎn)： ?融合率高 融合率＝（融合組多核細(xì)胞的核數(shù)－對(duì)照組多核細(xì)胞的核數(shù) /對(duì)照組的全部細(xì)胞數(shù)） 100％ ?可在顯微鏡下定向誘導(dǎo)細(xì)胞融合 ?可直接挑選雜種
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