多糖分離純化及含量測定-文庫吧資料
2025-05-23 01:59本頁面
【正文】 所以流出液的純度高 。 在洗脫過程中 , 由于各種多糖在柱上進(jìn)行無數(shù)次的溶解和沉淀過程 , 最終將各種多糖分離開來 。用不同濃度乙醇水溶液 (如 80%, 60%, 40%, 20% ) 梯度洗脫 , 則不同多糖就依次洗脫出來 。 柱層析方法 ? 纖維素柱層析 ? 陰離子交換柱層析 ? 凝膠柱層析 ? 親和層析 纖維素柱層析 ? 柱中的載體是纖維素 。 當(dāng)溶液的 pH 值增高或加入硼砂緩沖液使糖的酸度增高 , 也會與中性多糖形成沉淀 。 如采用中空纖維超濾膜 , 對多糖去蛋白質(zhì)后的提取液通過超濾去除小分子雜質(zhì) 。 3. 多糖的純化 ? 超濾法 ? 季胺鹽沉淀法 ? 柱層析法 ? 色譜法 ? 其他方法 超濾法 ? 膜分離技術(shù) （ membrane separation technology， MST） 是一種高效分離技術(shù) ， 分離過程以選擇透過性膜作為分離介質(zhì) ， 通過在膜兩側(cè)施加某種推動力 （ 壓力差、 化學(xué)位差 、 電位差等 ） ， 使原料液中組分有選擇性的通過膜 。 ? 若多糖與色素結(jié)合 , 易被 DEAE 纖維素吸附 , 不能被水洗脫 , 這類色素可用 低溫氧化法脫色 ， 溫度較高下氧化易引起多糖的降解 。 三氟三氯乙烷法 ? 將多糖溶液與三氟三氯乙烷等體積混合 ， 低溫?cái)嚢?10 min 左右 ， 離心分離得上層水層 ， 水層繼續(xù)用上述方法反復(fù)處理幾次 ， 得無蛋白質(zhì)的多糖溶液 ， 此法效率較 Seavg 法高 ， 但溶劑沸點(diǎn)低 ， 易揮發(fā) ， 不宜大量應(yīng)用 。 ? 該法是在多糖水提液中滴加 5%～ 10%與多糖水提取液等體積的三氯乙酸 ， 混勻靜置過夜 ， 離心除去膠狀沉淀 ， 重復(fù)以上的操作直至溶液不再繼續(xù)混濁為止 ， 得無蛋白質(zhì)的多糖 。 ? 此法不能除去脂蛋白 ， 因?yàn)橹鞍兹苡诼确?。 ? 該法優(yōu)點(diǎn)是條件溫和 , 可避免多糖的降解 。 ? 一般按多糖水溶液的 1/5~1/4體積加入 。 ? 除蛋白的方法傳統(tǒng)上有 Sevage 法 、 三氯乙酸法 、 三氟三氯乙烷法 等 。 從而有利于多糖的提取 。 ? 動物 、 植物 、 微生物的細(xì)胞 ， 在外加電場作用下 ， 產(chǎn)生 橫跨膜電位 ， 絕緣的生物膜由于電場形成了微孔 ，通透性發(fā)生變化 ， 當(dāng)整個膜電位達(dá)到極限值 (約為 1V)時(shí) ， 膜破裂 ， 膜結(jié)構(gòu)變成無序狀態(tài) ， 形成細(xì)孔 ， 滲透能力增強(qiáng) 。 ? 微波輔助提取多糖和其他的萃取方法比較 ， 微波萃取效率高 ， 操作簡單 ， 且不會引入雜質(zhì) ， 多糖純度高 ，能耗小 ， 操作費(fèi)用低 ， 符合環(huán)境保護(hù)要求 ， 是很好的多糖提取方法 。 ? 在微波協(xié)助浸取過程中 ， 萃取劑種類 、 微波劑量 、 物料含水量 、 溫度 、 萃取時(shí)間及 pH值等都對萃取效果產(chǎn)生影響 。 ? 進(jìn)一步加熱 ， 導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部和細(xì)胞壁水分減少 ， 細(xì)胞收縮 ， 表面出現(xiàn)裂紋 。 物理強(qiáng)化法：微波輔助提取法 ? 微波 是指波長在 1mm到 1m范圍 （ 相對頻率為 300~ 300000MHz） 的電磁波 ， 介于紅外與無線電波之間 。 ? 超聲提取可極大地提高提取效率 , 節(jié)約溶劑 , 避免高溫對提取成分的影響 , 與常規(guī)提取法相比 , 具有提取時(shí)間短 、 產(chǎn)率高 、 無需加熱等優(yōu)點(diǎn) 。 ? 熱效應(yīng) 增大了有效成分的溶解速度 ， 這種熱效應(yīng)是瞬間的 ， 可使被提取成分的生物活性盡量保持不變 。 ? 超聲波提取是利用超聲波的 機(jī)械效應(yīng) 、 空化效應(yīng)及熱效應(yīng) 。 該法具有條件溫和 、 雜質(zhì)易除和得率高等優(yōu)點(diǎn) 。 酶解法：復(fù)合酶解法 ? 復(fù)合酶解法 采用一定比例的果膠酶 、 纖維素酶及中性蛋白酶 ， 主要利用纖維素酶和果膠酶水解纖維素和果膠 ， 使植物組織細(xì)胞的細(xì)胞壁破裂 ， 釋放細(xì)胞壁內(nèi)的活性多糖 ， 多糖釋放的多少和復(fù)合酶的加入量 、 酶解溫度 、 酶解時(shí)間 、 酶解 pH 值及料液比有直接的關(guān)系 。 ? 纖維素酶 則能特異性地降解纖維素 ， 使植物細(xì)胞的細(xì)胞壁破裂 ， 有利于多糖易從胞內(nèi)釋放 。 其中經(jīng)常使用的酶有蛋白酶 、 纖維素酶等 。 該法的缺點(diǎn)是設(shè)備復(fù)雜 ， 運(yùn)行成本高， 提取范圍有限 。 由于 CO2 的超臨界條件 （ TC＝ ℃ ，Tp＝ MPa） 容易達(dá)到 ， 常作為超臨界萃取的溶劑， 在壓力為 8～ 40 MPa 時(shí)的超臨界 CO2 足以溶解任何非極性 、 中極性化合物 ， 在加入夾帶劑后則可溶解極性化物 。 而且這種溶解能力隨著壓力的升高而增大 ， 提取結(jié)束后 ， 再通過減壓將其釋放出來 ，
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