蛋白質(zhì)分離純化及鑒定-文庫(kù)吧資料
2025-05-21 06:26本頁(yè)面
【正文】 a. 如圖裝好層析裝置，打開(kāi)下端出口，使溶液流出至剛好達(dá)到凝膠膠面 b. 沿柱壁緩慢加入 2ml樣品，打開(kāi)下端出口，使樣品溶液流出至剛好達(dá)到凝膠膠面，再取少量起始緩沖液洗滌柱壁。 c. 用 35倍柱床體積的起始緩沖液走柱，使交換劑充分平衡，柱床穩(wěn)定。 b. 將平衡好的凝膠攪勻，連續(xù)傾入柱中，待其自然沉降至1/4~1/3高時(shí)打開(kāi)下端出口，讓溶劑慢慢流出，繼續(xù)侵入凝膠至沉降到所需高度。 d. 平衡： 用起始緩沖液浸泡凝膠，直至凝膠液pH與起始緩沖液相同。 b. 堿洗： 用 M NaOH 溶液浸泡半個(gè)小時(shí)，然后用蒸餾水洗至中性。? 凝膠過(guò)濾層析法 ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳 蛋白質(zhì)分離純化及鑒定 凝膠過(guò)濾層析法 1. 試驗(yàn)原理 利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來(lái)進(jìn)行分離。 凝膠層析的原理 Kd=(VeVo)/Vi 優(yōu)點(diǎn) a. 條件溫和 b. 操作簡(jiǎn)便 c. 損失少回收率高 d. 層析柱可反復(fù)使用 2. 凝膠及凝膠柱的選擇 根據(jù)不同分子量選擇不同凝膠 a. Sephadex: 交聯(lián)葡聚糖 G10， 15， 25， 50，75， 100， 150， 200；得水值 X 10 b. Sepharose：瓊脂糖凝
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