蛋白質(zhì)分離純化及鑒定(已修改)
2025-05-29 06:26 本頁面
【正文】 ? 凝膠過濾層析法 ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳 蛋白質(zhì)分離純化及鑒定 凝膠過濾層析法 1. 試驗原理 利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進行分離。 凝膠層析的原理 Kd=(VeVo)/Vi 優(yōu)點 a. 條件溫和 b. 操作簡便 c. 損失少回收率高 d. 層析柱可反復(fù)使用 2. 凝膠及凝膠柱的選擇 根據(jù)不同分子量選擇不同凝膠 a. Sephadex: 交聯(lián)葡聚糖 G10， 15， 25， 50，75， 100， 150， 200；得水值 X 10 b. Sepharose：瓊脂糖凝膠 BioGel A c. BioGel P：聚丙烯酰胺凝膠分子篩 d. Sephacryl：用 N， N亞甲雙丙烯酰胺交聯(lián)的葡聚糖凝膠 凝膠柱的選擇 3. 凝膠的前處理 a. 溶脹： 稱取適量凝膠干粉，用約 10倍蒸餾水浸泡 24小時以上，待凝膠充分溶脹后，傾去上層懸浮物及蒸餾水。 b. 堿洗： 用 M NaOH 溶液浸泡半個小時，然后用蒸餾水洗至中性。 c. 酸洗： 用 M HCl 溶液浸泡半個小時，然后用蒸餾水洗至中性。 d. 平衡： 用起始緩沖液浸泡凝膠，直至凝膠液pH與起始緩沖液相同。 a. 將層析柱垂
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