表達產(chǎn)物的分離純化-文庫吧資料
2025-05-22 06:06本頁面
【正文】 分子濃度 離子強度 pH值 （四）凝膠層析 凝膠層析的基本原理 凝膠介質(zhì)的基本性質(zhì) 凝膠介質(zhì)的選用原則 凝膠層析的基本操作 凝膠層析的基本原理 凝膠層析是以有一定孔徑范圍的多孔凝膠為固定相，對混合物中各組份按分子大小進行分離的層析技術(shù)，又稱 分子篩 。 為達滿意的分離效果 ， 進樣量一般為介質(zhì)交換容量的 1020%。 層析柱平衡 平衡緩沖液的用量至少為柱體積的 2倍； 平衡緩沖液的流速可略高于正常操作流速； 平衡終點以流出液的離子濃度、導(dǎo)電性、 pH值與緩沖液一致為準(zhǔn)，其中 pH值最重要。 1 2 3 4 6 7 8 9 10 5 pH + 蛋 白 質(zhì) 凈 電 荷 等電點 吸附陰離子交換劑 吸附陽離子交換劑 pHpI（ +） pH=pI（ 0） pHpI（ ） 對 pI=5的某蛋白質(zhì)： 在 ，蛋白質(zhì)為陰離子， 首選 DEAE纖維素。 酸性物質(zhì) ：用陰離子交換劑分離。 常用的離子交換葡聚糖： C后面的數(shù)字 = 凝膠吸水量 ? 10 C25：表示 1g干燥的凝膠可吸水 DEAESephadex A25 QSephadex A25 DEAESephadex A50 QSephadex A50 CMSephadex C25 SP Sephadex C25 CMSephadex C50 SP Sephadex C50 陽離子型： 陰離子型： 4）離子交換瓊脂糖 CMSepharose 是攜帶 DEAE或 CM基團的 Sepharose CL6B，具有硬度大 、 性質(zhì)穩(wěn)定 、 流速好 、 分離能力強等優(yōu)點 ， 受 pH和離子強度影響引起的膨脹和收縮效應(yīng)小 ， 外形和體積穩(wěn)定 。 優(yōu)點： 2） 電離基團在母體上取代程度高 、 交換容量大 、裝柱方便 、 流速快 。 3）離子交換葡聚糖 是葡聚糖經(jīng)環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)后形成的 、具有多孔三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 、 離子交換功能基團的多糖衍生物 。 2）離子交換纖維素 是攜帶功能基團的 纖維素衍生物 ， 有松散的親水性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較大表面積 ， 大分子可自由通過 ， 對蛋白質(zhì)等 生物大分子 的交換容量比離子交換樹脂大 。 常用的離子交換劑 1）離子交換樹脂 常見的是含酸性或堿性基團 、 人工合成的聚苯乙烯 二乙烯苯不溶性高分子化合物 。 pH降低時，電離率逐漸降低，離子 交換能力逐漸減弱。 帶負電荷，結(jié)合帶正電荷的蛋白質(zhì) 強酸型 弱酸型 強離子交換劑： 弱離子交換劑： 電離率受 pH影響很大 ， 離子交換作用的pH范圍窄 。 5） 不同蛋白質(zhì)與離子交換劑之間形成離子鍵的數(shù)目不同 ， 即結(jié)合力大小不同 ， 選擇適當(dāng)?shù)南疵摋l件 （ 如 改變離子強度 ） ， 可將混合物中的成分逐個洗脫下來 。 3） 若有兩種以上成分吸附在離子交換劑上 ， 各成分被洗脫的可能性取決于各自反應(yīng)的解離常數(shù) 。 陽離子交換層析 離子交換劑的基本性質(zhì) 1） 亦稱離子交換介質(zhì) ， 為不溶性高分子化合物 ，如樹脂 、 纖維素 、 葡聚糖 、 瓊脂糖等 。 （三）離子交換層析
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