【正文】 B、薄層色譜的點樣技術(shù) 點樣是薄層色譜的第一步，也是關(guān)鍵的一步，它 既關(guān)系到能否得到可以重現(xiàn)的薄層色譜，也關(guān)系到定量測定結(jié)果的準(zhǔn)確與否，因為不良的點樣是測定誤差的最主要的來源。因此供試液的凈化就顯得更為必要。常常由于相互干擾或背景污染而難以得到滿意的分高效果，甚至難以辨認(rèn)，尤其成方制劑更是如 此．所以在許多情況下為了得到一個較為清晰的色譜。 A．樣品的預(yù)處理及供試液的制備 一般認(rèn)為薄層色譜所用固定相（薄層板）可即用即棄，不怕供試液中雜質(zhì)的污染，因而樣品無需凈化精制。 ③ 影響薄層色譜分析的主要因素 常規(guī)薄層色譜因為是一種 敞開系統(tǒng) 的色譜技術(shù)，與柱色譜的區(qū)別之一是除材料及器材以外，外界環(huán)境條件對被分離物質(zhì)的層析行為影響很大，分離機(jī)制也很復(fù)雜；操作技巧也明顯的影響色譜質(zhì)量；為了 充分發(fā)揮薄層色譜技術(shù)在中藥分析方面的優(yōu)勢，提高色譜的分離度和重現(xiàn)性，注意控制影響色譜質(zhì)量的因素是非常重要的。浸漬法板面顯色均勻是其優(yōu)點，但有的樣品經(jīng)試劑浸漬后斑點容易被浸潤擴(kuò)散，則不適用。 展開劑要求新鮮配制，如需分層則按規(guī)定要求放置分層后，分取需要的一相（上層或下層）各用。多數(shù)品種展距 7～9cm 已夠，少數(shù)需用長度為 15或 20cm 的板；展開可在 10cm 以上。一般的自制硅膠 G薄層板，板面的牢度不夠，定量測定時需特別注 意小心點樣，不要使原點部分的板面破損。 B 點樣 中國最大的管理資源中心 第 12 頁 共 24 頁 除另有規(guī)定外，點樣用的定量微升毛細(xì)管（或其他符合要求的點樣工具）按規(guī)定吸取溶液后，以垂直方向小心接觸板面使成圓點狀，點樣基線與底邊的距離，視所用板的大小而定，如采用長度為 10cm 的板，點樣距離底邊以 1cm 為宜，點間距離視情況為 或 2cm，原點直徑應(yīng)不大于 3mm；如樣品容量較大，或為了改善分離度，也可點成寬約 2～ 3mm 不同長度的條帶。 預(yù)制薄層板分常規(guī)薄層板及高效板兩種，由于商品供應(yīng)來源不一，需注意并記錄生產(chǎn)廠家及生產(chǎn)批號，必要時需測定板效，以保證較好的重現(xiàn)性。涂布好的薄層板于室溫下在水平臺上晾干，再在 105～ 110℃ 活化約 30分鐘，置干燥器中備用。須注意的是不同廠家不同批號的硅膠 G 加水量及研磨時間要求有所不同，如加有其他改性劑更是如此。 薄層掃描儀不僅可以進(jìn)行原位定量，薄層掃描全圖譜對定性鑒別也能提供有用的信息。浸漬槽可用適當(dāng)?shù)牟Ａ髅蟠?。薄層掃描定量測定，顯色劑可控制噴灑的數(shù)量和噴霧的壓力。涂布顯色劑有噴霧法和浸漬法。 用不合格的玻璃器皿如生物標(biāo)本缸等不能 保證展開的質(zhì)量。雙槽展開箱具有節(jié)約溶劑、減少污染、便于預(yù)平衡及控制展開條件等優(yōu)點。選用點樣器材和輔助設(shè)備應(yīng)注意器材本身的質(zhì)量。對點樣用的微升毛細(xì)管的要求是標(biāo)示容量準(zhǔn)確，管端平整光滑，管壁潔凈，液流通暢，無堵塞，無污染，商品最常用的是 Drummond Scientific Co．（美國）的產(chǎn)品，也可選用 色譜用微量注射器（應(yīng)選用針尖平頭適合薄層點樣的）。涂布的厚度有固定厚度（如 250μm ）或可以調(diào)節(jié)的兩種。 B 涂布器 應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。 最常用的吸附劑通常是加有石膏作粘合劑的商品硅膠 G，或加有熒光劑的硅膠 GF254，有的另加其他粘合劑如羧甲基纖維素鈉以加固薄層板面；為了達(dá)到更好的分離的品種要求使用加有酸（如硼酸），堿（加氫氧化鈉）或緩沖溶液等薄層板。 附：薄層色譜規(guī)范化的基本技術(shù)要求 由于中藥材及中藥制劑的鑒別采用薄層色譜法比較普遍，為了提高試驗的重現(xiàn)性及分離度，下列的技術(shù)要求可作為設(shè)計和進(jìn)行薄層色譜試驗時的參考。尤其在用其他鑒別手段均無效時，可以考慮 采用。如以出峰的相對保留時間作為鑒別特征時，必須提供氣相色譜中的該峰的特征參數(shù)，確證無誤，方可成立。如樣品中含有多種揮發(fā)油，需注意色譜的分離度能將各主要組分分開，以免作出模糊的或錯誤的判斷。 氣相色譜適宜于制劑中含有揮發(fā)性成分的藥材的鑒別，如冰片、薄荷、麝香（麝香酮），丹皮（丹皮酚），以及以揮發(fā)油為主的藥油類制劑。實驗條件應(yīng)有二個以上不同選擇性的展開劑，如均能證明供試品中的欲鑒別成分與對照品的層析行為一致，再從中選取較好的條件列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的正文中．如用對照藥材，要求供試品的色譜與對照品的色譜的主要斑點能一致。固液萃取所用的介質(zhì) 中國最大的管理資源中心 第 10 頁 共 24 頁 常見的有硅烷基化硅膠（ C－ 18）小柱、硅膠小柱、氧化鋁小柱、大孔樹脂柱、離子交換樹脂柱、硅藻土小柱等，可以有選擇的使用。不同劑型所加添加劑也互不相同，供試液的制備就不可能用同一種方法，如口服液或糖漿劑既是液體制劑，又含有較大量的糖，供試液的制備就不應(yīng)完全照搬不加糖的固體劑型（如片劑），這時萃取方法固然不同，而且除糖也就成為供試液制備要考慮的主要問題。如在多味藥材組成的復(fù)方制劑中含人參皂甙的藥材不少，有的品種由于眾多成分的嚴(yán)重干擾，鑒別人參皂甙確有困難時，可采用水解后鑒別人參二醇或人參三醇的辦法。供試液的制備不僅要考慮多種藥味所含成分的相互干擾和影響 ，還要考慮到不同工藝和不同劑型各自的特點，譬如一個制劑中含人參同時又含有黃芪，在設(shè)計人參皂甙薄層鑒別時就應(yīng)考慮到黃芪皂甙對它的影響，不論在供試液制備還是展開劑的選擇都要考慮周到。點樣、展開、顯色等均需符合規(guī)范化要求。目前，最多應(yīng)用的還是以手工鋪制薄層板或預(yù)制板為主的常規(guī)薄層色譜，而且用的最多的是硅膠 G 板（或另加羧甲基纖維素鈉作粘合劑），黃酮類和酚類化合物也可選用聚酰胺板，氨基酸類也可用纖維素板，有條件的應(yīng)逐步使用質(zhì)量可靠的預(yù)制板。由于復(fù)方制劑成分比單一的藥材或單味中藥制劑復(fù)雜，也應(yīng)注意鑒別的專屬性，特別是 特征 成分采用通用顯色劑得到的色斑或是一般的熒光斑點，或在紫外光 254nm 燈觀察硅膠 GF254 薄層板在熒光背景下的暗色吸收斑點 時，必須有足夠的試驗結(jié)果確證具有良好的重現(xiàn)性和專屬性。至少供試液應(yīng)經(jīng)預(yù)處理，并需進(jìn)行陰性對照試驗，確證沒有干擾，而且確有鑒別意義時方可采用。 復(fù)方制劑所含 成分更為復(fù)雜，相互干擾也更為嚴(yán)重。基本要求和基本情況可參見中藥材的有關(guān)部分。 （ 2）一般理化鑒別 應(yīng)首先選擇處方中的主要藥味，即 君藥 和 臣藥 中的有效成分，如有效成分尚不明確的也可鑒別其特征成分，但選擇特性成分應(yīng)經(jīng)多方面的比較試驗加以確定。 C．碳酸鈣結(jié)晶：一般以 鐘乳體 形狀存在。觀察其大小形狀、臍點有無及其位置，層紋是否明顯。萌發(fā)器官有為（萌發(fā)溝）及孔（萌發(fā)孔）兩種，其形狀、數(shù)目、位置、大小是花粉分類的依據(jù)。花粉粒大小除圓形只需測量直徑外，一般需分別測量極軸及赤道軸長度。 中國最大的管理資源中心 第 9 頁 共 24 頁 需分別描述立體形狀，極面觀、赤道面觀的輪廓．立體 形狀通常以極軸為滾動軸的形狀，常見的有扁球形、球形或類圓球形、近球形、長球形等。 ⑾ 花粉粒。腺毛注意腺頭部和柄部的細(xì)胞數(shù)、腺鱗的頭部細(xì)胞均系偶數(shù)型的對稱式排列，還應(yīng)注意生于細(xì)胞間隙之間的間隙腺毛。多細(xì)胞非腺毛注意單列性和多列性的排列的方式，星狀毛注意輻射狀或疊生狀的排列形狀。其組成細(xì)胞和形態(tài)及其分布情況是重要的特征。毛茸是花類、葉類藥材的重要顯微特征。注意其單個、成群、成帶的散在情況，胞腔內(nèi)有否內(nèi)含物（淀粉位、草酸鈣結(jié)晶）。 ⑨ 石細(xì)胞。 晶纖維也稱晶鞘纖雄，注意纖維四周含晶細(xì)胞的壁有否增厚，其結(jié)晶的形狀大部分是方晶也有少數(shù)為簇晶。木質(zhì)部纖維，常見的有纖維管胞和韌型纖維兩類。 ⑧ 纖維。注意單個或成群的散在情況，量取其直徑，觀察壁增厚的形式（有環(huán)紋、螺紋、梯紋、網(wǎng)紋和緣紋孔等）。觀察時注意區(qū)分并可用 20％醋酸溶液一滴加熱至近干，趁熱加蘇丹 Ⅲ 乙醇液，稍放置，加甘油乙醇液蓋片后觀察被染成紅橙色的乳汁管。 ⑥ 乳汁細(xì)胞和乳汁管。分泌揮發(fā)油的腔室又稱油室，注意其生成方式（有裂生、溶生、裂溶生）。 ⑤ 分泌細(xì)胞和分泌腔。 ④ 粘液細(xì)胞。 ③ 木栓組織。 ② 表皮保護(hù)組織。觀察其壁有否增厚，有否交叉的紋理。 注意細(xì)胞有無淀粉粒、草酸鈣結(jié)晶等內(nèi)含物，以及內(nèi)含物排列情況。注意細(xì)胞的大小或排列。 細(xì)胞內(nèi)含物亦按《中國藥典》附錄有關(guān)檢定法對淀粉粒、脂肪油、揮發(fā)油或樹脂、菊糖、粘液、草酸鈣結(jié)晶、碳酸鈣結(jié)晶（鐘乳體）、硅質(zhì)進(jìn)行鑒定。 需要觀察單個管胞、導(dǎo)管、纖維、石細(xì)胞的完整形狀時，可根據(jù)《中國藥典》現(xiàn)行版附錄有關(guān)的組織解離法解離后觀察。每次測量記下數(shù)據(jù)，并分析數(shù)據(jù)的最小量值和最大量值和多見量值。 裝片后，在顯微鏡下觀察要有次序，可以先左后右、先上后下的次序，全部看遍，不能跳躍式觀看。 加水合氯醛試液加熱透化時，注意溫度不能過高，以防水合氯醛試液沸騰使組織碎片內(nèi)帶入氣泡。包衣材料事先應(yīng)洗去或刮凈。水丸可粉碎后直接取樣，蜜丸、濃縮丸半浸膏片（含有生藥粉末）和混懸性沖劑可事先加水?dāng)嚢柘礈?，離心取沉淀裝片。如黃連有黃連、三角葉黃連或云連三個來源，而前二種均含有石細(xì)胞，云連沒有石細(xì)胞，故不能將石細(xì)胞作為黃連的顯微特征。經(jīng)制作 5 張片子均能察見該顯微特征。某一粉末藥材的某些主要特征在成方制劑中有干擾時，可以選擇次要特征。如左金丸由黃連、吳茱萸兩味藥組成。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中顯微鑒別內(nèi)容應(yīng)按藥典的格式和術(shù)語描述，每味藥的顯微特征用句號分開。 鑒別方法一般包括顯微鑒別，一般理化鑒別及色譜鑒別。 中國最大的管理資源中心 第 7 頁 共 24 頁 （ 15）橡膠膏劑 傷濕止痛膏：本品為淡黃綠色至淡黃色的片狀橡皮膏；氣芳香。 浸膏 甘草浸膏：本品為棕褐色的固體，有微弱的特殊臭氣和持久的特殊甜味；遇熱軟化，易吸潮。 （ 12）酊劑 顛茄酊：本品為棕紅色或棕綠色的液體；有微臭。氣特異，味咸。 （ 9）滴丸劑 滿山紅油滴丸：本品為黃棕色的滴丸；有特異香氣。 口服液一般顏色較深，也難以達(dá)到透明或澄明。 （ 8）合劑 小建中合劑：本品為棕黃色的液體；氣微香，味甜、微辛。 （ 6）煎膏劑（膏滋） 二冬膏；本品為棕黃色稠厚的半流體；味甜、微苦 。 （ 4）沖劑 午時茶沖劑：本品為棕黃色的顆粒；氣微香，味甜、微苦。 （ 3）片劑 牛黃解毒片：本品為素片或包衣片，素片或除去包衣后的片芯顯棕黃色；有冰片香氣，味微苦、辛。 2．蜜丸 艾附 曖宮丸；本品為深褐色至黑色的小蜜丸或大蜜丸；氣微，味甘而后苦、辛。 （ l）丸劑 1．水丸 沉香化氣丸：本品為灰棕色至黃棕色的水丸；氣香，味微甜、苦。有的中藥制劑在貯藏期間顏色會變深，因此可根據(jù)實際觀察情況規(guī)定幅度。書寫時顏色、形態(tài)后用分號（；）。片劑、丸劑如有包衣的還應(yīng)描述除去包衣后的片芯、丸芯的顏色及氣味，硬膠囊劑應(yīng)寫明除去膠囊后內(nèi)容物的性狀。 4．性狀 一種制劑的性狀往往與投料的原料質(zhì)量及工藝有關(guān)，原料質(zhì)量保證，工藝恒定則成品的性狀應(yīng)該是基本一致的，故質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定制劑的性狀，能初步反映其質(zhì)量狀況。如為省級炮制規(guī)范中收載者，應(yīng)按省級藥品標(biāo)準(zhǔn)要求補(bǔ)充相應(yīng)申報資料。實驗應(yīng)用時，可按比例增減折算。處方的總量一般在 500～ 1500g范圍內(nèi)。 （ 3）處方中凡需炮制的藥材，均需用括號注明，與藥典方法不同的，應(yīng)另加注明。地方藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的品種與國家藥品標(biāo)準(zhǔn)名稱不同，而來源相同的，應(yīng)采用國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的名稱；地方藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的品種與國家藥品標(biāo)準(zhǔn)名稱相同來源不同的，應(yīng)另起名稱；國家藥品標(biāo)準(zhǔn) 未收載的藥材，可采用地方藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的名稱，并注明出處。 1．名稱、漢語拼音、拉丁名：按《補(bǔ)充規(guī)定》附件十和衛(wèi)生部下發(fā)的《中藥命名原則》制定。 （二）成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)必須在處方（藥味、用量）固定和各組份質(zhì)量穩(wěn)定、制備工藝穩(wěn)定的前提下，方可制訂。 有些制劑確因處方藥味多、干擾大，或擬測定藥味含量極少，但不屬于實驗設(shè)計不合理或操作技術(shù)問題所致，含量測定困難，成品未收載此項者，可以暫時對藥材（主藥之一）規(guī)定含量測定項目，間接控制成品質(zhì)量。 如成品中收載的檢驗項目歸屬于某藥材，而該藥材品種雖收載于法定標(biāo)準(zhǔn)中，但未列入該檢驗項目者，應(yīng)補(bǔ)有關(guān)項目。若原