20xx年醫(yī)學(xué)專題—流式細(xì)胞儀原理和一般用法(參考版)
2024-11-15 05:37本頁面
【正文】 謝謝大家,第五十四頁，共五十四頁。使用對照組樣本作陰性對照（與其他實(shí)驗(yàn)中對照組含意相同，但此時(shí)仍需使陰性對照初始化儀器）。算術(shù)定義的平均值=（V1+V2+V3。ngd249。液柱與入射的激光束垂直相交，相交點(diǎn)稱為測量區(qū)。ir243。 xie)大家！,第五十三頁，共五十四頁。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。)方案分析,了解流式儀胞儀各參數(shù)(cānsh249。n fā)經(jīng)驗(yàn),復(fù)雜(f249。ng)成人外周血淋巴細(xì)胞CD4/CD8/CD3,第五十頁，共五十四頁。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),例：檢測正常(zh232。)應(yīng)用放大模式：線性或?qū)?shù)（如指標(biāo)相差不大，使用線性放大，如：SSC、FSC；一般熒光參數(shù)使用對數(shù)放大） 靈活運(yùn)用設(shè)門（Region和Gate）的邏輯關(guān)系及顏色示蹤功能，可使檢測結(jié)果更為明了 合理選擇不同的熒光素標(biāo)記試劑，以最少的投入獲取最多的信息,流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十九頁，共五十四頁。后者往往比前者更有意義 檢測時(shí)，靈活(l237。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),技巧三：檢測(jiǎn c232。,流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十八頁，共五十四頁。qiǎo)二：陰性或陽性對照,陰性對照作用：調(diào)節(jié)PMT電壓；設(shè)立陰、陽性界線 使用抗體相應(yīng)同型熒光免疫球蛋白作為陰性對照，注對照及抗體需出自同一廠家（檢測一過性樣本中的某些指標(biāo)(zhǐbiāo)） 使用對照組樣本作陰性對照（與其他實(shí)驗(yàn)中對照組含意相同，但此時(shí)仍需使陰性對照初始化儀器） 對與非抗體染色，如各類核酸染料或探針：PI、ANNEXINV。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。nyā)依次尋找各細(xì)胞群。如尋找淋巴細(xì)胞，可首先調(diào)低FSC/SSC電壓(di224。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),技巧一：定位目標(biāo)(m249。),樣本染色及溶血過程處理完后應(yīng)立即上機(jī)檢測 打開流式細(xì)胞儀 (選擇進(jìn)行質(zhì)控程序） 打開應(yīng)用軟件并選擇相應(yīng)(xiāngyīng)的方案或新建方案 加載或重新調(diào)節(jié)各參數(shù) 上樣檢測,流式細(xì)胞儀使用一般方法及技巧,第四十六頁，共五十四頁。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。),FL2未染色(rǎns232。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。我們通常按照細(xì)胞聚集區(qū)的中心點(diǎn)來計(jì)算，但實(shí)際的原理是按細(xì)胞團(tuán)的平均值來計(jì)算。因此斜率為0.68/3.9=17.43，因此FL1的補(bǔ)償后平均值為FL117.43%FL2=0.6817.43%*3.9=0.0023，它的右側(cè)區(qū)域應(yīng)該在117.43%*3.9=0.32，左側(cè)區(qū)域應(yīng)該在0.317.43%*3.9=3.79，因?yàn)槭秦?fù)數(shù)，就自動(dòng)歸為0.1了，如果(rn fā)經(jīng)驗(yàn),未做補(bǔ)償(bǔch225。,第四十二頁，共五十四頁。ngdi233。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。 sh249。 sh249。h233。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過(chāogu242。 2.幾何定義的平均值。nsh249。n fā)經(jīng)驗(yàn),什么(sh233。,第三十九頁，共五十四頁。 4.解除(jiěch 2.被定義的子集數(shù)據(jù)將被顯示。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),什么(sh233。,第三十八頁，共五十四頁。,使感興趣的簇獨(dú)立。ng)中限定一個(gè)區(qū)域或范圍作為靶區(qū)域或范圍叫做Region。n me)是Region？,用戶在顯示的圖形(t,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。 與X軸/Y軸平面900垂直相交，Z軸 表示數(shù)量累計(jì)，相同強(qiáng)度的光信號在同一橫/縱坐標(biāo)點(diǎn)（X/Y軸通道）內(nèi)向Z軸方向累計(jì)。)顯示。)分析）,橫坐標(biāo)，X軸 表示光強(qiáng)度，強(qiáng)度高的光信號靠右側(cè)(y242。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。 縱坐標(biāo)，Y軸 表示數(shù)量累計(jì)，相同強(qiáng)度的光信號在同一橫坐標(biāo)點(diǎn)（通道）內(nèi)向Y軸方向累計(jì)。)分析）,橫坐標(biāo)，X軸 表示(biǎosh236。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。)41年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),數(shù)據(jù)顯示(xiǎnsh236。bāo),第二個(gè)細(xì)胞,最后一個(gè)細(xì)胞,第三十四頁，共五十四頁。n fā)經(jīng)驗(yàn),參 數(shù) FSC/SSC/熒光(y237。nxī)： 文本信息：,第三十三頁，共五十四頁。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。 數(shù)據(jù)：在文本信息中存儲的數(shù)值的特殊格式。ngt224。n)結(jié)構(gòu),存儲于3或4個(gè)片段中 文件頭信息：用于鑒別FCS文件，包含鑒別文本文件片段的數(shù)值。n fā)經(jīng)驗(yàn),FCS文件(w233。)UNICODE文本 處理單個(gè)數(shù)據(jù)文件大于100MB,第三十一頁，共五十四頁。軟件執(zhí)行中可以通過預(yù)先協(xié)議采用32位FCS來提高差錯(cuò)檢測效果。,Partec Excellence in Flow Cytometry,超過41年的研發(fā)(y225。 。 在免疫學(xué)樣品中，細(xì)胞膜表面抗原的分布有時(shí)要差幾十倍甚至幾萬倍。)是線
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