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正文內(nèi)容

mtt法檢測細胞活力講解(參考版)

2024-10-05 14:43本頁面
  

【正文】 但由于不同細胞貼壁后面積差異很大,因此,在進行 MTT試驗前,要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線,確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間,以保證培養(yǎng)終止致細胞過滿 第二十四頁,共二十四頁。 〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕,對照孔〔細胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕。 內(nèi)容總結(jié) MTT法檢測細胞活力。 第二十二頁,共二十四頁。 ? 細胞密度偏大測出的吸光度也會偏大,細胞密度小吸光度也會偏?。涣硗飧毎麪顟B(tài)也有關系,細胞狀態(tài)不好的話,吸光度值也會低的;細胞數(shù)目少,或者是培養(yǎng)的時間短, OD值也會偏低。對于 DMSO,溶解后呈紫〔紅〕色, 490nm有最大吸收值 。 第二十一頁,共二十四頁。 參加 DMSO ? 在同一批實驗中最好不要更換 DMSO??梢暂p拍,或者傾斜一點幫助吸液,但前提是細胞貼壁要比較牢。 如何去除上清 ? 直接吸出:加 DMSO前要把液體吸掉,但培養(yǎng)液里的紫色結(jié)晶可能會吸去,可在這之前先用平板離心機離心 96孔板, 2024r, 5分鐘,然后吸掉上清 (如果是懸浮細胞,那么推薦此法 ,懸浮細胞要離心2500rpm MTT最好用圓底型 96孔板 ,去除上清時注意不要把下面的結(jié)晶顆粒吸掉 ,建議各孔吸棄 150160ul即可 )。所以要熟練鞋、快些上板。加樣器操作要熟練,盡量防止人為誤差。特別是新手, 20%的波動也是常見的,所以很可能是技術(shù)原因引起的,特別是種板技術(shù)一定要過關。 第十八頁,共二十四頁。 ? 細胞密度要根據(jù)不同細胞的特點來定。 ? 接種時最好按照預實驗摸索出的密度接種 , 且而細胞過密或者過少,增殖都會過快或者過慢,其增值率線性關系不佳。 關于細胞的接種 (鋪板 ) ? 細胞過了 30代以后就不要用了 。在呈色后,盡量吸凈培養(yǎng)孔內(nèi)剩余培養(yǎng)液。由于試驗本底增加,會試驗敏感性。 。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜。 第十六
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