細(xì)胞增殖mtt檢測經(jīng)驗(yàn)總結(jié)(參考版)
2025-03-26 12:03本頁面
【正文】 。這個(gè)原理在朗伯比爾定律中有解釋。檢測MTT還原的MTT在460630均有較好的吸收，如果你的酶標(biāo)儀是濾光片，可以選470 nm左右或630 nm左右的濾光片，如果酶標(biāo)儀有單波長，你可以在檢測前掃描一下吸收譜，選用最大細(xì)說波長檢測就是了，最大波長，大概在550nm附近，必要時(shí)加一個(gè)參比波長以扣除非特異性吸收。至于DMSO的體積差異不同為什么不影響檢測值已經(jīng)被數(shù)學(xué)證明了，在此我不多說，如果有人不明白我再證明給他看。提醒：如果你的細(xì)胞貼壁不好，此時(shí)的沉淀在棄去液體時(shí)易丟失，因此貼壁不好的細(xì)胞在點(diǎn)板時(shí)記得將96孔板用多聚賴氨酸處理處理，要么在棄液體時(shí)先用甩板機(jī)離心，再輕輕棄去液體。加入MTT后的反應(yīng)時(shí)間為34h，此時(shí)棄去各孔中的液體在加入200微升的DMSO。這些孔的SD也會(huì)狂大，既然如此，不如不用。因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過程中，邊孔的水分蒸發(fā)很快，培養(yǎng)液及里面的藥物會(huì)出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象，細(xì)胞的狀況就復(fù)雜了，有些人稱之為%26ldquo。點(diǎn)板時(shí)一定要將細(xì)胞消化成單個(gè)細(xì)胞，而且一定要混勻，最好用排槍，否則，MTT的SD會(huì)狂大！點(diǎn)板布局其實(shí)這一點(diǎn)很多人不懈一顧。注意：不要過分信賴細(xì)胞計(jì)數(shù)，因?yàn)榧?xì)胞計(jì)數(shù)的取樣量為20 微升左右，由于顆粒的分布不均勻，代表性是很差的。這時(shí)可以將細(xì)胞不進(jìn)行計(jì)數(shù)，將消化好的細(xì)胞混勻后（可能是10ml）直接在一個(gè)廢棄（最好進(jìn)行過無菌處理）的96孔板中依次加入180、100、50微升細(xì)胞，將細(xì)胞放置幾分鐘就會(huì)
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