mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力講解-wenkub
2024-10-05 14 本頁面
【正文】 液〔 5 mg/ml，即 %MTT〕，繼續(xù)培養(yǎng) 4 h ? 4〕每孔加三聯(lián)裂解液〔 10gSDS，異丁醇 5ml， 10M HCl 成 100ml〕過夜， 第二天早晨置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解。 懸浮細(xì)胞操作步驟 ： ? 1〕將細(xì)胞離心收集后，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度大約 1 104/ml，每孔先加細(xì)胞懸液90ul,相應(yīng)梯度的藥物每孔 10ul；共 100ul參加到 96孔板〔邊緣孔用 PBS填充〕。 5. 終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。 3. 5%CO2， 37℃ 孵育分別孵育 24小時(shí)后，倒置顯微鏡下觀察。 貼壁細(xì)胞操作步驟 1. 接種細(xì)胞：用 %胰蛋白酶消化單層培養(yǎng)細(xì)胞，用含血清的培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔 20243000個(gè)細(xì)胞接種于 96孔培養(yǎng)板中，每孔體積 90 ul。二甲基亞砜〔 DMSO〕能溶解細(xì)胞中的紫藍(lán)色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在 490nm波長處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，從而反映細(xì)胞的增殖情況。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力 甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 第一頁，共二十四頁。 ? 在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)， MTT結(jié)晶物形成的量與活細(xì)胞數(shù)成正比。 〔邊緣孔用 PBS或空白培養(yǎng)基填充〕。 第五頁，共二十四頁。 6. 每孔參加 100ul二甲基亞砜〔置搖床上低速振蕩 10min，使結(jié)晶物充分溶解。每板設(shè)對(duì)照。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 OD570nm測(cè)量各孔的吸光值。C避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/ml保存在 20度長期保存，防止反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。 100 % 第十頁，共二十四頁。 本卷須知 1． 選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。 第十三頁，共二十四頁。這樣，才能保證 MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。一定要多看文獻(xiàn)，參考別人的結(jié)果再定個(gè)比較大的范圍先初篩。在不同時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定 OD值，輸入 excel表，最
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