【正文】 gt。除此之外，建議每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽性樣品， 。 室內(nèi)質(zhì)控品對照 外部質(zhì)控品 可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。 “即刻法”只能在前20次內(nèi)使用，超出即可采用LJ質(zhì)控圖方法。 21 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 （2）當SI上限和SI下限有一值處于n2s～n3s值之間時說明該值在2s～3s 范圍，處于“告警”狀態(tài)。n2s時表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。 表1 SI值表 （1）當SI 上限 和SI 下限 amp。 計算SI上限值 和SI下限值。具體計算方法如下： 將質(zhì)控品的測定值從小到大排列：x1，x2，x3??xn（x1為最小值，xn為最大值）。 當出現(xiàn)失控時， 必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。 （2）失控（13S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)定性下降所致。 （1）告警（12S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。 質(zhì)控規(guī)則 實驗室在報告結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。 19 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 （4）控制限：由實驗室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均值和標準差來確定。一組S/CO值的標準差以s表示。為了統(tǒng)計學上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次（天）測得的外部對照質(zhì)控品的S/CO值計算平均值。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個臨時性的均值和標準差，當達到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的均值和標準差。 質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌、且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時，必須重新試驗。 室內(nèi)質(zhì)控品 為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽性。每 18 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 一次檢測臨床樣品時，必須有試劑盒內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。 7 質(zhì)量控制 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制 試劑盒內(nèi)部對照 試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照。 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗報告。 （3）符合HIV抗體不確定判斷標準，報告“HIV抗體不確定”，在備注中應(yīng)注明“24周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測。 （2）符合HIV抗體陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性”。 （1）符合HIV1抗體陽性判斷標準，報告“HIV1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。 17 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 HIV抗體篩查報告需由一名檢驗人員和一名審核者簽字。 6 結(jié)果報告 篩查報告 HIV抗體篩查試驗報告使用附表1（HIV抗體篩查檢測報告）。試劑盒的膜條上包被有HIV1/HIV2不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶標記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶, 按照試劑盒說明書判定標準，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。加入抗人IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況, 按照試劑盒說明書判定標準，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離 16 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 過的HIV抗原。WB采用間接法檢測樣品中的抗HIV1/HIV2特異性抗體。反應(yīng)時間在30分鐘以內(nèi)。 免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。反應(yīng)時間在10分鐘以內(nèi)。 免疫滲濾試驗：斑點ELISA和斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：均以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應(yīng)。PA試劑有兩種:同時檢測HIV1和HIV2抗體以及分別檢測HIV1和HIV2抗體。將HIV抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。一般可在10～30分鐘內(nèi)得出結(jié)果。有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA） 這類試驗采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標記的HIV抗原/抗體，加底物顯色，用酶標儀測定結(jié)果。 篩查方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 這類試驗可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品，ELISA多為HIV抗體檢測試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的方法及試劑。 14 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 對篩查及補充試驗對象均應(yīng)做好咨詢工作。替代檢測包括三種酶聯(lián)免疫試驗、三種快速試驗或酶聯(lián)免疫加快速試驗* * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群）、三種試劑均經(jīng)過使用地區(qū)中心實驗室評價。 補充試驗是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。 結(jié)果判定以試劑盒說明書為標準。 HIV抗體檢測的要點 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。 4 HIV抗體檢測的目的和要點 HIV抗體檢測的目的 HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。 3 HIV抗體檢測實驗室要求 應(yīng)符合國家對實驗室生物安全的有關(guān)要求。 2 規(guī)范性文件引用 《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準》（中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準，WS293有效版本）。適用于各級各類醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、檢驗檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機構(gòu)。 接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過重或者不符合接收要求，應(yīng)將樣品安全廢棄。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告實驗室負責人和上一級實驗室技術(shù)人員。 11 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 樣品的接收 樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實驗室內(nèi)、由經(jīng)過培訓(xùn)的工作人員打開，打開包裹時應(yīng)穿戴防護衣、戴口罩和防護眼鏡，在生物安全柜中打開，用后的包裹應(yīng)及時進行消毒。DBS和尿液樣品應(yīng)在室溫下（18～25℃）運送，可通過郵寄方式運送。 用于抗體檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運送用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定的樣品應(yīng)在室溫下（18～25℃）運送。 第三層容器：容納并保護第二層容器的運輸用外層包裝箱。 第二層容器：容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標記，標明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時間。送檢單應(yīng)標明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。 10 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 樣品的運送 全血、血漿的運送應(yīng)符合生物安全要求，參照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》(衛(wèi)生部第45號令,2006年2月1日執(zhí)行)。特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。如果用CD45設(shè)門，樣品保存不超過72小時。長期保存（一年以上）的樣本凍存條件、是否添加防腐劑等以產(chǎn)品說明書為準。 口腔黏膜滲出液樣品應(yīng)即刻使用，需要保存應(yīng)以產(chǎn)品說明書為準。 用于核酸檢測的血漿和血細胞樣品4天內(nèi)進行檢測的可存放于4℃，3個月以內(nèi)應(yīng)存放于20℃以下?？谇火つB出液應(yīng)采集口腔滲出液,不是唾液。 口腔黏膜滲出液：使用試劑盒提供的容器收集樣品。 尿液和口腔黏膜滲出液 9 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定。 于室溫下自然干燥至少4小時（潮濕氣候下至少干燥24小時），不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸。 用移液器從樣品管中吸取100μL抗凝全血（或血漿），對準濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。 濾紙干血斑 根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，用于檢測。 樣品采集后處理、保存、運輸?shù)臅r限和條件，因不同的檢測項目而異，應(yīng)參見不同檢測項目要求。 8 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 PBMC：使用淋巴細胞分離液，進行密度梯度離心，吸出PBMC層，置于合適的容器中，備用。 血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取5～10ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至無抗凝劑的試管中，室溫下自然放置1～2小時，待血液凝固、血塊收縮后再用1500～3000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。收集滴出的血液，備用。1歲以下兒童采用足跟部）。 樣品的采集和處理 血液 抗凝全血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻6～8次，備用。 尿液樣本準備好帶有唯一編碼的采尿管，并保留唯一編碼。干血斑濾紙應(yīng)使用具有資質(zhì)的產(chǎn)品。 采血前，先對試管或濾紙進行標記，核對后編碼?？谇火つB出液樣本應(yīng)使用試劑盒提供的專用采樣工具，尿液樣本建議使用可保持尿液穩(wěn)定的專用采尿管。檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標記是否一致，并注明樣品采集時間及唯一編碼。 淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞（PBMC）及全血可用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測和HIV1分離培養(yǎng)。 抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定。 6 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 3 樣品種類及相應(yīng)的用途 全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品可用于HIV抗體檢測。 《HIV1基因型耐藥檢測及質(zhì)量保證指南》，（中國疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。 《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴細胞檢測質(zhì)量及保證指南》（中國疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。......................................................................................................... 82 判定結(jié)果和解釋................................................................................................. 82 6 質(zhì)量控制 ..................................................................................................................... 83 附表1 HIV抗體篩查檢測報告 ......................................................................................... 84 附表2 HIV抗體確證檢測報告 ......................................................................................... 85 附表3 HIV1核酸檢測報告 ............................................................................................. 86 附表4 HIV抗體確證檢測報告（特定條件） ................................................................. 87 附表5 CD4+T淋巴細胞檢測報告 ..................................................................................... 88 附表6 HIV1耐藥基因型檢測報告 ................................................................................. 89 附表7 嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測報告 .................................................................... 90 5