【正文】 ? （ 2） 陽性對照藥應(yīng)注明生產(chǎn)單位。 ? ? （ 1） 受試藥物的來源 、 批號 、 制劑或提取物每 1g(lml)含提取物或生藥量 （ g或 ml） ， 以及含特殊輔料情況；試驗前有無預處理 ， 離體試驗或注射給藥注明可能影響試驗結(jié)果的因素 （ 如無機離子 、 pH等 ） 。 ? 簡要說明藥效學主要研究內(nèi)容及其結(jié)果 。對個別嚴重偏離的數(shù)據(jù)，即超過 3個標準差，分析可能的原因后，為排除個體對實驗結(jié)果的干擾，也可考慮廢棄不用 （十一）中藥新藥藥效學研究的申報內(nèi)容及對實驗結(jié)果的評估 ? 根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局 1999年 3月 12日發(fā)布 ， 從 5月 1日起施行的 《 新藥審批的辦法規(guī)定 ， 新藥 （ 中藥材 ） 或新藥 （ 中藥制劑 ） 申報項目表第 13項；與功能主治有關(guān)的主要藥效學試驗資料及文獻資料 ， 是評價新藥有效性 ， 決定能否開展人體試用 ， 進行臨床研究的重要依據(jù)之一 。如果試驗者隨意挑選數(shù)據(jù)，那就毫無科學性了。 ? （ 3） 等級資料 ， 可以認為是一種有序的計量資料 ， 它包括 ① 時反應(yīng)資料 ，如潛伏期 、 凝血時間 、 藥效持續(xù)時間等； ② 病變程度及臨床療效等按等級分組的資料 ， 如－ 、 +、 ++、 + + +或痊愈 、 顯效 、 好轉(zhuǎn) 、 無效和惡化等； ③ 兩端確毀數(shù)據(jù)不明的分組資料 ， 如血清滴度為：＞ 1： 1： 80、1： 160、 1： 320及＜ 1： 320等 ， 這些資料不宜用均數(shù)及標準差作常規(guī)的統(tǒng)計學分析 ， 目前主張用等比差值法 、 等級序值法 、 秩和法及 R分析等非參數(shù)統(tǒng)計分析 ， 尤其是后者 ， 能確定各個比較組的強或劣 ， 故為多用 。 ? （ 2） 量反應(yīng)資料 ， 又稱計量資料或定量資料 ， 這種反應(yīng)可表現(xiàn)為數(shù)量差異如體溫 、 血壓 、 尿量 、 咳嗽次數(shù) 、 肌肉收縮幅度 ， 以及血液生化測定數(shù)值等 。 機體對藥物回答只有 “ 是 ”或 “ 否 ” 兩種 ， 如死與不死 ， 翻正反射的存在或消失 ， 某種病理癥狀如驚厥 、 異常步態(tài) ） 出現(xiàn)或不出現(xiàn)等 。 ? 實驗數(shù)據(jù)處理大多求助于統(tǒng)計 ， 中醫(yī)藥實驗研究中所觀察或測量的數(shù)據(jù) ， 按機體對藥物的反應(yīng)從統(tǒng)計學角度可分為三類 。簡單明了是指結(jié)構(gòu)要簡單 ， 使人一目了然；層次清楚指內(nèi)容要按照邏輯合理安排 。 一般作圖時仍然要附有統(tǒng)計表 。 圖是用點 、 線 、 面的形式 ， 把事物之間的數(shù)量關(guān)系表示出來 。 統(tǒng)計表是把分析的事物 （ 如組別 ） 及其指標 （ 如試驗結(jié)果的數(shù)據(jù) ）用表格列出 ， 以便于計算 、 分析 、 對比 。 （十）實驗結(jié)果的處理 ? 實驗結(jié)束后 ， 對結(jié)果要進行數(shù)據(jù)處理和分析 ， 其目的主要是證實是否符合試驗設(shè)計的假說 ， 判斷結(jié)果的可靠性及準確性等 ， 并且經(jīng)過歸納 、 綜合 ， 找出內(nèi)在規(guī)律 。 主要用于四類新劑藥效的比較及評價 ， 以了解新藥 （ 新劑型 ） 在哪些方面優(yōu)于原劑型 。 根據(jù)需要 ，陽性藥可設(shè)一個或多個劑量組 。 要防止為了突出受試藥而選用療效差 、 不良反應(yīng)嚴重 ， 甚至即將淘汰的藥物 。 ② 合法性 ， 應(yīng)用 《 藥典 》 或部頒布標準收載 ， 或近來批準生產(chǎn)的合法藥物 。 如為中藥還要求功能及劑型相同 。 以選用化學藥品為佳 ， 比較受試藥的優(yōu)劣和特點 ，以選用同類中藥為佳 。 選擇適當?shù)膶φ账幨菧蚀_判斷試驗結(jié)果及藥效的重要依據(jù)之一 。是進行藥物有效性的測定。 例如 ， 溶媒本身有活性 （ 如乙醇 ） ， 基質(zhì)有促透皮吸收作用 （ 或含經(jīng)皮吸收促進劑 ） ， 則除設(shè)空白對照組外 ， 尚應(yīng)設(shè)輔料對照組 ， 以了解對藥效試驗的影響等 。 其目的是檢測試方法的可靠性 ， 防止假陽性 ， 以及評價造模是否成功 。 （九）藥效學研究的對照 ? 比較研究是科學實驗不可缺少的條件 ， 沒有比較 ， 就沒有區(qū)別 ，也就談不上科學性 。 有些實驗如抗感染體內(nèi)保護性試驗 ， 常采用預防與治療相結(jié)合的給藥方式 ， 即先給藥幾日 （ 次 ） ， 接種感染原后 ， 再給藥幾日 （ 次 ） 。 但對起效緩慢 、 溫和的受試藥物或迅速出現(xiàn)作用而持續(xù)時間短的指標 ， 一次性給藥或造模后給藥 ， 常難獲得預期結(jié)果 ， 只能先給藥再進行試驗 。 治療性給藥 ， 先制造動模型 ，然后觀察藥物的治療作用 。 ? （ 3） 給藥方式：有預防性給藥和治療性給藥 ， 或防治結(jié)合的給藥方式等 。 ? （ 2） 不同劑量的體現(xiàn)：原則上 ， 不同組間的高低 ， 灌胃給藥采用等容積不同濃度；皮膚外用藥不同濃度或不同面積或不同次數(shù) ， 而一般不宜用不同體積來體現(xiàn)；滴鼻 、 滴眼藥用等容積不同濃度等 。 大鼠禁食 （ 不禁水 ） 12~16h， 每次用量；灌胃一般為1~2ml/100g（ 體重 ） ， 最大不宜超過 5ml/只；腹腔注射 ；皮下和靜脈注射不超過 1ml/只；肌內(nèi)注射 。 如果容量過小 ，容易產(chǎn)生誤差；容量過大 ， 則動物難于耐受乃至死亡 ， 亦會給藥效觀察帶來困難 ， 如小鼠灌胃過多 ， 會產(chǎn)生匍匐少動 ， 與藥物的鎮(zhèn)靜作用混淆 。 但中藥粗制劑 ， 不適于注射給藥者 ， 可免作第二種給藥途徑的試驗 。 ? 為準確評價新藥的有效性 ， 各種試驗最好采用兩種給藥途徑 。 為此 ， 凡采用不同于臨床給藥途徑進行試驗時 ， 應(yīng)說明原因和選用給藥途徑的理由 ， 并分析試結(jié)果 ， 排除可能存在的干擾困素及假象 ， 充分估計不同給藥途徑可能產(chǎn)生的影響 ， 正確判斷試驗結(jié)果 。 應(yīng)注意有時注射給藥可產(chǎn)生與口服給藥不同的作用 ， 例如 ， 枳實 、青皮等含有對羥福林 ， 注射給藥可激動腎上腺素受體而產(chǎn)生升壓效應(yīng) ， 而口服時該成分易被堿性腸液破壞 ， 故無此作用 。 但所用制劑要符合注射的要求 ， 適當精制的粗制劑 ， 只能皮下 、 肌內(nèi)或腹腔注射 ， 而宜靜脈給藥 。 有時動物試驗采用臨床相同的給藥途徑確有困難者 ， 可根據(jù)具體情況采用其他給藥途徑進行試驗 。 （八）藥效學試驗的給藥途徑和方法 ? 不同的給藥途徑對藥物的作用 、 作用強度和時間 ， 以及其體內(nèi)過程等都有很大影響 ， 因此藥理研究應(yīng)盡可能與臨床應(yīng)用途徑一致 。 ? 特殊情況下 ， 可用等差級數(shù)分組 ， 尤其當藥物的安全范圍較小 ， 組距不能拉大 ， 而藥效作用又明顯時 。如果用雙對數(shù)坐標紙作圖 ， 將效應(yīng)強度改為幾率單位 ， 就會得到一條直線 。 尤其是三 、 四 、 五類藥有時難以做出明確的量關(guān)系 ， 則不宜強求 。 在心血管方面 ，人參既有增強心肌收縮力的作用 ， 此作用以三醇型皂苷為主；又有擴張血管的作用 ， 此作用以三醇型皂苷為主 。 例如 ， 人參中含有皂苷 、 多糖 、 有機酸和麥芽醇等多個活性成分 ， 其皂苷又有 20余個 ， 它們作用有所不同 。 特別是一 、 二類新藥及注射劑應(yīng)盡量找出明確的量效關(guān)系 ， 以提供更多的信息量 ， 使結(jié)果更為可靠 。 ? 每組試驗動物數(shù)，一般小鼠不得少于 10只，大鼠為 8只，貓、狗等為 4只以上，以避免個體差異和實驗誤差，以便進行統(tǒng)計學處理。 根據(jù)劑量與效應(yīng)的關(guān)系 ， 畫出劑量效應(yīng)曲線 。 ? ? （ 1） 劑量組：一般情況下 ， 各種試驗至少應(yīng)設(shè)置 3個劑量組 ， 以便迅速獲得關(guān)于藥物作用較完整的資料 ， 例如 ， 受試藥物有無作用 ， 作用強弱 ， 與劑量之間的關(guān)系等 。 特殊情況下 （ 如抗癌藥 ） ， 藥效試驗劑量可適當提高 ， 但不應(yīng)超過長期毒性試驗的高劑量 。 ? （ 4） 根據(jù)文獻估計劑量：文獻中相似藥物的用量 ， 若處方相似 ，提取工藝相似 ， 可作為參考 ， 估計出供試藥劑量范圍 。 保健食品功能試規(guī)定 ，劑量組中有一個劑量應(yīng)相當于人攝食量的 5~10倍 ， 一般前者指大鼠倍數(shù) ， 后者為小鼠倍數(shù) 。 以上劑量大致等于等效量 ，誤差允許達 1倍 。 動物試驗用量為人用劑量的數(shù)倍至幾十倍 。 ? （ 2） 根據(jù)臨床用量的體重計算：這是中藥藥理試驗中常用的方法 。 尤其對于一些安全系數(shù)小的藥物 ， 如抗癌藥 、 強心苷等藥物按體表面積計算比按體重用藥更為合理 ， 實驗誤差可以明顯縮小 。 其中一個重要的因素是動物個體小 ， 單位重量內(nèi)所占的體表面積大 ，因此 ， 如果用體表面積來測量則相對比較合理 。 ? 由于中藥與化學藥品不盡相同，后者的一些計算公式不完全適用，目前尚無公認的計算公式和方法，以下介紹幾種估算劑量的方法供參考選用。 尤其在離體試驗中 ， 藥物濃度和用量如不加限制 ， 可出限各種各樣的結(jié)果 ，從而會導致片面或錯誤的結(jié)論 。 （七）藥效學試驗的劑量 ? 在觀察一個藥物作用時 ， 應(yīng)該給動物多大的劑量是實驗開始時應(yīng)確定的一個重要問題 。 外用藥 ， 包括活劑 、 擦劑 、膏劑等 ， 以外用給藥方式為主 ， 可采用制劑或提取物給藥 。 粗制劑在試管內(nèi)給藥或離體試驗時 ，可以考虛用含藥血清 。 注射給藥及離體試驗 ， 尤其是靜脈給藥 ， 宜用水溶性高 、 精制的中藥制劑 ， 盡量去除雜質(zhì)及可能干擾試驗的因素 ， 要求控制在生理范圍內(nèi)或符合注射劑的要求 。 一般說 ， 提取物溶解性好 ， 含藥量高及相對穩(wěn)定 ， 給藥量容易控制和相對正確 ， 故多用之 。 但成品制劑內(nèi)含有輔料 （ 溶媒 、 基質(zhì) ） 等 。 ? 藥效試驗可用成品制劑或提取物 。 中藥成分復雜 ， 藥效各異 ， 組成復方并非藥物簡單相加 ， 所以對復方中藥一般應(yīng)復方提取 。對藥典內(nèi)未收載品種 ， 應(yīng)按 （ 新藥審批辦法 ） 規(guī)定 ， 完成并申報有關(guān)資料 。 手忙腳亂 的中藥材要經(jīng)過生藥學鑒定 ， 確定中藥品種 、 產(chǎn)地及藥用部位 。 因此 ， 處方 、生產(chǎn)工藝 、 質(zhì)量標準及劑型等尚未固定者 ， 不宜開展藥理學研究 ，其試驗結(jié)果也不能用作新藥藥學或毒性學的評價 。特定的實驗 ， 如為了觀察藥物的避孕作用 、 保胎作用以及對生殖期或圍產(chǎn)期的毒性等 ， 則應(yīng)選用雌性動物 。 大鼠參四氯化碳的敏感性雄性 雌性 ， 而對固醇類激素和巴比妥類則雌性 雄性 。 例如 ，激肽酶能增加雄性大鼠血清中的蛋白結(jié)合碘 ， 減少膽固醇水平；而對雌性大鼠 ， 則反使蛋白結(jié)合碘減少 。 例如 ， 有些慢性試驗 ， 觀察時間較長 ， 可選擇年幼 、 體重較小的動物；研究性激素對機體影響時 ， 一定要用幼年或新生的動物；制備四氧嘧啶 （ alloxan） 糖尿病模型和進行一些老年醫(yī)學的研究 ， 應(yīng)選用老年動物 。 常用動物性成熟年齡 ， 小鼠為 6~8星期 ， 大鼠 8~9星期 ， 豚鼠 6~10星期 ， 兔 4~5月 ， 貓 6~8月 ， 狗 6~8月 。 因此 ， 藥理學研究一般選用成年動物 ， 體重為小鼠 18~22g（ 或擴大到 16~25g） ， 大鼠 200g（ 150~250g） ， 家兔 2kg（ ~） ， 貓 2~3kg，狗 8~10kg， 猴 8~15kg。老年動物的代謝功能低下 ， 反應(yīng)不靈敏 ， 不是特別需要一般選用 。 ? 動物的解剖生理特征和反應(yīng)性隨年齡而有明顯的變化 ， 一般幼年動物比成年動物的敏感性要高 ， 這可能與抗體發(fā)育不健全 ， 解毒排泄的酶系尚未完全發(fā)育有關(guān) 。 因此 ， 動物的飼料 ， 實驗室及配套設(shè)施等 ， 應(yīng)盡量避免工作人員 、 實驗器材及實驗動物之間發(fā)生交叉污染 ， 盡量降低各種生物 、 化學及物理因素干擾實驗動物對藥物的正常反應(yīng) 。 ? 從事新藥研究的實驗室及其設(shè)施應(yīng)符合國家藥品監(jiān)督管理局的有關(guān)規(guī)定 。 例如 ， 有病動物容易中毒死亡；炎癥組織對腎上腺素的收縮血管作用極不敏感；有病或營養(yǎng)差的家兔不易制成動脈粥樣硬化模型；饑餓 、創(chuàng)傷動物易于進入體克；發(fā)熱動物代謝增加 ， 體溫升高 1℃ ， 代謝一般可增加 7%左右 。 ? 一般情況下 ， 健康動物對藥物和各種刺激的耐受量較大 ， 實驗結(jié)果穩(wěn)定 。安全性評價研究中使用的大鼠 、 小鼠應(yīng)符合無特定病原體 （ 即 SPF） 動物的標準 ， 豚鼠應(yīng)符合清潔級動物標準 。 為此 ， 藥理學研究一般應(yīng)采用清潔動物（ clean animal， CL） ， 宏觀世界要求在 CV的基礎(chǔ)上 ， 還須不帶有動物傳染病的病原體 ， 如脫胎換骨腳病 （ 鼠疽 ） 、 流行性腹瀉病毒 、 致死性腸道病毒等 。 普通動物 （ conwentional animal， CV） 是未經(jīng)積極的微生物學控制 ，普遍地飼養(yǎng)在開放衛(wèi)生環(huán)境里的動物 ， 但要求不帶有人獸共患病的病原體及體外寄生蟲 ， 如結(jié)核 、 痢疾 、 沙門菌感染 ， 皮膚真菌等 。 ? 實驗動物應(yīng)選用符合等級要求的健康動物 ， 并附有供應(yīng)單位的合格證書 。 而封閉群動物保持相當程度的雜合性 ， 避免了近交衰退的出現(xiàn) ， 為此其生活力 、 生育力都比近交系強 ， 具有繁殖率高 ， 可以大量生產(chǎn)等特點 ， 對各種刺激的平均反應(yīng) ， 有一定的穩(wěn)定性 ， 可以反映藥物的平均綜合療效 ， 遠優(yōu)于市售動物 ， 故為藥理學研究廣泛采用 。 ? 目前國內(nèi)外使用的實驗動物 ， 以小鼠為例 ， 大部分是近交系和封閉群 ，而在使用數(shù)量上 ， 封閉群動物遠遠超過近交系 。C3H雌鼠乳腺癌自發(fā)率達 90%， AKR小鼠白血病自發(fā)率達 65%。 DBA/2與 DBA/1小鼠對同一病毒（ 如 new castle 病毒 ） 的反應(yīng)完全不同 ， 前者引起肺炎 ， 而后者引起腦炎 。例如 ， C57BL